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        辣木籽化學成分的不同提取方法及藥理研究概況

        2019-04-11 06:45:30,2*,2
        中國民族民間醫(yī)藥 2019年4期
        關鍵詞:辣木籽油結果表明

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        1.廣西中醫(yī)藥大學藥學院,廣西 南寧 530200;2.廣西壯瑤藥工程技術研究中心,廣西 南寧 530200

        辣木(Moringa oleifera)又稱鼓槌樹(Drumstick tree)、辣根樹(Horseradish tree)等,屬于辣木科(Moringaceae),辣木屬(Moringa Adans.),辣木科僅有一屬,共14種,原產于印度及非洲的熱帶地區(qū)[1-2]。19世紀初我國開始引種辣木,至今已成功引種栽培了印度傳統(tǒng)辣木(Moringa oleifera)、印度改良種辣木(Moringa oleifera PKM1、PKM2)和非洲辣木(Moringa stenopetala)三個種,并主要種植于廣西、廣東、云南、海南、福建、臺灣等地[3]。辣木全株可用,根、莖、葉、種子等部位均含有豐富的營養(yǎng)和藥用成分,因此稱之為“奇跡之樹”[4]。辣木根及樹皮長久以來作為藥材被人們廣泛使用;辣木葉與果莢富含豐富的礦物質元素、維生素,辣木葉中蛋白質的含量為牛奶的2~4倍,是營養(yǎng)價值很高的可食用蔬菜;辣木種子含有豐富的油脂、蛋白質、維生素及微量元素等,此外還含有必需氨基酸。提取得到的辣木油含有大量不飽和脂肪酸,其中油酸含量高達70%,因此被認為是優(yōu)質的食用油來源,且食品安全級很高[5-7]。

        辣木籽(moringa seed)呈球形,深棕色,直徑約為1 cm[8]。辣木籽富含油脂、蛋白質、維生素等營養(yǎng)成分,具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗腫瘤、降血糖血脂、護肝等多個藥理作用。辣木籽中還富含凈水活性蛋白,在水質凈化方面存在很好的應用及研究價值,且處理后的辣木籽餅不但可以作為飼料用于飼養(yǎng)家畜,而且可以作為綠色肥料用于澆灌土壤[9]。辣木籽具有高經濟價值,目前國內外對辣木籽的研究多集中在對其中含量多的功能性成分的提取及相關生物活性的研究,而對辣木籽化學成分的不同提取方法及藥理作用欠缺系統(tǒng)性的整理及歸納。為了能夠更好的為辣木籽的開發(fā)與利用提供支撐,使其在臨床方面得到廣泛的應用,現(xiàn)將辣木籽在化學成分的不同提取方法和藥理作用方面的研究綜述如下。

        1 化學成分及提取方法研究

        1.1 油脂 辣木籽富含油脂,其油脂中含有大量不飽和脂肪酸,其中油酸含量高達70%。油酸可以用來評價辣木籽油的穩(wěn)定性,油酸的含量越高,其穩(wěn)定性越好,故辣木籽油中的高含量油酸使其具有良好的穩(wěn)定性,是優(yōu)質的食用油來源[10]。辣木籽油的常見提取方法有壓榨法、溶劑法、超聲波輔助法、水酶法及超臨界CO2流體萃取法。

        1.1.1 壓榨法 壓榨法是辣木籽油的傳統(tǒng)提取方法,用物理壓榨方式從辣木籽中提取辣木油,基本步驟如下:原料的清選→剝皮→軋坯壓榨→毛油→過濾精選→辣木籽油。壓榨法的原理是利用較為強大的壓力壓榨油料使細胞破裂,從而獲得原料油。Ogunsina等[11]用冷壓榨法(CPMSO)提取辣木油,將處理干凈的原料裝入帶有1 mm的穿孔,直徑為90 mm,高為190 mm的圓柱形壓籠進行壓榨,再將獲得的毛油進行過濾,獲得辣木油,結果表明冷壓榨法提取的辣木油熱穩(wěn)定性和氧化穩(wěn)定性較好,但提取率相對較低,所得油脂的純度不高。

