劉國秀　翟華強　錢忠直　李絲雨　李寧寧　戴瑩　王寧寧　李紅燕　單曉松

摘要：目的 研究無硫黨參飲片的安全性、有效性質(zhì)量標準，為其質(zhì)量監(jiān)控和臨床應(yīng)用提供參考。方法 分別采用薄層色譜法、氣相色譜法測定來自5個產(chǎn)區(qū)的21批無硫黨參飲片的水分、總灰分、二氧化硫殘留量、浸出物，分別采用原子吸收分光光度法和氣相色譜法測定其重金屬及有害元素、農(nóng)藥殘留量，并采用HPLC建立黨參中黨參炔苷的含量測定方法。結(jié)果 21批黨參飲片的二氧化硫殘留不超過7 mg/kg，鉛含量不超過1.124 mg/kg，砷含量不超過0.067 mg/kg，鎘含量不超過0.058 mg/kg，汞含量不超過0.003 mg/kg，銅含量不超過14.121 mg/kg，總六六六含量不超過0.03 mg/kg，總滴滴涕含量不超過0.031 mg/kg，五氯硝基苯含量不超過0.008 mg/kg。黨參炔苷含量測定平均加樣回收率為97.71%，RSD=1.32%，平均質(zhì)量分數(shù)為0.138%。結(jié)論 無硫黨參飲片的安全性指標限量為二氧化硫殘留不超過10 mg/kg，重金屬和農(nóng)藥殘留標準符合藥典對黨參飲片的限量標準，有效性指標含量測定方法可靠，可為黨參的質(zhì)量監(jiān)控及臨床使用提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞：黨參；質(zhì)量標準；安全性；有效性；含量測定

中圖分類號：R284.1 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2019）03-0071-06

Abstract： Objective To study the safety and effectiveness of quality standards of sulfur-free Codonopsis Radix Decoction Pieces； To provide references for the quality monitoring and clinical application of sulfur-free Codonopsis Radix Decoction Pieces. Methods The check items （water， total ash， sulphur dioxide， and ethanol-soluble extractives） of 21 batches of sulfur-free Codonopsis Radix Decoction Pieces from five producing areas were determined by TLC and GC. Heavy metals， harmful elements and pesticide residues were detected by atomic absorption spectrophotometry and GC. The method for content determination of Lobetyolin in Codonopsis Radix was established by HPLC. Results Safety index check items of 21 batches of Codonopsis Radix Decoction Pieces showed： Sulfur dioxide residue ≤ 7 mg/kg， Pb content ≤ 1.124 mg/kg， As content ≤ 0.067 mg/kg， Cd content ≤ 0.058 mg/kg， Hg content ≤ 0.003 mg/kg， Cu content ≤ 14.121 mg/kg. total BHC ≤ 0.03 mg/kg， total DDT ≤ 0.031 mg/kg， and pentachloronitrobenzene （PCNB） ≤ 0.008 mg/kg. The average sample recovery rate of Lobetyolin content was 97.71%， RSD was 1.32%， and the average fraction was 0.138%. Conclusion The safety index of sulfur-free Codonopsis Radix Decoction Pieces is sulfur dioxide residue ≤ 10 mg/kg. The heavy metal and pesticide residue standards meet the limit standard for Codonopsis Radix in pharmacopoeia. The method for determining the effectiveness index is reliable， which can provide a basis for the quality control and clinical use of Codonopsis Radix.

Keywords： Codonopsis Radix； quality standards； safety； effectiveness； content determination

