周煌輝 馮傳平 李福元 姚淑瓊 張 斌

（湖南中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校藥學(xué)系，湖南 株洲 412012）

泌尿系結(jié)石是泌尿外科的常見病之一，在泌尿外科住院病人中占居首位，是威脅人類健康的常見疾病之一，其中絕大多數(shù)是草酸鈣結(jié)石。我國泌尿系結(jié)石發(fā)病率為1%～5%，南方高達(dá) 5%～10%，年新發(fā)病例約為 150～200/10萬人，其中25%的患者需住院治療。近年來我國泌尿系結(jié)石的發(fā)病率有增加趨勢，是世界上三大結(jié)石高發(fā)區(qū)之一，尤以南方省市泌尿系結(jié)石發(fā)病率明顯升高。而今隨著生活水平的日益提高，腎結(jié)石的發(fā)病率仍在增加，且發(fā)病年齡較過去提早 10歲左右。隨著高蛋白、奶制品、高糖飲食的攝入增加，腎結(jié)石的新發(fā)病率也必將增加［1］。由于泌尿系結(jié)石主要是腎結(jié)石與上輸尿管結(jié)石，其形狀大小位置在患者體內(nèi)的表現(xiàn)各異，特別是對于特大結(jié)石及輸尿管畸形或被腎臟組織包埋的結(jié)石離不開現(xiàn)代碎石或取石技術(shù)，這些技術(shù)也正不斷地提高與發(fā)展，但由于手術(shù)治療具有費用高、創(chuàng)傷大、復(fù)發(fā)率高等缺點，特別是體外沖擊波碎石（ESWL）對腎結(jié)石靶區(qū)腎組織易造成損傷，對結(jié)石非靶區(qū)組織亦有不同程度的損傷［2-3］，劉弘展等［4］報道，ESWL治療單側(cè)輸尿管 656例出現(xiàn)18例形態(tài)縮小，李仙［5］報道，ESWL治療不當(dāng)還可導(dǎo)致腎萎縮，3次以上震波碎石手術(shù)后，遠(yuǎn)期有造成腎萎縮的可能。調(diào)查發(fā)現(xiàn)更多的患者更愿意接受藥物治療，因此，研究開發(fā)一些能溶石排石的藥物，特別對大結(jié)石及形狀特異的結(jié)石能起到溶石排石與防止結(jié)石復(fù)發(fā)的藥物是我們醫(yī)藥工作者的重任，而中醫(yī)藥在這方面有獨特的優(yōu)勢。肖政華［6］、陳文智［7］、李鵬［8］各自采用自擬排石湯治療泌尿系結(jié)石取得了較好的效果。

金?；瘻絹碓从诿耖g老中醫(yī)經(jīng)驗方，通過反復(fù)使用發(fā)與對各型泌尿系結(jié)石均有較好溶排石效果。由金錢草 25 g，海金砂 25 g，雞內(nèi)金 12 g，茯苓 15 g，豬苓 10 g，澤瀉 12 g，延胡索 10 g，地龍 6 g，莪術(shù) 6 g，枳殼 10 g，黃芪 15 g，何首烏 18 g，麥冬 15 g，茜草10 g組成。通過10多年近100例的臨床應(yīng)用，對各型泌尿系結(jié)石，特別是對濕熱下注或腎氣、腎陰虧虛引起的腎結(jié)石、上輸尿管結(jié)石及膀胱結(jié)石具有較佳療效，服用后，經(jīng)B超或 CT檢查，最短 15天結(jié)石完全排出，最長45天，總有效率達(dá)到92%，同時對合并有腎積水、血尿、疼痛等并發(fā)癥能有效的防治。為了研究金?；瘻寞熜c作用機制，采用現(xiàn)代藥理學(xué)方法并結(jié)合中醫(yī)藥理論對本方進行了初步研究。本文報告金海化石湯對腎結(jié)石模型大鼠的防治作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 雄性SD大鼠，體重180～220 g，購自上海斯萊克實驗動物有限公司，批號：SCXK（滬）2012-0002。

1.2 藥物與試劑 金?；瘻ㄉ钭厣珴饪s液），含1 g生藥/mL，由課題組制備；石淋通顆粒（廣西健豐藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號 141001），肌酐試劑盒、尿素氮試劑盒、鈣測定試劑盒（羅氏 COBASC PACK MULTI，批號：0777773），氯化銨（國藥集團化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號：20140904），0.9%氯化鈉注射液（杭州民生藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：41203274），乙二醇（國藥集團化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號：20141110），蘇木精（SIGMA，產(chǎn)地美國，批號：041M0014V），伊紅（產(chǎn)地美國 SIGMA，上海邁坤化工有限公司銷售，批號2012083）。