        1.1.2 溶劑法 溶劑浸出法是應用萃取的原理提取辣木油,選用可以溶解油脂的有機溶劑與油料接觸(例如浸泡、噴灑等),使油脂被萃取出來。劉紅等[12]利用溶劑萃取法分析提取得到的辣木油,共鑒定出41種化學組分,結果表明其主要化學成分為油酸、異油酸、 反油酸、 甘油單油酸酯和棕櫚酸,且溶劑萃取法提取的辣木油無雜質且蛋白變性程度較小,提取率也相對較高,但有機溶劑的殘留是一個待解決的重大問題。

        1.1.3 超聲波輔助法 相對于傳統(tǒng)的提取方法來說,超聲波輔助提取法的效率較高。超聲波作用的原理主要來源于空化效應,空化現(xiàn)象包括氣泡的形成、成長與崩潰三個過程,能引起湍動效應、聚能效應、微擾效應及界面效應。多種效應的共同作用使細胞壁遭到瞬間破裂,細胞內的油脂被充分地釋放出來,從而提高了出油率。超聲波輔助法具有減少溶劑使用量、降低提取溫度、節(jié)約時間、提取率高和操作簡便等優(yōu)點。余建興等[13]通過超聲輔助法提取辣木籽油,分析數(shù)據(jù)表明當在室溫下,物料比8∶1(v/m)、提取時間40 min、提取次數(shù)為2次、超聲波頻率為28 KHz時,提取率最優(yōu),為35.85%。

        1.1.4 微波輔助法 微波是一種高頻電磁波,伴隨著微波的周期,內部的極性分子往復振動產生摩擦,從而在一定程度上破壞細胞,加速細胞內油脂和功能成分的溶出。吳雪輝等[14]利用微波對辣木籽進行預處理,并比較了微波輔助、超聲輔助與溶劑萃取三種提取方法的提取率。結果表明,當微波輔助法提取工藝參數(shù)為:微波功率密度5 W/g、輻射時間6 min、溫度50℃、提取時間30 min時,提取效率高達36.45%,且高于另外兩種提取方法。

        1.1.5 水酶法 油脂存在于細胞里的形式為脂蛋白,水酶法是利用酶水解細胞壁,使辣木籽油釋放出來。Abdulkarim等[15]通過使用四種不同類型的酶來提取辣木籽油,結果表明四種酶聯(lián)用時,酶用量2.0%,溫度45℃,孵育時間36 h,pH7.5時,提取率最高。余建興等[13]利用中性蛋白酶水解辣木籽研究發(fā)現(xiàn),水酶法提取辣木籽油最優(yōu)工藝為酶用量3.0%,物料比10∶1,溫度50℃,孵育時間18 h,pH5.0。

        1.1.6 超臨界CO2流體萃取法 超臨界CO2流體萃取法能夠較好的溶解脂溶性物質,所得產物無需任何操作即可實現(xiàn)自動分離且此方法無毒無腐蝕。Ruttarattanamongkol等[16]研究發(fā)現(xiàn),利用超臨界CO2流體萃取法可以有效的提取辣木籽油,在35 MPa/30℃條件下提取率達到75.27%,提取效率最高,且與傳統(tǒng)提取方法相比較,超臨界CO2流體萃取法提取得到的辣木籽油其物理化學性質沒有實質性差異。Nguyen等[17]先通過使用乙醇對辣木籽進行預處理,然后再利用超臨界CO2提取處理過的辣木籽,結果表明此實驗方法可提高大約10%的出油率。段瓊芬等[18]在超臨界CO2試驗中發(fā)現(xiàn),在CO2流量為20 Kg/h,萃取時間180 min,萃取溫度35℃,萃取壓力20 MPa,萃取溫度40℃的條件下辣木籽油萃取率可達97%。

        1.2 揮發(fā)油 揮發(fā)油又稱精油,常用提取方法為水蒸氣蒸餾法和溶劑萃取法。饒之坤等[7]利用石油醚來提取辣木揮發(fā)油,并對辣木揮發(fā)油成分進行分析,結果表明辣木揮發(fā)油的主要成分為乙醛乙基腙、2-甲基丙酸乙酯、3-甲基丁酸乙酯、戊酸乙酯和2-羥基四氫呋喃,結構如圖1所示。鄒宇等[19]以辣木籽為原料,分別通過石油醚熱提法與超臨界CO2萃取法兩種方法對其進行提取,試驗結果表明超臨界CO2萃取法的提取效率高于石油醚熱提法。

