邵丹丹，于秋麗，年未未，汪曉宇，張佳勇，唐樂，歐陽瑋，章子貴

1. 浙江師范大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，金華 321004 2. 浙江師范大學(xué)體育與健康學(xué)院，金華 321004 3. 浙江師范大學(xué)行知學(xué)院，金華 321004

氟是人體所需的微量元素，地方性氟中毒(簡稱地氟病)是長期過量攝入氟而引起全身性病變，其中以牙齒、骨骼受損最為明顯[1-2]。地氟病病區(qū)范圍廣，類型復(fù)雜，可分為飲水型、燃煤型和飲茶型3種類型[3]。過量氟還能透過血腦屏障，在腦組織中蓄積，引起腦組織過強(qiáng)的氧化應(yīng)激反應(yīng)，進(jìn)而損傷神經(jīng)系統(tǒng)[4]。機(jī)體攝入氟過量還能通過胎盤屏障，在子代機(jī)體中蓄積，并透過血腦屏障對(duì)子代動(dòng)物腦結(jié)構(gòu)和功能造成損傷[5]，但其分子機(jī)制尚未明了。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress, ERS)是指由于某種原因使細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)生紊亂的一種亞細(xì)胞器病理過程。有研究表明，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與了氟骨癥的發(fā)病機(jī)制[6]，但氟中毒引起的腦損傷是否伴有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)生，目前尚未見報(bào)道。國內(nèi)外流行病學(xué)調(diào)研結(jié)果表明，地氟病病區(qū)居民膳食普遍低鈣，膳食低鈣是地氟病的主要促發(fā)和加重因素[7-8]。因此，本研究擬以SD大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，在復(fù)制母鼠氟中毒模型的基礎(chǔ)上[9]，探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在不同飼料鈣水平下對(duì)母鼠氟暴露后仔鼠腦海馬細(xì)胞的作用，評(píng)價(jià)膳食鈣對(duì)氟中毒的干預(yù)作用。

1 材料與方法(Materials and methods)

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

選用清潔級(jí)初斷乳SD雌性大鼠75只，雄性25只，購自浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(SCYK(浙)2003-0001)。飼養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境，適應(yīng)一周，將雌性大鼠隨機(jī)分成5組，每組15只，按表1以自由飲水方式染毒3個(gè)月，以母鼠血氟及尿氟含量作為亞慢性飲水型氟中毒動(dòng)物模型復(fù)制成功的標(biāo)準(zhǔn)。

表1 亞慢性氟暴露母鼠實(shí)驗(yàn)分組情況Table 1 Subgroups of female rats in subchronic fluorine expose experiments

染毒結(jié)束后，每晚8:00雌雄按1∶1的比例合籠交配，次日8:00檢查雌鼠的陰栓，記為妊娠0日齡，依次完成受孕工作，并記錄妊娠時(shí)間。取妊娠19 d的胎鼠20只進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。母鼠產(chǎn)仔第4天將每窩仔鼠調(diào)整為6～8只，在第14天和18天，每窩雌雄各取1～2只，每組共20只，雌雄各半進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑

兔抗大鼠CRT、BIP和CHOP單克隆抗體(一抗，英國Abcam公司)；辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔抗體(二抗，杭州戴格)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 血/尿氟、血/尿鈣的測定

1.3.1.1 電極法檢測大鼠血/尿氟濃度[10]

取血/尿樣與TISAB混合液(體積比1∶1)置于10 mL燒杯中，磁力攪拌器勻速攪拌，插入氟電極和甘汞電極。當(dāng)電位值改變<0.1 mV·(2 min)-1時(shí)，讀取的電位值作為E1，然后再在被測液里增加≤0.1 mL的標(biāo)準(zhǔn)NaF溶液，使電位變化為20～30 mV。當(dāng)電位值改變<0.1 mV·(2 min)-1時(shí)，讀取的電位值作為E2。根據(jù)2次電位值的差△E=E1-E2，依據(jù)公式計(jì)算血/尿氟的含量。

式中：Cx為血清中氟含量(mg·L-1)；Cs為添加的標(biāo)準(zhǔn)NaF溶液的濃度(mg·L-1)；Vs為添加的標(biāo)準(zhǔn)NaF溶液的體積(它的體積不能高于被測液體積的1/50)(mL)；Vx為樣品體積(mL)；△E為E1與E2之差(以20～30 mV為宜)。

1.3.1.2 采用半定量滴定法檢測大鼠血/尿鈣[11]

分別量取血/尿樣品、緩沖液和指示劑0.2、1.5和0.5 mL，完全混合均勻以后，等到1 min后呈現(xiàn)出櫻桃樣紅色。用乙二醇-雙-(2-氨基乙醚)四乙酸(EGTA)標(biāo)準(zhǔn)液滴定，一邊加試劑一邊搖勻直到看見杏黃色停止，并紀(jì)錄EGTA標(biāo)準(zhǔn)液的消耗量。樣品總鈣(mmol·L-1)=EGTA用量(mL)×10×0.25。

1.3.2 仔鼠腦海馬神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激伴侶分子蛋白檢測

1.3.2.1 總蛋白提取

將海馬組織剪碎后，按每50 mg的海馬組織加入600 μL PIPA裂解液和PMSF混合液(質(zhì)量比為99∶1)。每個(gè)蛋白樣品用勻漿器勻漿，冰上靜置10 min使之充分裂解。4 ℃、12 000 r·min-1，離心15 min。取上清，加入5×上樣緩沖液，比例為4∶1；混勻，放入100 ℃水浴鍋中煮沸5 min，使蛋白變性；分裝，-20 ℃保存。

1.3.2.2 Western Blot測定蛋白表達(dá)

測定胎鼠與14日齡、28日齡雌雄仔鼠腦海馬細(xì)胞中BIP、CHOP和CRT蛋白的表達(dá)水平。取各組仔鼠，迅速處死，取海馬，提取總蛋白、電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、一抗孵育、洗膜、二抗孵育、洗膜和顯影，蛋白條帶用Quantity One軟件分析系統(tǒng)掃描目的蛋白灰度值與內(nèi)參蛋白灰度值，內(nèi)參調(diào)整值=目的蛋白灰度值/β-actin灰度值，計(jì)算每一組內(nèi)參調(diào)整值與對(duì)照組內(nèi)參調(diào)整值的比值，用以表征該孔樣品蛋白表達(dá)量。

1.4 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)用SPSS20.0進(jìn)行分析，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(M±SD)表示，計(jì)量數(shù)據(jù)采用單因素方差分析和方差齊性檢驗(yàn)，各組兩兩比較用LSD檢驗(yàn)。以P<0.05、P<0.01為具有統(tǒng)計(jì)顯著性。

2 結(jié)果(Results)

2.1 亞慢性氟中毒母鼠氟斑牙觀察與其血氟/鈣和尿氟/鈣的測定

2.1.1 母鼠切齒觀察

亞慢性氟暴露母鼠氟斑牙情況如圖1所示，由圖1可知，氟暴露3個(gè)月，DZ組和LG組母鼠切齒表面光滑，表現(xiàn)正常；RF組與LF組母鼠牙面白堊色條紋明顯且面積較大，表現(xiàn)為明顯氟斑牙；HF組母鼠牙面白堊色條紋量少且面積較小，表現(xiàn)為輕度氟斑牙。

2.1.2 母鼠血氟/鈣和尿氟/鈣的測定結(jié)果

母鼠血氟/鈣和尿氟/鈣的測定結(jié)果如表2所示，由表2可知，與DZ組比，LF組母鼠的血氟含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與DZ組比，RF組、LF組和HF組母鼠的尿氟含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)；與DZ組比，LG組、LF組母鼠的血鈣含量均下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與DZ組比，RF組、LG組和LF組母鼠的尿鈣含量均下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)，HF組母鼠的尿鈣含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。以上結(jié)果表明，母鼠亞慢性氟中毒模型復(fù)制成功。

圖1 染毒后各組母鼠切齒比較注：A. DZ，B. RF，C. LG，D. LF，E. HF。Fig. 1 Comparison of teeth in different treatment groupsNote: A. DZ; B. RF; C. LG; D. LF; E. HF.