黨參為桔?？浦参稂h參Codonopsis pilosula （Franch.）Nannf.、素花黨參Codonopsis pilosula Nannf. var. modesta（Nannf.）L. T. Shen或川黨參Codonopsis tangshen Oliv.的干燥根[1]，為臨床常用補氣藥，功效近似人參而稍弱，能健脾益肺、養(yǎng)血生津，主產(chǎn)于山西、甘肅、陜西、四川等地，市場上有潞黨、白條黨、紋黨、板橋黨、西黨、川黨等品種[2]。黨參為傳統(tǒng)的熏硫加工中藥材[3]。近年來，隨著無硫加工技術(shù)的興起，可以在不使用二氧化硫熏蒸的條件下使黨參干燥而達到防腐爛、防霉變、防蟲蛀等效果，其質(zhì)量也得以提高[4]。然而，目前尚缺少無硫黨參飲片重金屬及有害元素限量、有機農(nóng)藥殘留限量、指標含量測定等評價標準，使其臨床應(yīng)用缺乏一定的有效性和安全性保障?；谝陨犀F(xiàn)狀，本試驗從黨參安全性指標如二氧化硫、重金屬及有害元素、有機農(nóng)藥等方面對黨參的質(zhì)量標準進行提高，以黨參中具有顯著生理活性的主要成分黨參炔苷為有效性指標成分，建立其含量測定方法，為無硫加工黨參飲片的質(zhì)量監(jiān)控和臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent1200高效液相色譜儀（G131513二極管陣列檢測器），安捷倫科技有限公司；Clarus600氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國PE公司；AA240Z、AA240原子吸收分光光度計，美國瓦里安；AFS-3100雙通道原子熒光光度計，北京科創(chuàng)海光儀器有限公司；BS 224 S型電子天平，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；METTLER AL204型電子天平，瑞士梅特勒公司；Ethos T型微波消解儀，意大利Milestone公司；KQ-250高頻數(shù)控超聲波清洗儀，昆山市超聲儀器有限公司。

對照品黨參炔苷（批號111732-200904），中國食品藥品檢定研究院；鉛（批號GBW08619 9031，500 mg/L）、砷（批號GBW08611 8114，100 mg/L）、鎘（批號GBW0612 8112，100 mg/L）、汞（批號GBW08619 9041，100 mg/L）、銅（批號GBW08615 7064，500 mg/L），五氯硝基苯（PCNB）、α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、pp'-DDE、PP'-DDD、OP'-DDT、PP'-DDT對照品溶液（濃度均為0.05 mg/mL），亞硫酸鈉，國家標準物質(zhì)中心。乙腈（色譜純），天津市光復(fù)精細化工研究所；硝酸（優(yōu)級純）、甲醇（分析純）、丙酮（色譜純）、石油醚（沸程60～90 ℃，色譜純）、二氯甲烷（色譜純），天津市大茂化學(xué)試劑廠；其余試劑均為分析純，水為純凈水和重蒸水。

21批黨參飲片由甘肅神農(nóng)文峰藥業(yè)有限公司（神農(nóng)藥業(yè)）、隴西保和堂藥業(yè)有限責(zé)任公司（保和堂藥業(yè)）生產(chǎn)并提供，由國康本草生物科技有限公司認證。樣品來源和生產(chǎn)信息見表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 飲片鑒別

2.1.1 性狀鑒別

呈圓柱形不規(guī)則的小段（長0.5～1 cm，直徑0.4～2 cm）、小節(jié)（長3～5 cm，直徑0.4～2 cm）。其余性狀符合2015年版《中華人民共和國藥典》（一部）黨參藥材的性狀特征。

2.1.2 橫斷面顯微特征

符合2015年版《中華人民共和國藥典》（一部）黨參藥材橫斷面顯微特征：木栓細胞數(shù)列至10數(shù)列，外側(cè)有石細胞，單個或成群。栓內(nèi)層窄。韌皮部寬廣，外側(cè)?，F(xiàn)裂隙，散有淡黃色乳管群，并常與篩管群交互排列。形成層成環(huán)。木質(zhì)部導(dǎo)管單個散在或數(shù)個相聚，呈放射狀排列。薄壁細胞含菊糖。

2.1.3 薄層色譜鑒別

按2015年版《中華人民共和國藥典》（一部）規(guī)定，黨參以黨參炔苷作為對照進行鑒別。取10批樣品進行薄層色譜試驗。供試品色譜中，在與黨參炔苷對照品相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點。

2.2 檢查項和浸出物測定

分別按2015年版《中華人民共和國藥典》（四部）通則0832水分測定法第二法、通則2302灰分測定法、通則2331二氧化硫殘留量測定法、通則2201醇溶性浸出物測定法（熱浸法）對21批黨參樣品的水分、總灰分、二氧化硫殘留量和浸出物進行考察。結(jié)果見表2。

由檢測結(jié)果可以看出，不同時間、不同生產(chǎn)企業(yè)加工的黨參飲片水分含量介于8%～12.5%，平均9.638%；總灰分介于2.6%～4.8%，平均3.662%；二氧化硫殘留量介于2～7 mg/kg，平均3.81 mg/kg；浸出物介于57.2%～71.6%，平均64.314%。以上各項均在2015年版《中華人民共和國藥典》（一部）對黨參藥材規(guī)定的限度之內(nèi)。

