虞莉 黎金鳳(通訊作者)

（揚(yáng)州市中心血站 江蘇 揚(yáng)州 225012）

乙型肝炎病毒（HBV）是引起我國(guó)肝炎疾病的主要病毒，我國(guó)HBV的攜帶者高達(dá)6%左右，是一個(gè)“乙肝大國(guó)”[1]。其通過(guò)多種途徑可以傳播，血液傳播也是其中一個(gè)方式，因此作為乙型肝炎病毒感染的最主要的檢測(cè)指標(biāo)之一的乙肝表面抗原（HBsAg），是采供血機(jī)構(gòu)篩查血液的必須檢測(cè)的指標(biāo)[2]。其檢測(cè)方法主要有金標(biāo)試紙法、ELISA法以及實(shí)時(shí)熒光聚式酶聯(lián)反應(yīng)（PCR）等。采供血機(jī)構(gòu)將金標(biāo)試紙法作為HBsAg的初篩方法，一旦檢測(cè)呈陽(yáng)性反應(yīng)，就不允許其進(jìn)行獻(xiàn)血。初篩合格的獻(xiàn)血者獻(xiàn)血后從血袋分別留取三管標(biāo)本，用于兩種不同廠家的ELISA試劑和一次核酸的檢測(cè)。不合格初篩標(biāo)本也帶回檢驗(yàn)科用兩個(gè)廠家的ELISA試劑復(fù)檢?，F(xiàn)將我站2017年1月—10月收集的197份HBsAg金標(biāo)法弱陽(yáng)性標(biāo)本和30351份金標(biāo)陰性獻(xiàn)血者的靜脈血標(biāo)本進(jìn)行ELISA檢測(cè)并對(duì)其結(jié)果分析。

1.資料和方法

1.1 一般資料

2017年1月—10月收集的HBsAg金標(biāo)法陽(yáng)性標(biāo)本197份和檢測(cè)陰性的30351份外周血標(biāo)本。

1.2 儀器和試劑

1.2.1 儀器 STAR全自動(dòng)加樣系統(tǒng)(瑞士Hamilton)、FAME全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)(瑞士Hamilton)、血清學(xué)離心機(jī)、加樣槍、一次性加樣吸頭等。

1.2.2 試劑 乙肝金標(biāo)快速試紙條（英科新創(chuàng)），乙肝病毒表面抗原診斷試劑盒（上?？迫A/珠海麗珠）。

1.3 方法

對(duì)30548份標(biāo)本分別采用上海科華和珠海麗珠生產(chǎn)的乙肝病毒表面抗原診斷試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。標(biāo)本用STAR全自動(dòng)加樣系統(tǒng)進(jìn)行加樣，加樣結(jié)束后采用FAME全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)進(jìn)行后處理并得出結(jié)果。

2.結(jié)果

2.1 對(duì)30548份獻(xiàn)血者標(biāo)本分別用金標(biāo)法和ELISA法檢測(cè)HBsAg，結(jié)果見(jiàn)表1。

從表1中可以看出ELISA法檢測(cè)標(biāo)本的HBsAg陽(yáng)性檢出率要高于金標(biāo)試紙法。

表1 兩種方法對(duì)30548個(gè)標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果 [n（%）]

用兩個(gè)廠家ELISA法試劑檢測(cè)標(biāo)本，任意一家試劑檢測(cè)陽(yáng)性，結(jié)果均判定為陽(yáng)性。

2.2 應(yīng)用兩個(gè)廠家ELISA法試劑分別對(duì)HBsAg金標(biāo)法陽(yáng)性和陰性的標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)對(duì)比見(jiàn)表2。

表2 金標(biāo)與ELISA（兩次不同廠家）法試劑檢測(cè)結(jié)果對(duì)比表 [n（%）]

從表2中可以看出金標(biāo)法檢測(cè)出陽(yáng)性的標(biāo)本，經(jīng)過(guò)ELISA檢測(cè)后約25.4%最終判定為陰性，說(shuō)明金標(biāo)法假陽(yáng)性率仍較高。

3.討論

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ELISA試劑的陽(yáng)性率高于金標(biāo)法。金標(biāo)法檢測(cè)的假陰性率為0.25%和假陽(yáng)性率25.4%。這除了在方法學(xué)上，金標(biāo)法在靈敏度和特異性方面都不如ELISA外，還有其他實(shí)際工作中的一系列影響。采供血機(jī)構(gòu)對(duì)上述檢測(cè)結(jié)果的處理辦法如下：（1）對(duì)金標(biāo)法陽(yáng)性和ELISA法雙陽(yáng)性獻(xiàn)血者進(jìn)行永久性屏蔽，終身不能獻(xiàn)血；（2）金標(biāo)法陽(yáng)性、ELISA法雙陰性獻(xiàn)血者，在其他獻(xiàn)血檢測(cè)項(xiàng)目都合格的情況下，可以通知其獻(xiàn)血；（3）金標(biāo)法陽(yáng)性、ELISA法單陽(yáng)的獻(xiàn)血者進(jìn)行暫時(shí)性屏蔽，并通知其三個(gè)月以后進(jìn)行抽血復(fù)查，若ELISA檢測(cè)結(jié)果為雙陰性則允許其獻(xiàn)血者歸隊(duì)；（4）金標(biāo)法陰性、ELISA法雙陽(yáng)的則需保密性棄血，并永久性屏蔽，不得獻(xiàn)血；（5）金標(biāo)法陰性、ELISA法單陽(yáng)的則需保密性棄血，并對(duì)其暫時(shí)性屏蔽，通知獻(xiàn)血者三個(gè)月以后進(jìn)行復(fù)查，若ELISA檢測(cè)結(jié)果為雙陰性，則允許其歸隊(duì)[3]；（6）金標(biāo)法陰性、ELISA法雙陰的，其血液標(biāo)本再次進(jìn)行核酸檢測(cè)。核酸檢測(cè)合格后方可以確認(rèn)HBsAg項(xiàng)目合格。

