叢日琳 岳媛媛 王旭超

（1 榮成市中醫(yī)院臨床藥學(xué)室，山東 榮成 264300；2 榮成市石島人民醫(yī)院臨床藥學(xué)室，山東 榮成 264300；3 長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，吉林 長春 130117）

風(fēng)濕病是一種常見的反復(fù)發(fā)作的急性或慢性全身性結(jié)締組織炎癥，主要累及心臟、關(guān)節(jié)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、皮膚和皮下組織，臨床表現(xiàn)以心臟炎和關(guān)節(jié)炎為主，急性發(fā)作時通常以關(guān)節(jié)炎較為明顯［1-3］。

紅花祛風(fēng)方為紅花、延胡索等中藥的提取物外加少量冰片、麝香制備成的粉末，臨用時取處方量加入少量醫(yī)用乙醇攪拌成糊狀，涂抹于患處，用醫(yī)用紗布固定。該處方的有效性已在臨床上得到證明，但本方最大缺點(diǎn)是需要“現(xiàn)用現(xiàn)配”，用藥時一般需要他人配合，上藥后需盡量避免大量運(yùn)動，且用藥后在皮膚上有殘留，一般需要用熱水擦去，給患者使用帶來了不便。本著方便患者使用的原則，達(dá)到隨用隨貼，方便用藥和去除的目的，擬將其開發(fā)為貼劑，并開發(fā)成院內(nèi)制劑。前期實驗研究已經(jīng)確定了方中主要活性成分（總黃酮和總生物堿）的最佳提取工藝，本研究主要對紅花祛風(fēng)帖的制備方法和初步藥理學(xué)研究進(jìn)行討論。

1 材料與方法

1.1 儀器 Precisa電子分析天平（瑞士）；AB104-S電子分析天平（梅特勒）；熱風(fēng)循環(huán)涂布機(jī)組（沈陽杰飛醫(yī)藥設(shè)備制造有限公司）；PHS-3C型數(shù)字酸度計（上海精科儀器有限公司）；DHG-9030A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海善志儀器設(shè)備有限公司）；HJ-5多功能恒溫攪拌器（江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司）。

1.2 材料與試劑 紅花祛風(fēng)方提取物（自制）；氨水（北京化工廠，批號：170606）；氮酮（上海阿拉丁生化科技股份有限公司，批號：B1729034）；聚丙烯酸酯壓敏膠（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號：170912）；鄰苯二甲酸二乙酯（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號：171112）；丙二醇（上海麥克林生化科技有限公司，批號：D10053512）；聚乙二醇 400（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，批號：20171213）。

1.3 實驗動物 昆明種小鼠［合格證號：SCXK-（吉）2017-0004］，EWG/B豚鼠 ［合格證號：SCXK-（吉） 2017-0011］，所有實驗動物及飼料均購于吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院實驗動物中心。

1.4 實驗方法

1.4.1 涂料制備工藝

1.4.1.1 貼劑制備方法 按處方稱取壓敏膠、增稠劑和潤濕劑，混合均勻，加氨水調(diào)節(jié)pH 8；取紅花祛風(fēng)提取物，加入氮酮、鄰苯二甲酸二乙酯研磨均勻，加入制備好的聚丙烯酸酯壓敏膠，研勻，靜置，將涂料涂布于裱背材料上，烘干，覆蓋襯，切割為 7 cm× 10 cm，即得［4－7］。

1.4.1.2 壓敏膠的選擇 根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果，選定提取物加入量為14%，氮酮加入量為3%，鄰苯二甲酸二乙酯加入量為0.5%，依法制備貼劑［4－7］。以外觀和初黏力為考核指標(biāo)，觀察壓敏膠∶增稠劑∶潤濕劑的比值對各指標(biāo)的影響。

表1 壓敏膠的研究

結(jié)果表明，當(dāng)壓敏膠∶增稠劑∶潤濕劑在所選定范圍內(nèi)均能與物料分散均勻，但只有在比例為 100∶0.75∶0.25時貼劑的黏性適中。

1.4.1.3 載藥量的研究 其他實驗條件不變，使壓敏膠∶增稠劑∶潤濕劑的比例為 100∶0.75∶0.25，以外觀和黏力為考核指標(biāo)，按表中設(shè)計的載藥量依法制備貼劑，考察其對外觀和初黏力的影響。

表2 載藥量的選擇

結(jié)果表明，當(dāng)載藥量為12%～14%時，貼劑分散均勻，且初黏力較好，所以確定貼劑的載藥量范圍為12%～14%。

1.4.1.4 分散劑的研究 根據(jù)以上試驗結(jié)果，其他實驗條件不變，以外觀和初黏力為考核指標(biāo)，以聚乙二醇 400作為分散劑，考察分散劑用量對考核指標(biāo)的影響。

