賈松濤，劉 煒，張 軍，周婷婷

（鄭州市動物疫病預(yù)防控制中心，河南鄭州 450052）

偽 狂 犬 病（Pseudorabies，PR；Aujeszky’s disease，AD）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的多種動物共患傳染病，可危害豬、牛、羊、犬等多種動物，呈世界性分布[1]，其中對養(yǎng)豬業(yè)危害最為嚴(yán)重。感染PRV后，妊娠母豬出現(xiàn)流產(chǎn)，產(chǎn)死胎或木乃伊胎；15日齡內(nèi)仔豬出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，致死率為100%；斷奶仔豬出現(xiàn)神經(jīng)癥狀和呼吸道癥狀，致死率為10%～20%；生長豬和育肥豬出現(xiàn)呼吸道癥狀，增重緩慢，飼料報酬低。此外，種公豬感染后，生產(chǎn)性能會受到嚴(yán)重影響。2011年以前，我國普遍應(yīng)用Bartha-K61疫苗預(yù)防豬PR，取得了較好的控制效果。但2011年以后，我國許多地區(qū)疫情復(fù)發(fā)，一些原本陰性的規(guī)?；i場也紛紛轉(zhuǎn)陽，造成了嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失[2]。此輪PR疫情從黃河以北養(yǎng)殖密集區(qū)域開始，逐漸向南蔓延，在華北、華中、華東地區(qū)長時間、大面積暴發(fā)流行[3]。為了解河南省鄭州市豬PRV野毒感染情況，對2018年鄭州市疫病控制中心實(shí)驗(yàn)室日常監(jiān)測采集的豬血清樣品進(jìn)行PRV gE抗體（野毒感染抗體）檢測，并對部分gE抗體陽性樣品，利用熒光PCR方法進(jìn)行驗(yàn)證。

1 材料

1.1 樣品

所有樣品均為鄭州市一、二、三級動物疫情監(jiān)測網(wǎng)點(diǎn)豬場送檢的血清樣品。采樣范圍涵蓋鄭州市轄區(qū)內(nèi)5個縣（市）的36個不同養(yǎng)殖規(guī)模豬場，采集時間為2018年1—12月。每個規(guī)模場不定期送檢30份樣品，總計(jì)1 057份，每月檢測樣品數(shù)量為72～103份。所采樣品來自只免疫PRV gE基因缺失疫苗的，涵蓋母豬、保育豬和育肥豬不同生長階段的豬群。

1.2 試劑

PRV gE抗體鑒別診斷試劑盒：購自IDEXX公司；熒光PCR檢測試劑：購自洛陽萊普生信息科技有限公司。

2 方法

檢測方法和結(jié)果判定按照相應(yīng)試劑盒使用說明進(jìn)行；采用Excel軟件，將檢測數(shù)據(jù)按照不同養(yǎng)殖規(guī)模、不同生長階段進(jìn)行歸類統(tǒng)計(jì)。

3 結(jié)果

3.1 總體情況

2018年1—12月采集的1 057份血清樣品中，檢出PRV gE陽性樣品309份，陽性率為29.2%（309/1 057），具體檢測結(jié)果見表1。

3.2 不同養(yǎng)殖規(guī)模情況

2018年共檢測36個不同養(yǎng)殖規(guī)模豬場送檢的樣品，其中存欄3 000頭以上的18個、500～3 000頭的11個、500頭以下的7個，共從27個場送檢樣品中檢出陽性，場群陽性率為75.0%；存欄3 000頭以上豬場的樣品陽性率為19.1%，500～3 000頭的為30.4%，500頭以下的為69.8%。不同規(guī)模豬場的具體檢測結(jié)果見表2。

表1 2018年1—12月PRV gE抗體 ELSIA 檢測結(jié)果

3.3 不同生長階段情況

2018年共檢測母豬樣品521份，樣品陽性率為21.5%；檢測保育豬樣品193份，樣品陽性率為30.6%；檢測育肥豬樣品343份，樣品陽性率為40.2%（表3）。

3.4 熒光PCR檢測

將母豬、保育豬和育肥豬PRV gE抗體陽性樣品各30份，進(jìn)行g(shù)E基因熒光PCR檢測，共檢出陽性32份，陽性檢出率為35.6%（31/90）。其中：在母豬樣品中檢出陽性8份，陽性檢出率為26.7%（8/30），保育豬樣品中檢出陽性10份，陽性率檢出為33.3%（10/30），育肥豬樣品中檢出陽性14份，陽性檢出率為46.7%（14/30）。具體PCR檢測結(jié)果見圖1。

4 分析與討論

檢測結(jié)果顯示，鄭州市36個規(guī)模場的PRV野毒感染場群陽性率為75.0%，個體陽性率為29.2%，說明鄭州市豬群中的PRV野毒感染面較廣，流行率較高，存在較高的疫情暴發(fā)風(fēng)險。鄭州市PRV野毒感染率較高的原因可能有以下幾點(diǎn)：一是病毒存在一定的變異，現(xiàn)有疫苗對PR的免疫保護(hù)力有所下降。2012年以來國內(nèi)流行毒株WY、ZM、HuXT2012、HBBD、HBLF、XiangA 和ZJNB2012之間的同源性較高，達(dá)99.8%，而這些毒株與歐洲、美洲毒株及2012年以前的國內(nèi)毒株同源性較低，表明病毒已發(fā)生了一定的變異[4]。二是引種前沒有進(jìn)行PR檢測，導(dǎo)致PRV流入陰性場。三是場內(nèi)生物安全措施不嚴(yán)，人員和物品的流動造成了病毒在場內(nèi)持續(xù)循環(huán)傳播。四是PEDV“返飼”病料中嚴(yán)重污染PRV，這也是造成母豬感染的重要因素[5]。

表2 不同養(yǎng)殖規(guī)模場PRV gE抗體ELSIA檢測結(jié)果

表3 不同生長階段豬群PRV gE抗體 ELSIA 檢測結(jié)果

圖1 不同生長階段豬群PRV gE抗體陽性樣品的熒光PCR檢測結(jié)果

存欄500頭以下規(guī)模豬場的PRV gE抗體陽性率（69.8%）是存欄3 000頭以上的規(guī)模場（19.1%）的3.65倍，表明PRV gE抗體陽性率與養(yǎng)殖規(guī)模有一定的相關(guān)性，養(yǎng)殖規(guī)模越大，野毒感染風(fēng)險越低。該流行特點(diǎn)與解偉濤等[6]調(diào)查的河南省母豬群規(guī)模大于500頭的豬場樣本陽性率（20.5%）明顯小于100頭豬場的樣本陽性率（62.4%）基本一致，這可能與較大規(guī)模豬場的飼養(yǎng)管理水平和生物安全水平較高有一定的關(guān)系。母豬樣品陽性率（21.5%）低于保育豬（30.6%）和育肥豬（40.2%），可能與豬場加強(qiáng)了母豬的PR凈化有關(guān)。

陽性樣品的熒光PCR檢測結(jié)果再次驗(yàn)證了陽性豬群中有35.6%能持續(xù)排毒，其中保育豬群和育肥豬群更高，表明保留PRV gE抗體陽性豬是非常危險的，必須將其徹底剔除。規(guī)?；B(yǎng)豬場可以免疫gE基因缺失苗，然后檢測gE抗體，淘汰陽性豬，同時結(jié)合隔離、消毒等綜合防控措施，逐步實(shí)現(xiàn)PR控制與凈化[7]。