李 瑩，黃德春，陳貴堂*，艾宗華，蔣思琪，康譯心，高仕婧

（中國(guó)藥科大學(xué)工學(xué)院，江蘇 南京 211198）

近年來(lái)，對(duì)多糖的研究一直是個(gè)熱點(diǎn)，并且主要集中在提取和活性分析方面。目前多糖的提取方法主要有溶劑提取法（熱水浸提[1]、堿液提取[2]、酸液提取[3]等）、輔助提取法（微波輔助提取[4]、超聲輔助提取[5]、高壓輔助提取[6]、酶輔助提取[7]等）以及聯(lián)合提取法[8]等。研究表明，不同的提取方法不但影響多糖的提取效率，而且影響多糖的分子質(zhì)量、單糖組成、結(jié)構(gòu)以及生物活性[9-10]。如Zhu Zhenyuan等[11]比較了冷水、熱水、超聲、微波、纖維素酶5 種提取方法對(duì)古尼蟲(chóng)草多糖的影響，結(jié)果表明，微波提取多糖提取率和抗腫瘤活性均最高；Wang Junlong等[12]研究發(fā)現(xiàn)，微波輔助提取過(guò)程中白沙蒿多糖的分子發(fā)生了降解，但微波輔助提取法提取的多糖比熱水提取法具有較高的抗氧化活性；Zhao Chengcheng等[13]比較了冷水、溫水、熱水、超聲輔助提取4 種提取方法對(duì)黏山藥多糖特征和生物活性的影響，發(fā)現(xiàn)熱水提取多糖提取率最高、分子質(zhì)量最大，冷水提取多糖分子質(zhì)量最小、糖醛酸含量高、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除活性和降血糖活性較高，而超聲輔助提取多糖分子質(zhì)量較小、亞鐵還原力最強(qiáng)；而Yan Yajuan等[14]在比較熱水、微波、超聲、酶4 種不同方法提取砂仁多糖的研究中發(fā)現(xiàn)，超聲提取多糖提取率、糖醛酸和硫酸基含量均最高，其抗氧化活性也最強(qiáng)。由此可見(jiàn)，在多糖提取中，不同提取方法對(duì)同種原料產(chǎn)生效果不同，而同種方法對(duì)不同原料產(chǎn)生的效果也不同，沒(méi)有規(guī)律可循。

昆布是褐藻門(mén)海帶目海帶科植物海帶（Laminaria japonicaAresch）或翅藻科植物昆布（Ecklonia kuromeOkam）的干燥葉狀體[15]，其不僅營(yíng)養(yǎng)豐富，味道鮮美，而且具有較高的藥用價(jià)值，是藥食兩用物質(zhì)之一。現(xiàn)代研究表明，昆布含有藻膠酸、氨基酸、多糖、甘露醇等多種有效成分以及豐富的碘，其中昆布多糖是昆布的主要活性成分之一，與昆布的許多生理效應(yīng)有關(guān)，如抗糖尿病[16]、調(diào)節(jié)血脂[17-18]、抗菌[19]、提高機(jī)體免疫、抗腫瘤[20-21]等作用。目前已有的文獻(xiàn)中，雖然對(duì)昆布多糖提取方法和生物活性的研究較多，但鮮見(jiàn)全面地比較不同提取方法對(duì)昆布多糖的性質(zhì)和生物活性影響方面的報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)采用熱水浸提、超聲輔助提取以及復(fù)合酶提取3 種方法提取昆布多糖，并對(duì)其理化性質(zhì)和抗腫瘤活性進(jìn)行比較分析，以期為進(jìn)一步探明不同提取方法與多糖結(jié)構(gòu)和抗腫瘤活性的關(guān)系，尋求適合昆布多糖的最佳提取工藝，為昆布多糖的深入開(kāi)發(fā)利用提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