表3 分散劑的選擇

結(jié)果表明，不加入分散劑時，貼劑的外觀和初黏力都較好，加入分散劑后，初黏力反而下降，所以確定貼劑處方中不加入分散劑。

1.4.1.5 增塑劑的研究 （1）增塑劑種類的選擇：其他實驗條件不變，以外觀和初黏力為考核指標(biāo)，分別考察鄰苯二甲酸二乙酯、不同比例檸檬酸酯（TEC）與癸二酸二乙酯 （DES） 合用對產(chǎn)品質(zhì)量的影響［4－7］。

表4 增塑劑種類的選擇

結(jié)果表明，以鄰苯二甲酸二乙酯為增塑劑，貼片黏性適中，以不同比例TEC與DES合用為增塑劑，在常用比例范圍內(nèi)，貼片黏性較低，因此鄰苯二甲酸二乙酯為增塑劑。

（2）增塑劑加入量的選擇：其他實驗條件不變，按表格加入不同量的鄰苯二甲酸二乙酯，依法制備貼劑。以鋼球平均滑行距離、殘留量為考核指標(biāo)，對增塑劑鄰苯二甲酸二乙酯的加入量進(jìn)行考察。

表5 增塑劑用量的選擇

結(jié)果表明，鄰苯二甲酸二乙酯的加入量為0.25%～0.5%時，黏性適中，貼于皮膚揭下后，皮膚上無壓敏膠殘留。

1.4.1.6 驗證試驗 根據(jù)單因素試驗結(jié)果，選擇壓敏膠∶增稠劑∶潤濕劑的比例為 100∶0.75∶0.25，提取物加入量為14%，增塑劑加入量為0.4%，以分散性、初黏力為考察指標(biāo)，按5000片投料量制備涂料，結(jié)果表明，三批樣品的分散度均較好，鋼球平均滑行距離約為 4.2 cm，RSD值為0.83%。驗證結(jié)果表明該工藝穩(wěn)定可行。

1.4.2 貼劑成型工藝

1.4.2.1 濕膏重量的選擇 按表格稱取不同量的驗證工藝制備出的濕膏，均勻涂布在裱褙上，60℃干燥1 h，考察不同貼劑的濕膏重（不含布）對產(chǎn)品質(zhì)量的影響，確定貼劑的最佳濕膏重量［4－7］。

表6 濕膏重量的選擇

結(jié)果表明，當(dāng)貼劑的濕膏重（不含布）最大為1.8 g時，貼劑的黏性較好，所以確定貼劑的最佳濕膏重量為1.8 g。

1.4.2.2 烘干溫度的選擇 選擇濕膏重量為 1.8 g，其他實驗條件不變制備貼劑，以初黏力為考核指標(biāo)，考察不同烘干溫度對其的影響，確定貼劑的最佳烘干溫度［4－7］。

表7 烘干溫度的選擇

結(jié)果表明，當(dāng)烘干溫度大于60℃時，貼劑的黏性均較好，考慮經(jīng)濟(jì)因素，所以確定貼劑的最佳烘干溫度為 60℃。

1.4.2.3 烘干時間的選擇 選擇濕膏重量為1.8 g，干燥溫度為60℃，其他條件不變制備貼劑，考察不同烘干時間對產(chǎn)品質(zhì)量的影響，確定貼劑的最佳烘干時間。

表8 烘干時間的選擇

結(jié)果表明，烘干時間為 30 min，物料未干，沒有誘發(fā)出其黏度，未制成貼劑；當(dāng)烘干時間 60～90 min時貼劑的黏性均較好；超過 90 min，貼劑的黏度有下降的趨勢，考慮經(jīng)濟(jì)因素，所以確定貼劑的最佳烘干溫度為60 min。

綜上所述，貼劑最佳制備工藝為壓敏膠∶增稠劑∶潤濕劑比例為 100∶0.75∶0.25，載藥量為 14%，增塑劑用量為0.4%，取濕膏（不含布）1.8 g，烘干溫度 60℃，烘干時間 60 min。

按擬定的最佳制備工藝，按5000片貼劑投料量投料，制備樣品，結(jié)果制得樣品初黏力均值約為4.18 cm，持黏力均值約為8 min，剝離強(qiáng)度均值約為15 kg（詳細(xì)質(zhì)量分析方法和檢測結(jié)果、穩(wěn)定性等見《紅花祛風(fēng)貼質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及穩(wěn)定性研究》）。

2 初步藥理學(xué)實驗

2.1 紅花祛風(fēng)帖緩解疼痛實驗 采用小鼠扭體法進(jìn)行實驗。取昆明種小鼠隨機(jī)分為4組，每組12只。高、低劑量組實驗將小鼠腹部毛剪掉，去毛范圍為（2.0×2.0）cm2，受試面積為高劑量組 （1.5×1.5） cm2，低劑量組 （1.0×1.0） cm2，貼紅花祛風(fēng)帖，對照組按原給藥方式，按高劑量組貼劑所含提取物量稱取提取物，加適量乙醇攪成糊狀，貼于小鼠去毛區(qū)（1.5×1.5） cm2，用醫(yī)用紗布固定好，30 min后每只小鼠腹腔注射0.6%乙酸0.1 mL×10 g-1體質(zhì)量，用計數(shù)器記錄15 min內(nèi)各只小鼠的扭體次數(shù)。

