劉國(guó)秀　翟華強(qiáng)　錢忠直　李絲雨　李寧寧　戴瑩　王寧寧　李紅燕　單曉松

摘要：目的 研究無硫黨參飲片的安全性、有效性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為其質(zhì)量監(jiān)控和臨床應(yīng)用提供參考。方法 分別采用薄層色譜法、氣相色譜法測(cè)定來自5個(gè)產(chǎn)區(qū)的21批無硫黨參飲片的水分、總灰分、二氧化硫殘留量、浸出物，分別采用原子吸收分光光度法和氣相色譜法測(cè)定其重金屬及有害元素、農(nóng)藥殘留量，并采用HPLC建立黨參中黨參炔苷的含量測(cè)定方法。結(jié)果 21批黨參飲片的二氧化硫殘留不超過7 mg/kg，鉛含量不超過1.124 mg/kg，砷含量不超過0.067 mg/kg，鎘含量不超過0.058 mg/kg，汞含量不超過0.003 mg/kg，銅含量不超過14.121 mg/kg，總六六六含量不超過0.03 mg/kg，總滴滴涕含量不超過0.031 mg/kg，五氯硝基苯含量不超過0.008 mg/kg。黨參炔苷含量測(cè)定平均加樣回收率為97.71%，RSD=1.32%，平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.138%。結(jié)論 無硫黨參飲片的安全性指標(biāo)限量為二氧化硫殘留不超過10 mg/kg，重金屬和農(nóng)藥殘留標(biāo)準(zhǔn)符合藥典對(duì)黨參飲片的限量標(biāo)準(zhