張春瑋，張?jiān)穑?恒，王亭亭，李克鑫，許冠龍，李克欽，韓明遠(yuǎn)，彭 軍，劉建柱

（1. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東泰安 271018；2. 山東德信生物科技集團(tuán)，山東惠民 251700；3. 中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部獸藥評(píng)審中心，北京 100081；4. 濟(jì)南鑫寶星動(dòng)物藥業(yè)有限公司，山東濟(jì)南 250022）

副豬嗜血桿菌病是由副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis，HPS）引起的豬多發(fā)性漿膜炎和關(guān)節(jié)炎，又稱革拉澤氏?。℅l?sser’s disease），其臨床癥狀主要表現(xiàn)為咳嗽、呼吸困難、消瘦、跛行和被毛粗亂等[1]。2周齡到4月齡間的所有豬群均可感染發(fā)病，但最常見于5～8周齡的保育仔豬，發(fā)病率一般為10.00%～15.00%，嚴(yán)重時(shí)死亡率可達(dá)50.00%[2]。2018年7月20日，山東省泰安市某豬場(chǎng)發(fā)生HPS感染病例，現(xiàn)從臨床癥狀、剖檢病變及實(shí)驗(yàn)室診斷等方面對(duì)該病例進(jìn)行總結(jié)。

1 發(fā)病情況

該豬場(chǎng)總飼養(yǎng)量為500頭。畜主于2018年7月13日從市場(chǎng)上購(gòu)進(jìn)仔豬250頭，平均體質(zhì)量為35 kg。仔豬購(gòu)進(jìn)3 d后開始發(fā)病，初期表現(xiàn)腹瀉。畜主隨即在飼料內(nèi)拌入氟苯尼考，并給予病仔豬肌內(nèi)注射青霉素G鈉，但未見效果。7月18日上午，畜主自行對(duì)120頭仔豬接種了3頭份豬瘟細(xì)胞苗，不但沒有控制病情，反而使豬群發(fā)病率和死亡率明顯增加，隨后于7月20日來診。

本次疫情共發(fā)病67頭、死亡48頭，發(fā)病率為26.80%（67/250），死亡率為19.20%（48/250），病死率為71.64%（48/67）。其中，來診前發(fā)病豬54頭、死亡35頭，來診后新發(fā)13頭、死亡13頭。

2 臨床癥狀

病仔豬精神沉郁，食欲不振；呼吸困難，可視黏膜發(fā)紺，咳嗽；持續(xù)發(fā)燒，呈現(xiàn)弛張熱，體溫為40.5～42 ℃；體況消瘦，被毛粗亂，皮膚貧血、蒼白，腹圍增大（圖1）；有的關(guān)節(jié)腫脹，站立不穩(wěn)，行動(dòng)搖擺，出現(xiàn)跛行。

圖1 病豬皮膚蒼白、腹圍膨大

3 剖檢變化

尸體消瘦，出現(xiàn)嚴(yán)重的心包炎、胸膜炎和腹膜炎及輕度關(guān)節(jié)炎；全身淋巴結(jié)腫大、出血（圖2-A），切面多汁，呈“大理石樣”花紋；心包內(nèi)有多量渾濁積液，心包膜增厚、粗糙，心外膜有大量纖維素性滲出物附著，形成“絨毛心”（圖2-B）；肺間質(zhì)水腫，肺與胸膜粘連，胸腔內(nèi)有多量纖維素性滲出物；腹腔內(nèi)有大量淡黃色渾濁積液，并出現(xiàn)大量纖維素性滲出物，腹腔器官嚴(yán)重粘連（圖2-C、圖2-D），腸系膜上有大量纖維素滲出物，腸系膜淋巴結(jié)變化不明顯；腎臟腫大，有出血點(diǎn)；肝、脾腫大，被膜增厚、出血，兩臟器均被多量纖維素性滲出物包裹，脾臟邊緣可見隆起的梗死性血泡（圖2-E、圖2-F）；軟腦膜充血、淤血和輕度出血，腦回變得扁平，蛛網(wǎng)膜腔內(nèi)積蓄有纖維素性、化膿性滲出物而致腦髓液渾濁，腦膜與頭骨內(nèi)膜以及腦實(shí)質(zhì)之間粘連。