空白對照組的方法注射乙酸并記錄小鼠扭體次數(shù)?？瞻讓φ战M不貼貼劑，直接依法注射乙酸［8-10］，比較紅花祛風(fēng)貼組和空白對照組的差異。

表9 紅花祛風(fēng)帖小鼠緩解疼痛實驗研究

結(jié)果表明，與空白對照組比較，紅花祛風(fēng)貼高、低劑量組和對照組均使乙酸所引起的小鼠扭體次數(shù)顯著降低 （P<0.05）。

2.2 急性毒性實驗 按5000 mg/kg體質(zhì)量的劑量，剪取紅花祛風(fēng)貼（5.0×5.0） cm2，貼在豚鼠背部脫毛區(qū)（范圍10～10 cm2），用兩層硫酸紙覆蓋，用無刺激性膠布封閉固定，24 h后去除受試物，觀察動物中毒體征，觀察期7 d，第7天稱重 1次，實驗結(jié)束處死動物并觀察大體病理改變［10-12］。

表10 紅花祛風(fēng)貼對豚鼠急性經(jīng)皮毒性實驗結(jié)果

結(jié)果表明，給予紅花祛風(fēng)貼后，動物未出現(xiàn)中毒體征，觀察期動物無死亡，大體病理解剖學(xué)檢查未見異常，LD50均大于5000 mg/kg體質(zhì)量，紅花祛風(fēng)貼對豚鼠皮膚急性毒性為實際無毒。

2.3 多次刺激性實驗 實驗前 24 h將豚鼠背部脊柱兩側(cè)毛剪掉，范圍各約 3 cm×3 cm。實驗時，剪取受試物貼在右側(cè)脫毛區(qū)，粘貼面積為2.5 cm×2.5 cm，用無刺激性膠布封閉固定1 h，左側(cè)脫毛區(qū)為對照，每天1次，連續(xù)14 d，從第2天開始，每次粘貼受試物前剪毛，用蒸餾水清除殘留受試物，1 h后觀察結(jié)果［10-12］。

表11 受試物對豚鼠多次皮膚刺激性實驗結(jié)果

使用紅花祛風(fēng)貼第2天后，有2只動物受試部位皮膚依稀可見紅斑，平均每天每只動物積分均值為0.21，結(jié)果表明受試物對豚鼠多次皮膚刺激性為無刺激性。

3 小結(jié)與討論

貼劑已成為現(xiàn)代常用制劑之一，但市場上貼劑的質(zhì)量良莠不齊：有些貼在患者身上，只要稍加運(yùn)動貼劑就會因汗液而脫離。而有些貼劑則是“貼上去容易撕下來難”，引起患者的疼痛感。究其原因主要是黏度調(diào)整的不好。因此本實驗首先以單因素和正交實驗并用的方法，以黏度為重點(diǎn)考核指標(biāo)考察了涂料的制備工藝和貼劑的成型工藝，結(jié)果表明所選擇的工藝制備出的貼劑黏度適中，經(jīng)過項目組內(nèi)實驗室人員的親身試驗，自制貼劑粘在皮膚上在正?；顒拥那闆r下不會脫落，在取下時也不會有不適感。

同時本研究還對紅花祛風(fēng)貼進(jìn)行了初步藥理學(xué)實驗，結(jié)果表明紅花祛風(fēng)貼高、低劑量組能顯著降低小鼠扭體次數(shù)（P<0.05），說明紅花祛風(fēng)貼陣痛效果明顯，其經(jīng)皮給藥作用迅速，分析其可能與選用了合適的透皮吸收促進(jìn)劑有關(guān)。急性毒性實驗表明紅花祛風(fēng)貼的最大耐受量為5000 mg/kg，7 d后病理解剖學(xué)檢查未見異常，證明紅花祛風(fēng)貼對豚鼠皮膚實際無毒；皮膚刺激性試驗證明紅花祛風(fēng)貼對豚鼠皮膚無刺激性，但在多次刺激性實驗中，使用紅花祛風(fēng)貼第2天后，有2只動物受試部位皮膚依稀可見紅斑，第8天恢復(fù)正常，平均每天每只動物積分均值為0.21，從動物積分均值來看自制貼劑無刺激性，但其是否具有長期毒性積累還需要未來更多的藥理學(xué)實驗來進(jìn)行驗證。后續(xù)項目組還將對紅花祛風(fēng)貼的工業(yè)化生產(chǎn)、皮膚轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制、量效關(guān)系等進(jìn)行系統(tǒng)研究。