1.3 主要儀器 （1） 羅氏 COBASC501全自動生化分析儀，輪轉(zhuǎn)式切片機（RM2135型，LEICA公司）；（2）烘片機（TEC2500型，常州市郝思琳儀器設(shè)備有限公司）；（3） 顯微鏡 （BX43型，OLYMPUS公司）；（4） 冰箱（BCD-216型，青島海爾股份有限公司）；（5） 電熱恒溫培養(yǎng)箱（DRP-9082型，上海森信實驗儀器有限公司）； （6） 微量移液器 （EPPENDOF，THERMO型）；（7） 染色缸。

1.4 造模與分組

1.4.1 分組 雄性SD大鼠 70只、體質(zhì)量 180～220 g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，采用隨機數(shù)字表法分為7組，即正常組、模型驗證組（只用于造模驗證）、模型組（不做治療干預(yù)）、陽性藥物 (石淋通顆粒)組、金?；瘻蛣┝拷M、金?；瘻袆┝拷M和金?；瘻邉┝拷M。

1.4.2 造模 除正常組外，其余各組以1%氯化銨+1.25%乙二醇法［9］復(fù)制大鼠腎結(jié)石模型，即每天自由飲用冷開水配制成的1%氯化銨+1.25%乙二醇溶液，連續(xù)4周造模，正常組自由飲用冷開水。

1.4.3 模型驗證 造模第 28天，取模型驗證組大鼠（及空白組大鼠各5只，刪除），分別用代謝籠收集24 h空腹尿液。記錄每只大鼠 24 h排尿量、檢測 24 h尿鈣（Ca） 分泌量、PH值及血清尿素氮 （BUN）、肌酐（Crea）含量。處死后觀察，如腎乳頭、髓質(zhì)、皮質(zhì)、腎盞內(nèi)可見結(jié)石形成，腎皮質(zhì)、髓質(zhì)、腎小管囊性擴張及腎間質(zhì)炎性細(xì)胞滲潤等，結(jié)果說明造模成功［9］。

1.5 實驗給藥 正常組與模型組自由飲水（冷開水），陽性藥物組石淋通顆粒4.5 g/d/kg，低、中、高劑量組每天分別灌胃金?；瘻? mL/d/kg、10 mL/d/kg、20 mL/d/kg，并自由飲用冷開水補充。

1.6 觀察指標(biāo) 腎組織病理學(xué)改變情況、腎臟系數(shù)、血清尿素氮與肌酐、24 h排尿量及24 h尿鈣分泌量

1.7 實驗方法

1.7.1 腎組織病理學(xué)檢查 行HE染色，觀察各組腎皮質(zhì)、髓質(zhì)分界是否清晰，腎小球、腎小管等有無異常改變，腎間質(zhì)內(nèi)有無炎細(xì)胞浸潤及變性、出血等癥狀，重點觀測腎小管內(nèi)的草酸鈣結(jié)晶情況，以及周圍組織的病變、壞死等。

1.7.2 腎臟系數(shù)、血清尿素氮與肌酐、24 h排尿量及24 h尿鈣分泌量 實驗結(jié)束前1 d用代謝籠分別收集各大鼠24 h空腹尿液，測定24 h排尿量；最后一次給藥2 h之后，水合氯醛麻醉，腹主靜脈抽血，分離血清，-80℃凍存，用于生化測定：羅氏 COBASC501全自動生化分析儀測定血清尿素氮（BUN） 水平、肌酐（Cr） 水平；完整分離兩側(cè)腎臟，稱量腎臟重量，計算腎臟系數(shù)。一部分腎臟4%甲醛固定，行HE染色病理檢查，其余腎臟組織-80℃冰箱凍存，待將來測定腎組織鈣含量。

1.8 統(tǒng)計學(xué)方法 采用統(tǒng)計軟件SPSS 19.0版本。

2 結(jié)果

2.1 對腎結(jié)石大鼠腎組織病理學(xué)的影響 正常對照組大鼠腎組織內(nèi)腎小管、腎小球形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，無明顯炎癥、壞死，無蛋白管型；模型組腎小管囊性擴張明顯，部分?jǐn)U張嚴(yán)重，部分腎小管內(nèi)可見少量結(jié)石，腎間質(zhì)內(nèi)可見淋巴細(xì)胞浸潤及少量出血，4只大鼠腎組織內(nèi)可見少量蛋白管型，腎小球無明顯炎癥、變性；陽性對照組腎組織內(nèi)無明顯結(jié)石，腎小管囊性擴張，腎間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤程度較模型組較低，2只大鼠可見少量蛋白管型；金?；瘻蛣┝拷M腎小管中可見少量結(jié)石，腎小管囊性擴張，擴張程度少于模型組與陽性組，間質(zhì)內(nèi)炎細(xì)胞浸潤程度低于模型組，炎細(xì)胞類型以淋巴細(xì)胞為主，3只大鼠可見少量蛋白管型；金海化石湯中劑量組腎小管中未見明顯結(jié)石，腎小管囊性擴張程度明顯低于模型組，腎間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤程度較低，3只大鼠可見少量蛋白管型；金?；瘻邉┝拷M腎組織未見明顯結(jié)石，腎小管囊性擴張程度低于模型組，間質(zhì)內(nèi)炎細(xì)胞浸潤程度低于模型組，1只大鼠可見少量蛋白管型，腎小球無明顯炎癥。HE染色結(jié)果見圖1。