昆布購(gòu)自南京鹿江中藥飲片廠，經(jīng)粉碎后過(guò)60 目篩備用。

纖維素酶（1 800 U/mg）、果膠酶（1 000 U/mg）上海金穗生物科技有限公司；木瓜蛋白酶（3 U/mg）阿拉丁試劑（上海）有限公司；小牛血清 美國(guó)Gibco公司；DMEM/F12（1∶1）培養(yǎng)液 美國(guó)HyClone公司；噻唑藍(lán)（3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，MTT） 江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司；剛果紅、鹽酸阿霉素（doxorubicin hydrochloride，DOX） 北京博奧拓達(dá)科技有限公司；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

DFY-500搖擺式高速中藥粉碎機(jī) 溫嶺市林大機(jī)械有限公司；TU-1901紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；LXJ-IIB離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠；JY-92IIN超聲波細(xì)胞粉碎機(jī) 寧波新芝生物科技股份有限公司；SHJ-4水浴恒溫磁力攪拌器 常州亞特實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；PD-1C-50真空冷凍干燥機(jī) 北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；ATX224分析天平 日本島津儀器公司；RE-5205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠；Elx800TM酶標(biāo)儀 美國(guó)BioTek公司；CO2生化培養(yǎng)箱 賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司。

1.3 方法

1.3.1 熱水浸提法提取昆布多糖工藝優(yōu)化

稱(chēng)取一定量昆布粉，固定反應(yīng)條件料液比1∶60（g/mL）、提取時(shí)間2 h、考察不同提取溫度（25、35、45、55、65、75、85 ℃）對(duì)昆布多糖提取率的影響；固定反應(yīng)條件料液比1∶60（g/mL）、提取溫度80 ℃，考察不同提取時(shí)間（1、2、3、4、5、6 h）對(duì)昆布多糖提取率的影響；固定反應(yīng)條件提取時(shí)間2 h、提取溫度80 ℃，考察不同料液比（1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶70、1∶80（g/mL））對(duì)昆布多糖提取率的影響。

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選取3 個(gè)單因素試驗(yàn)中測(cè)得的最佳條件正交試驗(yàn)，以多糖的提取率為指標(biāo)，優(yōu)化提取工藝參數(shù)。

1.3.2 超聲輔助提取法提取昆布多糖工藝優(yōu)化

稱(chēng)取一定量昆布粉，固定反應(yīng)條件料液比1∶60（g/mL）、超聲時(shí)間5 min，考察超聲功率（100、200、300、400、500 W）對(duì)昆布多糖提取率的影響；固定反應(yīng)條件料液比1∶60（g/mL）、超聲功率200 W，考察不同超聲時(shí)間（2、4、6、8、10、12 min）對(duì)昆布多糖提取率的影響；固定反應(yīng)條件超聲功率200 W、超聲時(shí)間5 min，考察料液比（1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶70、1∶80、1∶90、1∶100（g/mL））對(duì)昆布多糖提取率的影響。

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選取3 個(gè)單因素試驗(yàn)中測(cè)得的最佳條件進(jìn)行正交試驗(yàn)，以多糖的提取率為指標(biāo)，優(yōu)化提取工藝參數(shù)。

1.3.3 復(fù)合酶法提取昆布多糖工藝優(yōu)化

稱(chēng)取一定量昆布粉，固定反應(yīng)條件pH 5、水浴提取溫度50 ℃、水浴提取時(shí)間3 h、料液比1∶70（g/mL）、木瓜蛋白酶30 U/g、果膠酶10 000 U/g，考察不同纖維素酶用量（18 000、36 000、54 000、72 000、90 000、108 000、126 000 U/g）對(duì)昆布多糖提取率的影響；固定反應(yīng)條件pH 5、水浴提取溫度50 ℃、水浴提取時(shí)間3 h、料液比1∶70（g/mL），木瓜蛋白酶30 U/g、纖維素酶18 000 U/g，考察不同果膠酶用量（5 000、10 000、15 000、20 000、25 000、30 000 U/g）對(duì)昆布多糖提取率的影響；固定反應(yīng)條件pH 5、水浴提取溫度50 ℃、水浴提取時(shí)間3 h、料液比1∶70（g/mL）、果膠酶10 000 U/g、纖維素酶18 000 U/g，100 ℃滅酶10 min，考察不同木瓜蛋白酶用量（45、60、75、90、105 U/g）對(duì)昆布多糖提取率的影響。

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選取3 個(gè)單因素試驗(yàn)測(cè)得的最佳條件進(jìn)行正交試驗(yàn)，以多糖提取率為指標(biāo)，優(yōu)化提取工藝參數(shù)。

1.3.4 粗多糖干品的制備

根據(jù)正交試驗(yàn)最優(yōu)提取條件進(jìn)行多糖提取，4 000 r/min離心20 min，得到上清液，用Sevag法[22]除去蛋白質(zhì)后，用無(wú)水乙醇進(jìn)行沉淀，然后用乙醇、丙酮洗滌，真空干燥，分別得到3 種昆布粗多糖干品。

1.3.5 多糖溶解性測(cè)定

昆布多糖（0.1 g）置于150 mL燒杯內(nèi)，加入100 mL蒸餾水使之在不同溫度（20、40、60、80、100 ℃）條件下水浴溶解，用磁力攪拌，記錄從開(kāi)始到昆布粗多糖完全溶解所需時(shí)間[23]。

1.3.6 剛果紅實(shí)驗(yàn)

稱(chēng)取4 mg多糖樣品，加入2 mL蒸餾水和2 mL剛果紅試劑（80 μg/mL），加入1 mol/L的NaOH溶液，調(diào)節(jié)NaOH溶液終濃度分別為0.1、0.2、0.3、0.4 mol/L和0.5 mol/L，紫外分光光度計(jì)掃描，測(cè)得不同濃度條件下溶液的最大吸收波長(zhǎng)。與剛果紅對(duì)比，判斷昆布多糖是否具有三股螺旋結(jié)構(gòu)[24]。

1.3.7 紫外光譜特征

配制200 μg/mL的昆布多糖溶液，以蒸餾水為空白，利用紫外分光光度計(jì)在波長(zhǎng)190～400 nm范圍內(nèi)測(cè)定吸光度，間隔1 nm，繪制昆布多糖紫外光譜特征曲線(xiàn)，判斷所提取的昆布多糖中是否含有蛋白質(zhì)和核酸。

1.3.8 MTT法測(cè)定腫瘤細(xì)胞的抑制率

將處于對(duì)數(shù)期的MCF-7和A549細(xì)胞用胰酶消化后配制成濃度為1×104個(gè)/mL的細(xì)胞懸液，每孔100 μL加入到96 孔板內(nèi)。次日加入含有DOX或不同藥物濃度和相應(yīng)溶劑對(duì)照的新鮮培養(yǎng)基，每孔加100 μL。每種藥物設(shè)4 個(gè)劑量組，即DOX（1、0.8、0.6、0.4 μg/mL），多糖組（560、420、280、140 μg/mL），每組6 個(gè)平行孔，給藥后在37 ℃、5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)72 h。培養(yǎng)結(jié)束后每孔加10 μL新鮮配制的5 mg/mL MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，棄去上清液，每孔加入200 μL二甲基亞砜溶解沉淀，恒溫振蕩培養(yǎng)箱搖勻，用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)570 nm處測(cè)定吸光度，計(jì)算樣品的腫瘤細(xì)胞抑制率，并由SPSS 22.0軟件計(jì)算半抑制濃度（the half maximal inhibitory concentration，IC50）[25]。

1.4 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以 ±s表示，采用SPSS 22軟件進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 熱水浸提法提取昆布多糖

2.1.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

圖1 提取溫度（A）、提取時(shí)間（B）和料液比（C）對(duì)昆布多糖提取率的影響Fig. 1 Effects of temperature (A), extraction time (B) and solid-tosolvent ratio (C) on the extraction efficiency of polysaccharides by HWE

從圖1A可以看出，隨著提取溫度的逐漸升高，溶液中的昆布多糖提取率先緩慢增長(zhǎng)，在高于45 ℃時(shí)，有一個(gè)較快增長(zhǎng)，在75 ℃時(shí)達(dá)到極值，隨后不再增長(zhǎng)。因此，在本實(shí)驗(yàn)條件下，昆布多糖的最適提取溫度為75 ℃。從圖1B可以看出，隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，昆布多糖提取率逐漸升高，在4 h時(shí)達(dá)到極值，后趨于平緩。因此選擇4 h為最佳提取時(shí)間。由圖1C可知，隨著料液比的增加，昆布多糖提取率一直呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，直到在料液比1∶70（g/mL）時(shí)達(dá)到極值，之后趨于平緩，因此選擇料液比1∶70為最佳提取條件。

2.1.2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表1 熱水浸提法L9（33）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 1 Orthogonal array design L9 (33) with experimental results for optimization of HWE conditions

如表1所示，影響昆布多糖提取率的最主因素是提取溫度，主次因素依次為A＞B＞C，最優(yōu)水平組合為A3B3C3，即提取溫度85 ℃、料液比1∶80（g/mL）、提取時(shí)間5 h。對(duì)最優(yōu)試驗(yàn)條件進(jìn)行3 組平行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，在最優(yōu)條件下，昆布多糖提取率為（5.97±0.04）%?？梢?jiàn)，該正交試驗(yàn)結(jié)果可靠。

熱水浸提是提取多糖的傳統(tǒng)方法，其提取效果主要受提取溫度、提取時(shí)間以及料液比等因素等影響。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合文獻(xiàn)報(bào)道的一般結(jié)論。如魏曉梅等[26]在云南松茸多糖提取方案優(yōu)化及測(cè)定中，得到最佳水提條件為溫度80 ℃、時(shí)間3 h、料液比1∶15（g/mL）；朱振元等[27]的滑子菇多糖提取工藝優(yōu)化中，得到最佳提取條件為溫度85 ℃、提取2 h、料液比1∶40（g/mL）?？梢?jiàn)，多糖多在溫度較高時(shí)容易提取出來(lái)，不同原料的提取最優(yōu)料液比與時(shí)間有差別，這與不同原料自身的性質(zhì)有關(guān)。

2.2 超聲輔助提取法提取昆布多糖

2.2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

圖2 超聲功率（A）、超聲時(shí)間（B）和料液比（C）對(duì)昆布多糖提取率的影響Fig. 2 Effects of ultrasonic power (A), irradiation time (B) and solid-tosolvent ratio (C) on the extraction efficiency of polysaccharides by UAE

由圖2A可知，從100 W開(kāi)始，隨著超聲功率的增加，昆布多糖提取率快速增加，但在超聲功率為400 W時(shí)達(dá)到最高點(diǎn)，之后開(kāi)始下降。超聲功率的增加使得同樣時(shí)間內(nèi)對(duì)細(xì)胞壁的作用增強(qiáng)，多糖分子可以更順利的從細(xì)胞內(nèi)進(jìn)入到溶液中，從而在一定范圍內(nèi)，昆布多糖提取率一直在增加，但當(dāng)達(dá)到最高點(diǎn)后，過(guò)大的超聲功率可能會(huì)對(duì)多糖分子產(chǎn)生破壞作用，使多糖提取率下降。從圖2B可以看出，隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng)，昆布多糖提取率幾乎以直線(xiàn)形式增加，但在第10分鐘時(shí)達(dá)到最高點(diǎn)，之后開(kāi)始下降。這可能由于隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng)，多糖以至單糖的結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化，化學(xué)鍵如C—O—C和C—O—H鍵斷裂導(dǎo)致不能發(fā)生顯色反應(yīng)，從而造成苯酚-硫酸法測(cè)定的總糖含量降低[28-29]。從圖2C可以看出，隨著料液比的增大，昆布多糖提取率逐漸增多，在料液比為1∶80（g/mL）時(shí)達(dá)到最高點(diǎn)，然后趨于平緩?？梢?jiàn)料液比越大，可容納的多糖分子越多，但并不能無(wú)限增多，溶液會(huì)達(dá)到飽和。因此，在本實(shí)驗(yàn)條件下，分別選擇超聲功率400 W、超聲時(shí)間10 min和料液比1∶80（g/mL）為最佳提取參數(shù)。