圖2 病例剖檢變化

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

無菌操作，將肝臟病料接種于TSA培養(yǎng)基（添加NAD和小牛血清）進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)；1～2 d后，挑取菌落做革蘭染色、鏡檢。將該單菌落純培養(yǎng)后進(jìn)行16s RNA PCR擴(kuò)增和測(cè)序。將單菌落液體培養(yǎng)后涂板，進(jìn)行常見藥物的藥敏試驗(yàn)。同時(shí)，按照蔡旭旺等[3]報(bào)道的方法，制備分離菌株的血清學(xué)分型抗原，以HPS各血清型（1～15）標(biāo)準(zhǔn)血清（山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所惠贈(zèng)），對(duì)分離株進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)，以確定該分離株的血清型。

細(xì)菌分離培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)：分離的細(xì)菌菌落單一，均為灰白色的光滑型小菌落；革蘭染色陰性，呈現(xiàn)球桿狀、短桿狀或絲狀細(xì)小桿菌。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物大小為1 470 bp，與目的片段大小相符。對(duì)PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果進(jìn)行Blast分析，發(fā)現(xiàn)其與HPS NCTC4557株同源性為99.00%。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，該分離菌對(duì)頭孢噻呋、恩諾沙星、多西環(huán)素、阿莫西林、氟苯尼考的抑菌圈均大于15 mm，屬于高敏藥物，其中對(duì)頭孢噻呋和恩諾沙星抑菌圈大于20 mm，屬于極敏藥物（表1）。瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)結(jié)果顯示，本次分離菌株為HPS血清4型。

表1 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

5 病例防治

在飼料內(nèi)拌入5.00%阿莫西林可溶性粉進(jìn)行預(yù)防性投藥并添加維生素C、電解質(zhì)、黃芪多糖，連續(xù)喂服7 d；同時(shí)帶豬使用0.25%三氯異氰尿酸鈉溶液進(jìn)行噴灑消毒，對(duì)豬舍外環(huán)境使用2.00%的火堿溶液和5.00%的石灰乳混合噴灑，進(jìn)行全面噴灑消毒。對(duì)病豬進(jìn)行隔離治療，按體質(zhì)量4 mg/kg，肌內(nèi)注射頭孢噻呋鈉，每天1次，連用10 d。

6 討論

6.1 發(fā)病原因

本病病因主要是應(yīng)激因素。長(zhǎng)途運(yùn)輸、轉(zhuǎn)群、飼料更換、環(huán)境驟變、飼養(yǎng)密度過大等復(fù)雜的應(yīng)激因素降低了仔豬的抵抗力，從而引發(fā)HPS感染。環(huán)境衛(wèi)生差，每天不能及時(shí)清理圈舍、圈舍環(huán)境潮濕等，極易導(dǎo)致細(xì)菌在豬舍長(zhǎng)時(shí)間存留，也可誘發(fā)或加重該病。

6.2 治療效果

根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，選用極敏藥物頭孢噻呋進(jìn)行治療，因此極大提高了臨床用藥的有效性，取得了較好的治療效果，治療半個(gè)月后，豬群疫情已趨于穩(wěn)定。根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果合理用藥極大避免了因?yàn)E用藥物而帶來的細(xì)菌耐藥性和抗藥性問題，對(duì)于該病治療非常有利。藥敏試驗(yàn)應(yīng)做到簡(jiǎn)便易行，可在第一時(shí)間保證用藥正確，從而及時(shí)有效控制病情；藥敏試驗(yàn)中的藥物選擇應(yīng)合理，可選擇對(duì)某類細(xì)菌有效的藥物進(jìn)行試驗(yàn)，一類藥物選擇一種代表藥物即可，這樣可提高試驗(yàn)效率和用藥指導(dǎo)效率。

6.3 防控要點(diǎn)

一要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，提高豬群營(yíng)養(yǎng)水平，降低飼養(yǎng)密度，實(shí)行自繁自養(yǎng)、全進(jìn)全出的飼養(yǎng)模式[4]；二要做好生物安全工作，保證豬舍的衛(wèi)生與清潔，嚴(yán)格執(zhí)行定期消毒制度，保障空氣流通；三要減少各種應(yīng)激，如氣溫突變時(shí)，做好降暑或保暖工作，盡量避免異地調(diào)運(yùn)以及飼料和豬舍的突然更換等；四要合理選擇疫苗，因HPS有多種血清型，所以免疫時(shí)最好使用多價(jià)菌苗進(jìn)行免疫[5]；五要根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選用藥物，可交替使用有效抗菌藥物，并配以中藥制劑[6]，避免細(xì)菌抗藥性出現(xiàn)；六要堅(jiān)持對(duì)癥治療，通過藥物清除纖維素性滲出物，緩解癥狀，控制豬群死亡率，同時(shí)在飼料中添加增強(qiáng)免疫力藥物，如維生素C、黃芪多糖、左旋咪唑、牛磺酸等，這樣可有效提高預(yù)防和治療效果。