        1.3 多糖 多糖主要分為動物多糖、植物多糖和微生物多糖三種。植物多糖具有廣泛的生物活性,包括抗病毒、抗腫瘤、抗糖尿病及降血脂等,且無毒副作用,被廣泛地應用在臨床各個領域[20]。提取多糖主要有以下幾種方法:溶劑浸提法、酶解法、超聲波輔助法及微波輔助法。

        1.3.1 溶劑浸提法 溶劑浸提法是提取辣木籽多糖的常用方法,常用的溶劑有熱水、酸、堿等。水為強極性溶劑,對于植物組織來說,有較強的滲透能力,多糖在熱水中的穩(wěn)定性好,溶解度大,故熱水浸提法較為常用。一般情況下,浸提法的工藝為:辣木籽粉碎→脫脂→浸提離心→上清液→濃縮→醇沉→洗滌除雜→干燥。梁鵬等[21]報道了熱水浸提法提取辣木籽多糖的最優(yōu)條件為浸提時間120 min、浸提溫度80℃、料液比為1∶20(g/mL),粗提率可達5.66%。董成國等[22]利用水提醇沉法提取辣木籽多糖,并通過響應曲面法對其工藝進行優(yōu)化,試驗結果表明最優(yōu)提取參數(shù)為液料比55.5 mL/g,提取時間1 h,提取溫度79℃,此工藝的實際提取率達到(14.11±0.27)%。酸堿提取法的原理是細胞在一定的酸性或堿性的條件下,會脹破從而溶出多糖。但不同的多糖對酸或堿的敏感性不同,酸堿提取法只對一部分的多糖具有高效率作用。在提取過程中還需要注意避免糖苷鍵的斷裂,對操作條件要求嚴格謹慎,故一般酸堿提取很少被用在提取植物多糖上[23]。

        1.3.2 酶解法 酶解法是利用酶能夠水解細胞壁的原理,從而提取得到多糖,加速多糖的釋放。相比較溶劑提取法來說,酶解法的條件較為溫和,提取時間短且對多糖結構的破壞性小。但酶解法不適用大規(guī)模生產,因為其成本高,對設備的要求也較苛刻。Zhu Y等[24]報道酶解法提取辣木籽多糖的最優(yōu)提取工藝參數(shù)為:pH 5.71,溫度52.03℃,提取時間33.79 min。

        1.3.3 超聲波輔助提取法 超聲波可產生較強的機械作用、空化效應和熱學效應,強烈的超聲波使細胞破裂,加速了細胞內物質的溶出,因此超聲波提取法具有高提取率的優(yōu)點,但超聲可能會對多糖的結構有所影響,應需注意。彭凌等[25]通過超聲波輔助法對多糖進行提取,利用正交試驗得出最佳提取工藝參數(shù)為超聲波處理時間為20 min、提取溫度為60℃、料液比為1∶30、提取次數(shù)為2次;并同時比較了超聲波輔助法相對于傳統(tǒng)的熱水浸提法的優(yōu)勢,即為時間縮短了6倍、溫度降低了將近20℃且提取率提高了一倍。

        1.3.4 微波輔助提取法 微波作用能夠產生大量的熱量,大量的熱量使細胞內溫度急劇升高,從而達到細胞破裂、有效成分釋放的目的。微波輔助提取法的優(yōu)點是提取時間短、提取效率較高。JonLundqvist等[26]利用微波輔助法的原理成功提取得到多糖。

        1.4 黃酮類化合物 黃酮類化合物,又稱黃酮體,主要是以2-苯基色原酮為母核的一種天然抗氧化劑。黃酮類化合物廣泛的存在于植物的各個部位,辣木籽中所含的黃酮類化合物主要以兒茶素,表兒茶素,槲皮素和山柰酚為代表[27],結構見圖2。相比較辣木葉黃酮含量而言,辣木籽中黃酮含量相對較少,提取工藝不夠系統(tǒng)完善,現(xiàn)國內外主要利用溶劑提取法與超聲波輔助提取法對辣木籽中的黃酮進行提取。