2.2.2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表2 超聲輔助提取法正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 2 Orthogonal array design L9 (33) with experimental results for optimization of UAE conditions

如表2所示，影響昆布多糖提取率的最主因素為超聲功率，主次因素依次為A＞B＞C，最優(yōu)水平組合為A3B2C3，即超聲功率500 W、超聲時(shí)間10 min、料液比1∶90（g/mL）。對(duì)最優(yōu)條件進(jìn)行3 組平行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，昆布多糖的提取率為（5.81±0.00）%?？梢?jiàn)，該正交試驗(yàn)優(yōu)化結(jié)果可靠。

2.3 復(fù)合酶法提取昆布多糖

2.3.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

圖3 纖維素酶（A）、果膠酶（B）和木瓜蛋白酶（C）用量對(duì)昆布多糖提取率的影響Fig. 3 Effects of cellulase (A), pectinase (B), and papain (C) dosage on the extraction efficiency of polysaccharides by MEE

由圖3A可以看出，隨著纖維素酶用量的增加，昆布多糖提取率逐漸增加，當(dāng)加入90 000 U/g的纖維素酶時(shí)，昆布多糖含量達(dá)到最大，當(dāng)繼續(xù)增加纖維素酶的用量，昆布多糖提取率則開(kāi)始下降。從圖3B可以看出，隨著果膠酶的加入，昆布多糖提取率也是呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢(shì)，最高點(diǎn)是果膠酶加入量20 000 U/g。由圖3C可知，昆布多糖提取率隨著木瓜蛋白酶的增加而增多，在木瓜蛋白酶的量為90 U/g時(shí)達(dá)到最大，然后趨于平緩。因此，選擇纖維素酶、果膠酶和木瓜蛋白酶的最適用量分別為90 000、20 000 U/g和90 U/g。

2.3.2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 復(fù)合酶提取法正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 3 Orthogonal array design L9 (33) with experimental results for optimization of MEE conditions

在固定pH 5、溫度50 ℃、料液比1∶70（g/mL）及時(shí)間3 h條件下，考察3 種酶不同配比對(duì)昆布多糖提取率的影響，如表3所示。影響昆布多糖提取率最顯著的酶是纖維素酶，然后依次是木瓜蛋白酶和果膠酶。最優(yōu)水平組合為A1B1C3，即木瓜蛋白酶75 U/g、果膠酶15 000 U/g、纖維素酶108 000 U/g。對(duì)最優(yōu)復(fù)合酶組合條件進(jìn)行3 組平行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，昆布多糖的提取率為（14.29±0.02）%，提示該正交試驗(yàn)優(yōu)化結(jié)果可靠。

2.4 提取方法對(duì)昆布多糖溶解性的影響

圖4 提取方法對(duì)昆布多糖溶解性的影響Fig. 4 Effects of extraction methods on solubility of polysaccharides from L. japonica

從圖4可以看出，不同提取方法提取的多糖的溶解性有著顯著差異（P＜0.05）。溶解時(shí)間隨著溶解溫度的升高而降低。復(fù)合酶法的溶解時(shí)間顯著低于熱水浸提法和超聲提取法（P＜0.05）。可能是由于復(fù)合酶使得多糖的結(jié)構(gòu)疏松，部分糖蛋白中的蛋白質(zhì)分解，分子質(zhì)量更小，所以更容易溶解。

2.5 剛果紅實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖5 NaOH溶液濃度對(duì)剛果紅-昆布多糖絡(luò)合物最大吸收波長(zhǎng)的影響Fig. 5 Maximum absorption wavelength of Congo red complexes of polysaccharides from L. japonica at various NaOH concentrations