2015年版《中華人民共和國藥典》（一部）增補規(guī)定了中藥材及其飲片二氧化硫殘留限量，山藥、牛膝、粉葛、甘遂、天冬、天麻、天花粉、白及、白芍、白術(shù)、黨參等13種傳統(tǒng)習(xí)用硫黃熏蒸的中藥材及其飲片的二氧化硫殘留量不得超過400 mg/kg，其余不得超過150 mg/kg。因傳統(tǒng)加工、儲存過程中存在硫磺熏蒸習(xí)慣，而無硫黨參飲片采用黨參段、黨參節(jié)鮮貨直接加工，沒有經(jīng)過硫磺熏蒸，所以，可以考慮將非硫磺熏蒸的二氧化硫殘留限量作為無硫加工黨參的標準，也可考慮對無硫加工黨參飲片的二氧化硫殘留量標準做進一步提高。

2.3 重金屬及有害物質(zhì)殘留量測定

按2015年版《中華人民共和國藥典》（四部）通則0406原子吸收分光光度法測定21批黨參樣品的重金屬及有害元素含量。按2015年版《中華人民共和國藥典》（四部）通則2341有機氯類農(nóng)藥殘留量測定法，采用氣相色譜法測定有機氯殘留。結(jié)果見表3。

測定結(jié)果顯示，不同時間、不同生產(chǎn)企業(yè)加工的黨參飲片中鉛含量不超過1.124 mg/kg，砷含量不超過0.067 mg/kg，鎘含量不超過0.058 mg/kg，汞含量不超過0.003 mg/kg，銅含量不超過14.121 mg/kg；總六六六（總BHC）含量不超過0.03 mg/kg，總滴滴涕（總DDT）含量不超過0.031 mg/kg，PCNB含量不超過0.008 mg/kg。2015年版《中華人民共和國藥典》（一部）對甘草、黃芪等部分中藥重金屬及有害元素、有機農(nóng)藥殘留的限量規(guī)定：鉛不得過5 mg/kg，砷不得過2 mg/kg，鎘不得過0.3 mg/kg，汞不得過0.2 mg/kg，銅不得過20 mg/kg；總BHC不得過0.2 mg/kg，總DDT不得過0.2 mg/kg，PCNB不得過0.1 mg/kg。按此規(guī)定，所檢測的21批黨參樣品全部符合標準。可以考慮將甘草、黃芪等重金屬、有機農(nóng)藥殘留限量標準作為黨參的標準。

2.4 黨參炔苷含量測定

2.4.1 色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 ?m）；流動相：乙腈-水溶液（28∶72，V/V）；流速：1.0 mL/min；進樣量：10 ?L；柱溫：30 ℃；檢測波長：269 nm。理論塔板數(shù)大于4000，黨參炔苷與相鄰峰分離度均大于1.5，分離度良好[5]。色譜圖見圖1。

2.4.2 對照品溶液的制備

將黨參炔苷對照品置于干燥器中，用五氧化二磷減壓干燥12 h以上，精密稱取黨參炔苷對照品4.82 mg，置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對照品貯備液（0.482 mg/mL），精密移取此溶液5.0 mL，置于10 mL棕色容量瓶，定容至刻度，即得0.241 mg/mL的對照品溶液。

2.4.3 供試品溶液的制備

取黨參粉末（過4號篩）約2 g，精密稱定，置150 mL具塞三角瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲提?。üβ?50 W，頻率40 kHz）30 min，放至室溫，稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾，過0.45 ?m微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2.4.4 線性關(guān)系考察

精密移取濃度為0.241 mg/mL的黨參炔苷對照品溶液1、2、4、6、8、10、12 ?L，按上述色譜條件進樣，以進樣量（?g）為橫坐標、峰面積（mAU）為縱坐標繪制標準曲線，得線性方程Y=435.56X+17.491（r=0.999 2）。結(jié)果表明，黨參炔苷進樣量在0.241～2.892 ?g范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.4.5 重復(fù)性試驗

取黨參細粉6份，每份2.0 g，分別精密稱定，按“2.4.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件測定，連續(xù)進樣6次，計算得黨參炔苷含量RSD=1.56%，表明該方法重復(fù)性較好。