圖1 金?；瘻珜δI結(jié)石大鼠腎組織（HE染色）病理形態(tài)學(xué)的影響

2.2 對腎結(jié)石大鼠腎臟系數(shù)及排尿量的影響 腎臟系數(shù)模型組與正常組比較*P≤0.01，與模型組比較，金?；瘻?、高劑量組腎臟系數(shù)均顯著降低（P≤0.05），低劑量組亦明顯降低，各藥物組24 h尿量比模型組顯著增加（P≤0.05）。見表1。

表1 金海化石湯對腎臟系數(shù)及排尿量的影響（±s，n=10）

表1 金?；瘻珜δI臟系數(shù)及排尿量的影響（±s，n=10）

注：與正常組比較，**P≤0.01，*P≤0.05；與模型組比較，##P≤0.01，#P≤0.05

組別 腎臟重量（g） 腎臟系數(shù)（%） 24 h尿量（mL）正常組模型組陽性組高劑量組中劑量組低劑量組3.14±0.14 2.97±0.21 2.89±0.30 2.70±0.27 2.25±0.36 2.94±0.42 0.710 3±0.001 8 1.128 5±0.086 8**1.116 0±0.144 8 0.954 3±0.037 3##0.907 1±0.057 1##0.971 0±0.188 9 36.15±2.51 22.23±2.78 35.14±2.66#39.28±5.66#38.08±4.85#33.45±4.22#

2.3 對腎結(jié)石大鼠腎功及24 h尿鈣分泌量的影響 與正常組比較，腎結(jié)石模型組大鼠血清尿素氮、肌酐顯著增加（P<0.01）；與模型組比較，金?；瘻?、中劑量組大鼠血清尿素氮顯著降低（P≤0.01），肌酐水平有所降低；高、低劑量組與模型組及陽性組比較，24 h尿鈣分泌量顯著增加（P<0.01）。

表2 對血清尿素氮、肌酐及24 h尿鈣分泌量的影響（s，n=10）

表2 對血清尿素氮、肌酐及24 h尿鈣分泌量的影響（s，n=10）

組別 BUN(mmol/L) Crea(μmol/L) 尿Ca2+(μmol/24 h)正常組模型組陽性組7.93±0.40 18.04±2.97**17.38±2.14 35.95±4.95 51.40±6.80 51.60±7.89 56.60±8.72 20.77±12.49 11.26±8.91

續(xù)表2對血清尿素氮、肌酐及24 h尿鈣分泌量的影響（±s，n=10）

續(xù)表2對血清尿素氮、肌酐及24 h尿鈣分泌量的影響（±s，n=10）

注：與正常組比較，**P≤0.01，*P≤0.05；與模型組比較，##P≤0.01，#P≤0.05

組別 BUN(mmol/L) Crea(μmol/L) 尿Ca2+(μmol/24 h)高劑量組中劑量組低劑量組53.10±44.94##30.43±27.86 89.04±31.45##14.22±2.79 11.82±2.48##11.64±2.30##43.0±6.72 46.17±3.66 46.67±7.06

3 討論

泌尿系結(jié)石是泌尿外科的一種常見病、多發(fā)病，在中醫(yī)學(xué)上屬于“淋證”“石淋”范疇，其中80%左右屬于草酸鈣結(jié)石。本研究采用1.25%乙二醇加1%氯化銨法誘導(dǎo)大鼠制成腎結(jié)石模型，效果顯著、穩(wěn)定、簡便［2］，也是腎結(jié)石治療重要的實驗研究方法。

本研究發(fā)現(xiàn)金?；瘻芨纳颇Ｐ痛笫竽I臟組織病變、抑制腎臟系數(shù)、增加排尿量，降低模型大鼠血液中尿素氮及肌肝水平，顯著提高24 h尿鈣含量，從而達(dá)到治療腎結(jié)石的目的。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，腎結(jié)石發(fā)病原因多為與下焦?jié)駸?、下焦瘀滯、腎陰與腎氣虧虛等有關(guān)。方中以清熱利濕、通淋排石藥物金錢草、海金砂、雞內(nèi)金等為君藥，以茯苓、豬苓利尿滲濕，澤瀉泄熱利水為臣藥，以增強君藥利濕排石之功效；佐以延胡索、地龍、枳殼、莪術(shù)以行氣止痛，并推進結(jié)石排出，又佐以何首烏補肝腎、以增強腎功能，黃芪補氣利水以增強利尿作用，麥冬滋陰，以免傷陰太過，茜草收斂止血，以治療結(jié)石在下移過程中損傷尿道而引起的出血。各藥配伍，共同發(fā)揮利濕通淋、排石、止血之功，從而治療下焦?jié)駸?、下焦瘀滯、腎陰與腎氣虧虛等各型泌尿系結(jié)石，對合并有腎積水、血尿、疼痛等并發(fā)癥均能收到很好的治療作用。