鄧平，張立強(qiáng)，周偉東，張生元，喻運(yùn)珍，余少梅，李 勤

(1. 武漢市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，湖北 武漢 430207；2. 武漢中博水產(chǎn)生物技術(shù)有限公司，湖北 武漢 430070)

萼花臂尾輪蟲(chóng)(Brachionuscalyciflorus)是淡水中常見(jiàn)的輪蟲(chóng)種類，種群的繁殖力高，內(nèi)稟增長(zhǎng)率大，是工廠化培養(yǎng)的首選種類[1]。海水的褶皺臂尾輪蟲(chóng)己被廣泛用作海產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物幼體的開(kāi)口餌料，其大規(guī)模培育技術(shù)日趨成熟[2]，而淡水輪蟲(chóng)的研究在這方面卻遠(yuǎn)為遜色。單胞藻因營(yíng)養(yǎng)豐富，是輪蟲(chóng)批量培養(yǎng)的首選餌料，但培養(yǎng)需要耗費(fèi)大量的人力和物力，在一定程度上限制了輪蟲(chóng)的大規(guī)模培養(yǎng)。因而眾多學(xué)者開(kāi)展了單胞藻、濃縮藻液、藻粉單獨(dú)或共同培育輪蟲(chóng)技術(shù)的研究[3-5]。關(guān)于藻粉作為輪蟲(chóng)的食物或營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化主要用于海水的褶皺臂尾輪蟲(chóng)和圓型臂尾輪蟲(chóng)[6-7]，應(yīng)用到淡水輪蟲(chóng)餌料的還沒(méi)見(jiàn)報(bào)道。

該研究既考察兩種常用的萼花臂尾輪蟲(chóng)餌料蛋白核小球藻和斜生柵藻與藻粉搭配對(duì)輪蟲(chóng)種群動(dòng)態(tài)的差異，又考察已商品化的兩種藻粉小球藻粉和螺旋藻粉對(duì)輪蟲(chóng)種群動(dòng)態(tài)影響的差異。

1 材料和方法

1.1 輪蟲(chóng)來(lái)源及餌料

萼花臂尾輪蟲(chóng)系2012年6月采自武漢市農(nóng)科院水產(chǎn)所旁的水庫(kù)，實(shí)驗(yàn)室中分離出單個(gè)孤雌生殖個(gè)體，待種群中形成一定量的休眠卵后，置于4 ℃冰箱避光保存。試驗(yàn)前將休眠卵萌發(fā)、培養(yǎng)，得到的新個(gè)體作為試驗(yàn)材料。

選用蛋白核小球藻(Chlorellapyrenoidsa)和斜生柵藻(Scedesmusobliquus)作為培養(yǎng)輪蟲(chóng)的餌料。藻種購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所。兩種藻類均采用SE培養(yǎng)液，12∶12 L/D實(shí)驗(yàn)室條件下培養(yǎng)，光照強(qiáng)度2 000～3 000 lx，培養(yǎng)溫度25 ℃，充氣培養(yǎng)。每7～10 d轉(zhuǎn)接1次。投喂輪蟲(chóng)的藻液經(jīng)300目的篩絹過(guò)濾，以去除藻液中的絮凝。

1.2 試驗(yàn)方法

該實(shí)驗(yàn)小球藻密度為10×106cells/mL，斜生柵藻密度為4×106cells/mL(80 mg/L)。微藻與藻粉按質(zhì)量比1∶0、4∶1、1∶1、1∶4、0∶1搭配進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。各組食物的濃度均相當(dāng)于干重小球藻10×106cells/mL(80 mg/L)。輪蟲(chóng)起始密度1 ind./mL，室溫條件下培養(yǎng)。每組設(shè)3個(gè)平行。每24 h測(cè)定培養(yǎng)液中輪蟲(chóng)數(shù)量，并更換培養(yǎng)液、投喂餌料。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