表2 母鼠血氟/鈣和尿氟/鈣的測定結(jié)果(M±SD，n=15)Table 2 The contents of blood fluoride/calcium and urine fluoride/calcium in mother rats (M±SD, n=15)

注：*P<0.05、**P<0.01，與DZ組比；#P<0.05、##P<0.01，與RF組比。
Note: *P<0.05, **P<0.01, compared with DZ group;#P<0.05,##P<0.01, compared with RF group.

2.2 大鼠子代腦海馬神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激伴侶分子BIP、CHOP和CRT蛋白表達(dá)水平檢測結(jié)果

2.2.1 胎鼠腦海馬神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激伴侶分子BIP、CHOP和CRT蛋白表達(dá)的檢測結(jié)果

胎鼠海馬BIP、CHOP和CRT蛋白表達(dá)水平檢測結(jié)果如圖2所示，由圖2可知，與DZ組比，RF組、LF組BIP表達(dá)水平上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與DZ組比，HF組BIP表達(dá)水平上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與RF組比，LF組BIP表達(dá)水平顯著上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與RF組比，HF組BIP表達(dá)水平下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖2 胎鼠腦海馬BIP、CHOP和CRT蛋白表達(dá)水平檢測結(jié)果注：*P<0.05、**P<0.01，與DZ組比；# P<0.05、## P<0.01，與RF組比。Fig. 2 Results of BIP, CHOP and CRT protein expression in hippocampus of fetusNote: *P<0.05, **P<0.01, compared with DZ group; # P<0.05, ## P<0.01, compared with RF group.

與DZ組比，RF組、LF組CHOP表達(dá)水平上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與RF組比，LF組CHOP表達(dá)水平上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

與DZ組比，RF組、LF組CRT表達(dá)水平上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，HF組CRT表達(dá)水平上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與RF組比，LF組CRT表達(dá)水平上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，HF組CRT表達(dá)水平下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2.2 14日齡仔鼠腦海馬神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激伴侶分子BIP、CHOP和CRT蛋白表達(dá)的測定結(jié)果

14日齡雌仔鼠海馬BIP、CHOP和CRT蛋白表達(dá)水平檢測結(jié)果如圖3所示，圖3表明，與DZ組比，RF組、LF組BIP蛋白表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與DZ組比，HF組BIP蛋白表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與RF組比，LF組BIP蛋白表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，HF組BIP蛋白表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

與DZ組比，RF組、LF組CHOP蛋白表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與RF組比，LF組CHOP蛋白表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，HF組CHOP蛋白表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

與DZ組比，RF組、LF組和HF組CRT蛋白表達(dá)均上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)；與RF組比，LF組CRT蛋白表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，HF組CRT蛋白表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖3 14日齡雌鼠腦海馬BIP、CHOP和CRT蛋白表達(dá)檢測結(jié)果注：*P<0.05、**P<0.01，與DZ組比；# P<0.05、## P<0.01，與RF組比。Fig. 3 Results of BIP, CHOP and CRT protein expression in hippocampus of 14-day-old female ratsNote: *P<0.05, **P<0.01, compared with DZ group; # P<0.05, ## P<0.01, compared with RF group.

14日齡雄仔鼠海馬BIP、CHOP和CRT蛋白表達(dá)檢測結(jié)果如圖4所示，圖4表明，與DZ組比，RF組、LF組BIP表達(dá)水平上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，HF組BIP表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與RF組比，LF組BIP蛋白表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，HF組BIP蛋白表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

與DZ組比，RF組、LF組CHOP表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，HF組CHOP表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與RF組比，LF組CHOP蛋白表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，HF組CHOP蛋白表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖4 14日齡雄鼠腦海馬BIP、CHOP和CRT蛋白表達(dá)檢測結(jié)果注：*P<0.05、**P<0.01，與DZ組比；# P<0.05、## P<0.01，與RF組比。Fig. 4 Results of BIP, CHOP and CRT protein expression in hippocampus of 14-day-old male ratsNote: *P<0.05, **P<0.01, compared with DZ group; # P<0.05, ## P<0.01, compared with RF group.