2.4.6 精密度試驗

精密吸取濃度為0.241 mg/mL的黨參炔苷對照品溶液10 ?L，按“2.4.1”項下色譜條件下連續(xù)進樣6次，計算得黨參炔苷峰面積RSD=0.07%，表明該儀器精密度良好。

2.4.7 穩(wěn)定性考察

稱取黨參藥材細粉約2 g，精密稱定，按“2.4.3”項下方法制備供試品溶液，分別于制備后0、2、4、6、8、10、16、24 h進樣測定，計算得峰面積RSD=2.79%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.8 加樣回收率試驗

取已知黨參炔苷含量（0.812 mg/g）的黨參樣品約1 g，共6份，精密稱定，置150 mL具塞三角瓶中，各加濃度為0.832 mg/mL黨參炔苷對照品溶液1 mL，按“2.4.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件測定黨參炔苷含量，結(jié)果平均加樣回收率為97.71%，RSD=1.32%，見表4。

2.4.9 樣品含量測定

取21份黨參樣品，按“2.4.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件進樣測定，計算黨參炔苷含量，結(jié)果見表5?？梢?，不同產(chǎn)區(qū)黨參藥材生產(chǎn)的黨參飲片中黨參炔苷的質(zhì)量分數(shù)介于0.042%～0.318%，平均為0.138%。表明不同產(chǎn)地黨參藥材質(zhì)量差異較大，導(dǎo)致黨參飲片的質(zhì)量也有較大的差異。

3 討論

本試驗對無硫黨參飲片的二氧化硫殘留量進行了研究。硫磺熏蒸能有效防腐、防霉、防蟲蛀，并有利于中藥材的干燥和增色，是一項傳統(tǒng)的中藥材貯藏養(yǎng)護加工技術(shù)。但硫磺熏蒸中藥材導(dǎo)致的二氧化硫殘留量超標嚴重危害患者的健康。代謝組學(xué)和健康風(fēng)險評估分析計算認為，入湯劑煎煮1 h以上的中藥飲片最大二氧化硫限量為750 mg/kg[6]，也有研究表明可以通過控制硫磺熏蒸時間來減少二氧化硫殘留[7]。但熏硫過程不可避免會導(dǎo)致中藥成分發(fā)生變化，進而影響其質(zhì)量[8]。無硫黨參飲片由于其特殊的加工工藝減少了二氧化硫殘留量，在安全性方面有了很大提高，有更強的市場競爭力和更安全的臨床療效。2015年版《中華人民共和國藥典》對黨參藥材的二氧化硫殘留限量為400 mg/kg，一般不用硫熏的藥材限量為150 mg/kg；WHO對草藥含硫限量也為150 mg/kg；國際食品法典委員會建議，二氧化硫殘留量>10 mg/kg的產(chǎn)品應(yīng)該予以標識[9]?？紤]到無硫黨參飲片的含硫量低，建議無硫黨參飲片的二氧化硫殘留限量不超過10 mg/kg，以利于無硫黨參飲片的國際化。

本試驗還開展了無硫黨參飲片的重金屬及有害物質(zhì)殘留、有機農(nóng)藥殘留等安全性指標的限量研究。對中藥材及飲片中重金屬及有害物質(zhì)、農(nóng)藥殘留的限定已成為行業(yè)趨勢。土壤的重金屬污染、過量使用有機農(nóng)藥，使中藥材重金屬及有害物質(zhì)、農(nóng)藥殘留量過大而嚴重影響了中藥的安全性，各國藥典均對這兩項指標進行了限量要求[10]。2015年版《中華人民共和國藥典》的重金屬限量標準只對11種植物藥、10種動物藥和6種礦物藥做了規(guī)定，其標準與國際ISO標準一致，符合中國綠色行業(yè)標準[11]。建議無硫黨參飲片的重金屬及有害物質(zhì)殘留限量與藥典和中國綠色行業(yè)標準一致：鉛不得過5 mg/kg，砷不得過2 mg/kg，鎘不得過0.3 mg/kg，汞不得過0.2 mg/kg，銅不得過20 mg/kg。由于農(nóng)藥種類的復(fù)雜性以及檢測方法的局限，目前藥典只對少數(shù)中藥品種上進行了農(nóng)藥殘留量限定[12-13]。建議無硫黨參飲片的有機農(nóng)藥殘留限量與現(xiàn)有的甘草標準一致：總BHC不得過0.2 mg/kg，總DDT不得過0.2 mg/kg，PCNB不得過0.1 mg/kg。