對(duì)不同食物種類搭配條件下的輪蟲(chóng)種群數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化采用重復(fù)測(cè)量的方差分析(repeated measure ANOVA)。蛋白核小球藻與兩種藻粉按4∶1比例搭配條件下的輪蟲(chóng)種群最大密度、種群增長(zhǎng)率的差異采用單t-檢驗(yàn)(t-test)進(jìn)行分析(SPSS 19.0，P<0.05)。

2 結(jié)果與分析

2.1 微藻與小球藻粉搭配投喂輪蟲(chóng)的效果

不同微藻與小球藻粉搭配條件下，輪蟲(chóng)種群的動(dòng)態(tài)變化如圖1所示。重復(fù)測(cè)量的方差分析結(jié)果表明，蛋白核小球藻與小球藻粉按4∶1比例搭配投喂的輪蟲(chóng)種群動(dòng)態(tài)與其他各組差異極具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，培養(yǎng)8～10 d輪蟲(chóng)種群密度增長(zhǎng)明顯，第10 d達(dá)到峰值840 ind/mL。單獨(dú)用小球藻和1∶1比例搭配投喂輪蟲(chóng)，輪蟲(chóng)的種群最大密度差別不大。小球藻與小球藻粉按1∶4比例投喂輪蟲(chóng)，第5天輪蟲(chóng)種群密度才開(kāi)始明顯增長(zhǎng)，但種群變動(dòng)趨勢(shì)與1∶0、4∶1、1∶1組相似。

斜生柵藻與小球藻粉按1∶0、4∶1、1∶1比例搭配投喂輪蟲(chóng)，輪蟲(chóng)種群密度增長(zhǎng)幅度及達(dá)到高峰所經(jīng)歷時(shí)間均表現(xiàn)出相同的變化趨勢(shì)，在培養(yǎng)8 d后輪蟲(chóng)種群出現(xiàn)了不規(guī)則波動(dòng)。斜生柵藻與小球藻粉按1∶4比例搭配投喂輪蟲(chóng)，第4天輪蟲(chóng)種群密度才有較明顯增長(zhǎng)，但總體變化趨勢(shì)與1∶0、4∶1、1∶1組相似。

單獨(dú)用小球藻粉投喂輪蟲(chóng)，輪蟲(chóng)種群在少量增長(zhǎng)后便開(kāi)始下降，至第6天死亡。

圖1 微藻和小球藻粉搭配投喂時(shí)萼花臂尾輪蟲(chóng)的種群動(dòng)態(tài)

2.2 微藻與螺旋藻粉搭配投喂輪蟲(chóng)的效果

不同微藻與螺旋藻粉搭配條件下，輪蟲(chóng)種群的動(dòng)態(tài)變化見(jiàn)圖2。重復(fù)測(cè)量的方差分析結(jié)果表明微藻種類和搭配比例對(duì)輪蟲(chóng)種群動(dòng)態(tài)有顯著作用(P<0.05)。蛋白核小球藻與螺旋藻粉按4∶1比例搭配投喂輪蟲(chóng)，培養(yǎng)5～10 d輪蟲(chóng)種群的密度增長(zhǎng)極顯著(P<0.01)，第10 d達(dá)到峰值800 ind./mL。單獨(dú)用小球藻和1∶1比例搭配投喂輪蟲(chóng)，種群密度在培養(yǎng)3～5 d的快速增長(zhǎng)后，種群密度趨于穩(wěn)定狀態(tài)。小球藻與小球藻粉按1∶4比例投喂輪蟲(chóng)，第5天輪蟲(chóng)種群密度才開(kāi)始增長(zhǎng)，但總體變化趨勢(shì)與1∶0、4∶1、1∶1組相似。