多糖的抗腫瘤活性不僅與多糖分子的一級(jí)結(jié)構(gòu)有關(guān)，還與多糖分子的高級(jí)結(jié)構(gòu)有關(guān)，而其中三股螺旋結(jié)構(gòu)是多糖分子中最具有活性的空間構(gòu)象[30]。通過(guò)剛果紅實(shí)驗(yàn)，具有三股螺旋結(jié)構(gòu)的多糖會(huì)與剛果紅形成絡(luò)合物，使得溶液的最大吸收波長(zhǎng)發(fā)生變化，由此推測(cè)多糖是否具有三股螺旋結(jié)構(gòu)。由圖5可以看出，隨著NaOH溶液濃度的增加，熱水浸提的多糖和復(fù)合酶法提取的多糖均是先降低再升高再降低，說(shuō)明在低濃度NaOH溶液和高濃度NaOH溶液條件下，樣品的螺旋結(jié)構(gòu)解體，是以無(wú)規(guī)則線(xiàn)團(tuán)的形式存在，而在濃度0.3 mol/L左右的NaOH溶液條件下，是其三股螺旋結(jié)構(gòu)與剛果紅形成了絡(luò)合物，使得最大吸收波長(zhǎng)向長(zhǎng)波方向移動(dòng)。

2.6 昆布多糖紫外光譜分析

圖6 提取方法對(duì)昆布多糖紫外光譜的影響Fig. 6 UV absorption spectra of polysaccharides from L. japonica extracted by three extraction methods

從圖6可以看出，3 種不同提取方法的昆布多糖的紫外光譜是大體相同的，在波長(zhǎng)280 nm處略有吸收峰，說(shuō)明樣品中含有較少的蛋白質(zhì)或多肽，這與以上粗多糖中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定結(jié)果一致。

2.7 不同方法提取多糖對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用

表4 不同提取方法的昆布多糖的抗腫瘤活性Table 4 Antitumor activity of polysaccharides from L. japonica

多糖在抗腫瘤藥物的研究中占有一定的比例，研究表明多種多糖對(duì)腫瘤細(xì)胞都有一定的效果[31-32]。MTT實(shí)驗(yàn)表明，昆布多糖可以對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7和人肺癌細(xì)胞A549產(chǎn)生抑制作用，并且不同提取方法的昆布多糖的抗癌活性并不相同，結(jié)果如表4所示。可見(jiàn)熱水浸提昆布多糖對(duì)人肺癌細(xì)胞A549無(wú)抑制作用，對(duì)于人乳腺癌細(xì)胞有一定抑制效果，超聲提取昆布多糖正好相反，而酶法提取昆布多糖對(duì)2 種腫瘤細(xì)胞均具有抑制作用。總體來(lái)說(shuō)，對(duì)于人肺癌細(xì)胞A549，超聲提取的昆布多糖的IC50最小，說(shuō)明其對(duì)該腫瘤細(xì)胞的抑制效果最好，而對(duì)于人乳腺癌細(xì)胞MCF-7，復(fù)合酶法提取而昆布多糖抑制效果最好。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明不同方法提取的多糖結(jié)構(gòu)或包含的活性基團(tuán)不同，也可能是由于復(fù)合酶法提取的昆布多糖雜質(zhì)含量較少，多糖純度更高以致其生物活性更高。

3 結(jié) 論

通過(guò)3 種不同提取方法的條件優(yōu)化，表明復(fù)合酶法的昆布粗多糖提取率最高，是由于酶對(duì)植物細(xì)胞壁發(fā)揮了作用，使細(xì)胞中的多糖更容易分離出來(lái)，進(jìn)入到溶液中。超聲提取法的提取率稍小于熱水浸提，可能是由于超聲時(shí)間相較于熱水浸提的時(shí)間較短，并且超聲處理的過(guò)程始終是在冰水浴中進(jìn)行，溫度較低，不利于多糖的溶出。通過(guò)3 種方法提取率的比較，為以后昆布多糖的大量提取可靠依據(jù)。不同提取方法對(duì)昆布多糖的化學(xué)組成和溶解性等理化性質(zhì)以及抗腫瘤活性有顯著的影響，不同提取方法所得多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)表征及其與抗腫瘤活性的關(guān)系有待進(jìn)一步深入研究。