本試驗進行了黨參中黨參炔苷含量測定研究。黨參炔苷具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)及抗癌等多種生理活性，與其臨床藥效一致[14]。因此，開展黨參炔苷含量測定對黨參藥材及飲片的質(zhì)量控制和臨床使用具有指導(dǎo)性意義。由測定結(jié)果可以看出，黨參飲片中黨參炔苷的質(zhì)量分數(shù)介于0.042%～0.318%，波動范圍較大。建議臨床以所用批次黨參飲片中黨參炔苷的含量作為使用劑量的參考。

總之，新的干燥技術(shù)改善了傳統(tǒng)中藥材的加工方法和工藝，提高了藥材安全指標，有效保持了藥材的有用成分，進而提高了臨床上中藥飲片的等級。本試驗通過研究現(xiàn)代加工工藝下的無硫黨參飲片的安全性、有效性質(zhì)量標準，為無硫黨參飲片的臨床安全、合理用藥提供依據(jù)和保障，也為藥典黨參飲片的質(zhì)量標準提高提供參考。2015年版《中華人民共和國藥典》還收載了黨參的炮制品米炒黨參，此外，黨參還有麩炒等炮制規(guī)格。黨參通過米炒或麩炒后，其化學(xué)成分和藥效作用均可能發(fā)生變化，臨床應(yīng)用也會有所差別。本試驗也可作為黨參炮制品標準提高的參考。

參考文獻：

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：281.

[2] 郭瓊瓊，李晶，孫海峰，等.黨參揮發(fā)性成分分析及其特殊香氣研究[J].中藥材，2016，39（9）：2005-2012.

[3] 全世佑.淺析黨參的加工儲藏技術(shù)[J].甘肅農(nóng)業(yè)，2013（12）：25-26.

[4] 吳秋麗，楊曉賓，俞信光，等.中藥材原產(chǎn)地?zé)o硫加工技術(shù)研究進展[J].科技創(chuàng)新導(dǎo)報，2017（32）：79-80，82.

[5] 張麗芬，戴暉.高效液相色譜法測定黨參中黨參多糖、黨參炔苷的含量[J].臨床合理用藥雜志，2016，9（28）：91-92.

[6] KANG C， LAI C J， ZHAO D， et al. A practical protocol for comprehensive evaluation of sulfur-fumigation of Gastrodia Rhizoma using metabolome and health risk assessment analysis[J]. J Hazard Mater，2017，340：221-230.

[7] DUAN S M， XU J， BAI Y J， et al. Sulfur dioxide residue in sulfur-fumigated edible herbs：The fewer， the safer？[J]. Food Chemistry，2016，192：119-124.

[8] 段金廒，趙潤懷，宿樹蘭，等.對硫磺熏蒸藥材的基本認識與建議[J].中國現(xiàn)代中藥，2011，13（4）：3-5，14.

[9] Codex Alimentarius Commission. CODEX STAN 1-1985 General standard for the labelling of prepackaged foods （Adopted 1985. Amended 1991， 1999， 2001， 2003， 2005， 2008 and 2010.）[EB/OL]. [2018-03-05].http：//down.foodmate.net/standard/sort/11/3324. html.

[10] LIU S H， CHUANG W C， LAM W， et al. Safety surveillance of traditional Chinese medicine：current and future[J]. Drug Safety， 2015，38（2）：117-128.

[11] 郭蘭萍，周利，王升，等.《中醫(yī)藥中藥材重金屬限量中藥材重金屬限量》ISO國際標準下中藥材重金屬污染現(xiàn)狀與分析[J].科技導(dǎo)報，2017， 35（11）：91-98.

[12] 黃靖雯，南鐵貴，袁媛，等.中藥材質(zhì)量基本數(shù)據(jù)探索研究——農(nóng)藥殘留分析[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2017，23（24）：56-61.

[13] 逄瑜，于新蘭，李海芳，等.農(nóng)藥殘留測定結(jié)果不確定度評定方法指南介紹[J].中國新藥雜志，2018，27（1）：17-21.

[14] 馮佩佩，李忠祥，原忠.黨參屬藥用植物化學(xué)成分和藥理研究進展[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2012，29（4）：307-311.

（收稿日期：2018-05-10）

（修回日期：2018-07-19；編輯：陳靜）