斜生柵藻與螺旋藻粉按1∶0、4∶1、1∶1比例搭配投喂輪蟲(chóng)，輪蟲(chóng)種群動(dòng)態(tài)有相同的的變化趨勢(shì)，在培養(yǎng)7～8 d后輪蟲(chóng)種群處于波動(dòng)狀態(tài)。斜生柵藻與螺旋藻粉按1∶4比例投喂輪蟲(chóng)，第6天輪蟲(chóng)種群密度才開(kāi)始增長(zhǎng)，但總體變化趨勢(shì)與1∶0、4∶1、1∶1組相似。

單獨(dú)用螺旋藻粉投喂輪蟲(chóng)，輪蟲(chóng)種群少量增長(zhǎng)后在第6天消亡。

圖2 微藻和螺旋藻粉搭配投喂時(shí)萼花臂尾輪蟲(chóng)的種群動(dòng)態(tài)

2.3 蛋白核小球藻與藻粉搭配對(duì)輪蟲(chóng)最大種群密度和種群增長(zhǎng)率的影響

蛋白核小球藻與兩種藻粉按4∶1比例搭配投喂輪蟲(chóng)，輪蟲(chóng)的最大種群密度和種群增長(zhǎng)率見(jiàn)表1。t檢驗(yàn)結(jié)果表明，藻粉種類對(duì)最大種群密度及種群增長(zhǎng)率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異(P>0.05)。

表1 蛋白核小球藻與藻粉4∶1比例搭配投喂輪蟲(chóng)的效果

3 討 論

影響輪蟲(chóng)大規(guī)模培養(yǎng)的限制因素很多，例如餌料、溶氧、pH、鹽度、溫度等，其中餌料是最重要的限制因素，當(dāng)前蛋白核小球藻和斜生柵藻是經(jīng)研究證明適宜培養(yǎng)淡水輪蟲(chóng)的優(yōu)質(zhì)餌料[8]，但要完全依靠藻類來(lái)維持輪蟲(chóng)的高密度培養(yǎng)難度相當(dāng)大。

已有研究表明小球藻粉和螺旋藻粉具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。王冉等[9]報(bào)道小球藻粉蛋白質(zhì)含量達(dá)50%～67%，含動(dòng)物體所需的20種氨基酸、多種維生素和微量元素，以及亞麻酸、亞油酸、胡蘿卜素等。王方雨等[10]報(bào)道螺旋藻粉蛋白質(zhì)含量65%，碳水化合物19%，脂類4%，色素6%，灰分和纖維3%，維生素3%左右。李磊[11]研究發(fā)現(xiàn)小球藻粉和螺旋藻粉作為海水輪蟲(chóng)的餌料或作為酵母輪蟲(chóng)的營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化，均能獲得較好的效果。該試驗(yàn)結(jié)果表明，微藻與藻粉所組成的混合餌料培養(yǎng)輪蟲(chóng)有顯著效果；微藻和藻粉的不同配比，輪蟲(chóng)種群的增長(zhǎng)趨勢(shì)基本一致。試驗(yàn)還表明蛋白核小球藻與藻粉按4∶1比例投喂輪蟲(chóng)，輪蟲(chóng)的最大種群密度超過(guò)單獨(dú)用小球藻或斜生柵藻的餌料效果，而兩種藻粉之間無(wú)明顯差異。同時(shí)，該試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)小球藻粉及螺旋藻粉單獨(dú)投喂，輪蟲(chóng)的培養(yǎng)效果均不理想。這可能與單獨(dú)使用藻粉，對(duì)培養(yǎng)輪蟲(chóng)的水質(zhì)產(chǎn)生了一定的影響有關(guān)。

因此，在實(shí)際生產(chǎn)中蛋白核小球藻與藻粉按照4∶1的比例混合來(lái)培養(yǎng)輪蟲(chóng)，既可以降低餌料成本，又提高經(jīng)濟(jì)效益，可以作為蛋白核小球藻的優(yōu)良替代餌料，這對(duì)淡水輪蟲(chóng)的相關(guān)研究，特別是萼花臂尾輪蟲(chóng)的規(guī)?；a(chǎn)具有現(xiàn)實(shí)意義。