與DZ組比，LF組CRT表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與RF組比，LF組CRT表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，HF組CRT表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2.3 28日齡仔鼠腦海馬神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激伴侶分子BIP、CHOP和CRT蛋白表達(dá)的測定結(jié)果

28日齡雌仔鼠海馬BIP、CHOP和CRT蛋白表達(dá)檢測結(jié)果如圖5所示，圖5表明，與DZ組比，RF組、LF組BIP表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，HF組BIP表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與RF組比，LF組BIP表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，HF組BIP表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

與DZ組比，RF組、LF組CHOP表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與RF組比，HF組CHOP表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

與DZ組比，RF組、LF組CRT表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)；與RF組比，LF組CRT表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

28日齡雄仔鼠海馬BIP、CHOP和CRT蛋白表達(dá)檢測結(jié)果如圖6所示，圖6表明，與DZ組比，RF組BIP表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，LF組BIP表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與RF組比，LF組BIP表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，HF組BIP表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖5 28日齡雌鼠腦海馬BIP、CHOP和CRT蛋白表達(dá)檢測結(jié)果注：*P<0.05、**P<0.01，與DZ組比；# P<0.05、## P<0.01，與RF組比。Fig. 5 Results of BIP, CHOP and CRT protein expression in the hippocampus of 28-day-old female ratsNote: *P<0.05, **P<0.01, compared with DZ group; # P<0.05, ## P<0.01, compared with RF group.

圖6 28日齡雄鼠腦海馬BIP、CHOP和CRT蛋白表達(dá)檢測結(jié)果注：*P<0.05、**P<0.01，與DZ組比；# P<0.05、## P<0.01，與RF組比。Fig. 6 Results of BIP, CHOP and CRT protein expression in the hippocampus of 28-day-old male ratsNote: *P<0.05, **P<0.01, compared with DZ group; # P<0.05, ## P<0.01, compared with RF group.

與DZ組比，RF組、LF組CHOP表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與RF組比，LF組CHOP表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

與DZ組比，RF組CRT表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，LF組CRT表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與RF組比，LF組CRT表達(dá)上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論(Discussion)

氟中毒能引起機(jī)體骨相和非骨相器官的損傷，使機(jī)體產(chǎn)生腦損傷[3]，過量攝入氟還能通過胎盤屏障，在子代機(jī)體中蓄積，并透過血腦屏障影響子代腦功能[5]，但其分子機(jī)制尚未明了。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是機(jī)體蛋白質(zhì)加工、合成和運(yùn)輸?shù)闹匾獔鏊?，也是?xì)胞內(nèi)重要的鈣儲(chǔ)存庫之一。研究表明，細(xì)胞處于病毒感染、營養(yǎng)剝奪、Ca2+超載和氧化應(yīng)激等環(huán)境時(shí)，會(huì)造成內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能障礙，折疊蛋白能力下降，最終使未折疊蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)積聚產(chǎn)生ERS[12]。ERS時(shí)，細(xì)胞為緩解ERS狀態(tài)，通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與細(xì)胞核之間的信號(hào)反饋系統(tǒng)，調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能，減少未折疊蛋白的積聚，即未折疊蛋白反應(yīng)(unfolded protein response, UPR)。UPR的主要功能有：①停止蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)與翻譯，減少蛋白質(zhì)在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)進(jìn)一步積聚；②促進(jìn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)伴侶分子表達(dá)，加速未折疊蛋白折疊；③激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)順式作用元件，降解錯(cuò)誤折疊蛋白和未折疊蛋白。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑是caspase引發(fā)凋亡的3條途徑之一[13-15]，近年來逐漸引起關(guān)注。CHOP、BIP和CRT是ERS的伴侶分子，其作用是幫助細(xì)胞內(nèi)多肽的結(jié)構(gòu)完成正確組裝，并最終在組裝完成后與之分離[16]。CHOP又名生長阻滯和DNA損傷誘導(dǎo)性基因153，是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激特異轉(zhuǎn)錄因子[17]。正常生理?xiàng)l件下，CHOP呈低表達(dá)狀態(tài)，當(dāng)表達(dá)升高時(shí)，可抑制下游抑凋亡BCL-2等表達(dá)[18]，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。BIP是鈣結(jié)合蛋白，正常生理?xiàng)l件下，BIP參與調(diào)控合成蛋白質(zhì)的折疊與轉(zhuǎn)運(yùn)，與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)跨膜蛋白結(jié)合并抑制其活性，維持細(xì)胞內(nèi)鈣平衡[19]。CRT是鈣網(wǎng)蛋白，參與蛋白質(zhì)折疊，調(diào)控細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)[20]。氟中毒屬于“鈣矛盾”疾病[21-22](即機(jī)體整體缺鈣而細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載)，細(xì)胞內(nèi)Ca2+平衡紊亂會(huì)誘導(dǎo)BIP、CRT等的表達(dá)，誘發(fā)ERS，持久的ERS會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，加重對(duì)組織細(xì)胞的損傷。本研究中，母鼠氟暴露后仔鼠腦海馬細(xì)胞CHOP、BIP和CRT蛋白表達(dá)顯著上升(P<0.05或P<0.01)，這證明，母鼠氟暴露后仔鼠腦海馬細(xì)胞產(chǎn)生ERS，ERS可能參與了母鼠氟暴露后仔鼠腦損傷。