        1.4.1 溶劑提取法 黃酮常見的提取方法為溶劑提取法。陳瑞嬌等[28]研究了辣木葉中總黃酮的乙醇提取工藝,通過正交試驗確定了最佳提取工藝條件:提取劑為70 %的乙醇溶液,提取溫度60℃,料液比1∶20,提取3次,每次1 h,在此條件下,總黃酮含量達到3.95 %。孫鳴燕等[29]對比了五種不同的方法提取辣木黃酮,結果表明回流法與水提法提取黃酮的效率最高,并通過試驗得出最佳提取工藝參數(shù):提取溶劑為70%的乙醇,提取溫度80℃,乙醇用量為20倍,提取時間90 min,提取次數(shù)3次,黃酮提取率高達6.59%。

        1.4.2 超聲波輔助提取法 超聲輔助法是一種高效的提取方法,具有廣泛的應用價值。王苗苗等[30]將辣木籽干燥磨粉過篩,然后進行超聲提取、離心、取上清液,最后測定黃酮含量。試驗利用超聲來加速黃酮的溶出,采用響應曲面優(yōu)化法對超聲工藝進行優(yōu)化,獲取到最優(yōu)的工藝參數(shù)為料液比1∶35(g/mL)、提取時間40 min、提取溫度52℃、超聲功率210 W。張濤等[31]報道了超聲波提取辣木黃酮的最佳工藝條件為:室溫,水為溶劑,超聲40 min,工作間歇比2 s/2 s,循環(huán)泵25 r/s,超聲功率1200 W。與傳統(tǒng)提取相比較,節(jié)約了時間、成本,降低了污染程度。

        1.5 多酚類化合物 辣木籽中存在多種酚酸,以沒食子酸為主,其次是鞣花酸和咖啡酸,結構見圖3。多酚具有抗炎、抗氧化、抑菌等多種生物活性[32],常用的多酚提取方法為溶劑萃取法,在國內外廣泛的被用來提取植物多酚,此外還有超聲輔助提取法。

        1.5.1 溶劑萃取法 Singh等[33]分別使用乙醇、甲醇、丙酮、己烷、三氯甲烷五種溶劑均以10∶1的比例在室溫下提取辣木多酚,結果表明結合酚中的酚類化合物含量明顯高于游離酚提取物。Nouman等[34]以七個不同產地的辣木籽為原料,使用70%甲醇在70℃提取30 min,然后進行離心得到多酚粗提取。研究結果表明巴基斯坦的黑辣木籽多酚含量最高。楊迎等[35]以乙醇為溶劑,熱回流浸提法提取辣木籽多酚,研究了不同參數(shù)對多酚提取量的影響,并利用響應曲面法對辣木酚的提取進行優(yōu)化,結果表明當乙醇體積分數(shù)為66.78%、浸提溫度75.9 ℃、料液比1∶12、浸提時間1.24 h時,提取效率最高。Matshediso等[36]采用高壓熱水法提取多酚類化合物并進行工藝的優(yōu)化,避免了有機溶劑殘留的問題。Vongsak等[37]采用不同的提取方法提取辣木多酚,結果表明用70%的乙醇浸泡提取能夠獲得最大的提取率。

        1.5.2 超聲輔助提取法 傳統(tǒng)的溶劑萃取法耗時長、提取效率低。超聲波輔助提取在一定程度上能夠彌補傳統(tǒng)方法的不足。裴斐等[38]通過超聲輔助法提取辣木多酚,并利用響應面法優(yōu)化其提取工藝,最終確定最優(yōu)提取工藝參數(shù):提取時間19.5 min、料液比1∶30 g/mL、溫度20.2℃、超聲功率為250 W。

        1.6 其他化學成分 辣木籽中還含有蛋白質、維生素、可溶性纖維、生物堿等成分。辣木籽富含蛋白質,其蛋白質含量為牛奶的4倍。Santos等[39]從辣木籽中提取到了新型植物凝血素蛋白cMoL,cMoL的熱穩(wěn)定性和pH穩(wěn)定性均較強,故cMoL可作為凝聚劑。熊瑤[40]采用了四種不同的方法(堿提、超聲輔助堿提、微波提取、酶提取)提取辣木蛋白,結果表明酶提取效率最高,其中復合蛋白酶法為最佳提取方法。董小英等[6]報道了辣木籽中含有Moringine和Benzylamine兩種生物堿,因生物堿及其他成分含量較少,故提取方法的研究并不多見,在此不多贅述。