為了進(jìn)一步保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，防止檢測(cè)結(jié)果的假陽(yáng)性過(guò)高，采供血機(jī)構(gòu)需要制定合理規(guī)范的檢測(cè)流程，對(duì)檢測(cè)結(jié)果應(yīng)慎重分析。具體如下：（1）在采供血機(jī)構(gòu)，金標(biāo)法一般用于街頭獻(xiàn)血或者單位團(tuán)體獻(xiàn)血的初篩實(shí)驗(yàn)。站外采血現(xiàn)場(chǎng)情況復(fù)雜，導(dǎo)致檢測(cè)人員未按規(guī)定的時(shí)間（10min～15 min）觀察結(jié)果，這雖篩除了很多強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本，卻漏檢了弱陽(yáng)性標(biāo)本[4]。（2）因采血現(xiàn)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)條件的簡(jiǎn)陋，加樣槍時(shí)有被摔，使得加樣量不準(zhǔn)，影響結(jié)果判斷；而這在實(shí)驗(yàn)室是不可能發(fā)生的；（3）個(gè)別標(biāo)本可能存在HBSAg的基因突變，抑或產(chǎn)生新的其它亞型，通過(guò)金標(biāo)法無(wú)法檢出[5]。（4）現(xiàn)場(chǎng)環(huán)境溫濕度達(dá)不到要求，過(guò)分干燥或潮濕的環(huán)境以及過(guò)高或過(guò)低的溫度會(huì)影響試紙條的靈敏度和特異性；（5）很多外采操作人員一般都是非檢驗(yàn)專業(yè)，其本身的專業(yè)水平有限，時(shí)有操作不規(guī)范，以及對(duì)檢測(cè)結(jié)果的判讀因缺乏經(jīng)驗(yàn)而不夠準(zhǔn)確。而檢驗(yàn)科復(fù)做，除了ELISA方法學(xué)本身的優(yōu)勢(shì)外，一般實(shí)驗(yàn)室的溫濕度都能達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求，整個(gè)ELISA實(shí)驗(yàn)的全部過(guò)程都是自動(dòng)化，避免了人員操作的干擾因素。

因此對(duì)金標(biāo)法檢測(cè)后的標(biāo)本重新檢測(cè)就顯得尤為重要。在實(shí)際工作中，根據(jù)《血站實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理辦法》要求采供血機(jī)構(gòu)需要對(duì)獻(xiàn)血者標(biāo)本應(yīng)用兩個(gè)廠家ELISA法試劑和一次核酸檢測(cè)。但有很多采供血機(jī)構(gòu)不對(duì)金標(biāo)法陽(yáng)性的標(biāo)本進(jìn)行其他方法學(xué)的復(fù)查，筆者認(rèn)為這是不可取的。通過(guò)ELISA法對(duì)金標(biāo)法陽(yáng)性標(biāo)本的再次檢測(cè)，挽回了部分假陽(yáng)性的獻(xiàn)血者，保護(hù)了他們繼續(xù)行使無(wú)償獻(xiàn)血的權(quán)利，還可以擴(kuò)充獻(xiàn)血隊(duì)伍；同時(shí)消除了這些假陽(yáng)性獻(xiàn)血者的精神負(fù)擔(dān)，創(chuàng)造了一定的社會(huì)效益，維護(hù)了血站的形象；而金標(biāo)法陰性經(jīng)ELISA檢測(cè)陽(yáng)性的標(biāo)本，我們會(huì)用兩種不同的試劑，將標(biāo)本和其相對(duì)應(yīng)的血袋上的辮血雙孔復(fù)做，只要有一孔有反應(yīng)性，則將其血液作報(bào)廢處理；所有孔都有反應(yīng)性，則屏蔽該獻(xiàn)血員。部分有反應(yīng)的則血液報(bào)廢，通知獻(xiàn)血者定期復(fù)查，兩種試劑檢測(cè)都是陰性后，重新恢復(fù)獻(xiàn)血者獻(xiàn)血權(quán)利。目前，揚(yáng)州市中心血站對(duì)HBSAg的檢測(cè)推行了先采用不同廠家兩種試劑盒的兩次ELISA檢測(cè)，結(jié)果雙陰性的標(biāo)本再進(jìn)行一次核酸檢測(cè)。一定程度上節(jié)約了核酸檢測(cè)的成本，保障臨床用血的安全[6]。

綜上所述，為了保障臨床用血安全，珍惜寶貴血液資源。采供血機(jī)構(gòu)必須提高血液檢測(cè)的有效性和可靠性；重視操作人員業(yè)務(wù)技能培訓(xùn)，使其嚴(yán)格遵守各項(xiàng)操作規(guī)程以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。