近年來，微量元素鈣與氟的關(guān)系令人關(guān)注。有研究表明，機(jī)體攝入過量氟后，氟可直接攻擊氧，干擾氧代謝導(dǎo)致活性氧(ROS)增多，從而影響細(xì)胞鈣離子通道、胞內(nèi)鈣庫，導(dǎo)致鈣穩(wěn)態(tài)失衡[23]。飼料低鈣高氟能使大鼠成骨、破骨功能活躍，并伴有骨組織細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，加速骨轉(zhuǎn)換從而造成骨相器官的損傷[24]。本研究參照文獻(xiàn)報(bào)道的飼料低鈣劑量[25]，分別用高鈣和低鈣飼料喂養(yǎng)氟中毒母鼠，探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在不同鈣水平下對(duì)母鼠氟暴露后仔鼠腦海馬細(xì)胞的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，食低鈣飼料和高氟水組的仔鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞BIP、CHOP和CRT蛋白表達(dá)水平與飲用高氟水組比升高十分顯著，而食用高鈣飼料和高氟水組的仔鼠與飲用高氟水組的仔鼠腦海馬細(xì)胞CHOP蛋白表達(dá)水平則顯著下降，BIP和CRT蛋白表達(dá)顯著上升或無明顯變化。這樣的實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，適當(dāng)水平的鈣攝入可能是氟中毒的治療途徑之一，而膳食低鈣可加重氟致腦損傷。

總之，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在不同鈣水平下對(duì)母鼠氟暴露后仔鼠腦海馬細(xì)胞的作用可能是：妊娠期，母鼠氟暴露后，氟通過胎盤屏障后在胎鼠體內(nèi)積蓄，胎鼠體內(nèi)的氟透過血腦屏障進(jìn)入腦組織內(nèi)，在仔鼠腦發(fā)育過程中，產(chǎn)生ERS，使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激伴侶分子BIP、CHOP和CRT表達(dá)異常，最終導(dǎo)致腦損傷。而飼料高鈣(鈣含量7%)能逆轉(zhuǎn)仔鼠上述腦海馬細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激伴侶分子的表達(dá)趨勢，從而改善母鼠氟暴露后仔鼠腦海馬細(xì)胞的損傷，飼料低鈣(鈣含量0.063%)與飲用高氟水對(duì)仔鼠腦海馬細(xì)胞具有協(xié)同毒性作用。上述研究結(jié)果也提示，雖然目前我國各飲水型地氟病區(qū)飲用水治理后氟含量都已基本達(dá)標(biāo)，但改水前母體攝入過量氟對(duì)仔代腦功能的影響仍不容忽視。