        2 藥理作用

        2.1 抗氧化作用 辣木籽具有較好的抗氧化能力,Chumark等[41]通過體外實驗測定 DPPH清除能力和Cu2+誘導低密度脂蛋白氧化的抑制作用,試驗結果表明辣木籽具有較強的抗氧化能力,研究人員建議將其作為抗動脈粥樣硬化劑。彭曉云等[42]也通過以辣木籽為原料,果蠅為實驗對象進行研究,結構表明辣木籽具有高度抗氧化作用,能夠消除體內自由基并使果蠅壽命延長。岳秀潔等[43]對辣木黃酮進行提取優(yōu)化,并報道黃酮粗提物具有很強的清除DPPH和ABTS自由基能力。Singh等[33]通過不同的體外實驗,根據(jù)DPPH清除能力、Fe還原抗氧化等能力來證實了辣木多酚的抗氧化活性。梁鵬等[44]報道了辣木多糖對羥自由基和超氧陰離子有清除作用,具有一定的抗氧化活性。

        2.2 抗炎抑菌作用 臨床上,辣木籽在抗炎抑菌方面發(fā)揮了其強大的藥理作用,辣木籽中多種成分均具有抗炎、抗菌的生物活性。辣木籽中具有抗菌活性成分的有辣木素、異硫氰酸芐酯、氨基甲酸酯類化合物等。Minaiyan等[45]研究了關于辣木籽對醋酸引發(fā)的結腸炎有治療的作用,辣木籽的醇提物和三氯甲烷提取物能夠有效的抑制炎癥的蔓延。Araujo等[46]報道辣木籽的水提取也能產生抗炎作用,產生抗炎作用的機制是辣木籽水提物作用于巨噬細胞,降低巨噬細胞中的NO、TNF-α(腫瘤壞死因子-α)、IL-1β(白細胞介素-1β)三個炎性介質的水平,減少了由角叉菜膠引起的胸膜炎中的白細胞移動從而降低白細胞的數(shù)量,發(fā)揮抗炎活性。Mahajan等[47]證實了針對由卵清白蛋白引發(fā)的氣管炎有抑制作用的物質為辣木籽乙醇提取物和正丁醇提取物。Guevara等[48]研究表明辣木籽中能夠抑制愛潑斯坦巴瑞病毒的成分為4- (α-L-Rhamnosyloxy)-苯甲基異硫氰酸鹽、β-谷甾醇-3-O-β-D-吡喃葡糖苷。Onsare等[49]研究證實辣木籽黃酮提取物對金黃色葡萄桿菌、綠膿桿菌和白色念珠菌均有抑制作用。Singh等[33]對辣木籽多酚提取物的研究表明,其提取物能夠有效地抑制蠟狀芽孢桿菌、金黃色葡萄桿菌、大腸桿菌和耶爾森菌。

        2.3 抗腫瘤作用 辣木籽中富含的多種化學成分,如油脂、多酚、多糖等,均能產生一定的抗腫瘤作用。Scheim等[50]證實了辣木籽中的不飽和脂肪酸對腫瘤的生長、腫瘤發(fā)病率均有控制作用。Elsayed等[51]研究報道了辣木籽能夠抑制乳腺癌細胞,且細胞活性與辣木籽精油的濃度成反比。Brunelli等[52]研究表明辣木籽中的異硫氰酸酯也具有抗腫瘤活性,對骨髓瘤有較好的治療作用。Bharali等[53]以大鼠為實驗對象,研究了辣木籽提取物對肝癌產物代謝酶、抗氧化參數(shù)和多發(fā)性乳頭(形)瘤病的影響,結果表明辣木籽提取物對其作用均有效。Caceres等[54]證實辣木籽油浸膏對新霉素有效果,而新霉素能夠抑制小鼠的金黃色葡萄球菌性膿皮病。由此可見,辣木籽在腫瘤治療方面有較好的潛力,在此方面仍需深入研究,為癌癥的更好治療提供理論基礎。Waiyaput等[55]研究了粗提物對HBV基因組DNA表達質粒轉染HepG2細胞中cccDNA水平的影響,結果顯示30 μg/mL的辣木籽醇提取物可以抑制HBV復制,抑制率高達85%,如圖4所示。

        2.4 降血糖血脂作用 研究表明黃酮類、多糖類、不飽和脂肪酸類等成分具有降血糖作用。陳瑞嬌等[56]研究人員首先提取辣木籽中的黃酮,然后將四氧嘧啶糖尿病小鼠作為動物模型,用消渴丸當對照品進行辣木黃酮的降血糖研究,結果表明辣木黃酮能明顯降低小鼠的血糖,同時能提高血清超氧化物歧化酶活力并降低血清脂質過氧化物含量,但辣木黃酮對正常小鼠的血糖水平無影響。Busar等[57]以大鼠為實驗模型,研究了辣木籽油對大鼠血糖的影響,結果表明辣木籽油能夠降低正常大鼠的血糖水平。Jaiswal等[58]以小鼠為動物模型研究了辣木水提物對血糖的作用,圖5、圖6展示了21天長時間使用油葉提取物對重度糖尿病大鼠FBG、PPG、血紅蛋白和總蛋白的影響,結果表明辣木水提物能夠有效地降低尿糖、尿蛋白的發(fā)生,Yassa等[59]也證實了辣木籽能夠降血糖。辣木籽油也可以降血脂,辣木籽富含油脂,其油脂中含有大量不飽和脂肪酸,其中油酸含量高達70%,具有極好的控制膽固醇能力,對心血管疾病有顯著治療效果。Duangjai等[60]報道了辣木籽提取物降血脂的機制為抑制羥甲基戊二酰輔酶A(HMG-COA)還原酶,從而減少膽固醇的合成。

        2.5 其他作用 辣木籽在臨床上可用來治療急性肝損傷,F(xiàn)akurazi等[61]研究人員已證實了辣木籽水醇提取物具有保肝作用。此外Saini等[1]報道了辣木籽中含有的辣木陽離子蛋白(MOCP)其本身具有抗菌、促凝作用,使得辣木籽在水凈化方面能夠發(fā)揮較好的生物功效。我國段瓊芬等[62]也對辣木籽凈水效果進行了研究,結果表明辣木籽可以替代化學凈水劑。辣木籽油富含維生素A和維生素C,可加速皮膚創(chuàng)口的愈合,用于皮膚病的治療。辣木籽還具有抗紫外線的作用,段瓊芬等[63]研究人員通過小鼠實驗證實辣木籽油能夠有效地隔離紫外線,防止皮膚的灼傷。辣木籽在民間也具有治療便秘的作用,賀銀鳳等[64]研究表明辣木濃縮液具有通便功效。另外,Choudhary等[65]報道辣木籽的乙醇提取物具有抗?jié)?、?zhèn)靜的藥理作用。

        3 展望

        自我國開始引種辣木起,學者對辣木化學成分的提取及生物活性方面做了深入的研究,取得了出色的成果,但辣木仍有其它的方向值得深入研究。辣木籽作為辣木的種子,同樣具有豐富的營養(yǎng)價值及藥理作用,例如抗腫瘤、抗炎、降血糖血脂等。隨著辣木籽營養(yǎng)經濟價值的提高,提取辣木籽的化學成分也是熱門研究方向,國內主要集中在提取辣木籽揮發(fā)油,而對黃酮、多糖等成分而言,研究不夠系統(tǒng)深入。例如,目前關于辣木籽黃酮提取的相關文獻主要集中在提取總黃酮方面,而對具體黃酮化學物結構沒有深入的研究。辣木籽多種活性成分的存在使其具有多種藥理作用,而活性成分的相關研究不夠細化深入,沒有具體到單體化合物。另外,關于辣木籽藥理作用機制的研究也不夠系統(tǒng)全面,是否具有多重作用機制仍需探索。辣木籽藥食兩用,對于其安全用量也值得深入研究。作為“奇跡之樹”的種子,對辣木籽進行全面深入的研究不但具有理論意義,而且有著較好的經濟、社會價值。通過對辣木籽化學成分的不同提取方法分析及藥理作用的總結,期待為后續(xù)辣木籽的深入研究提供理論支撐。

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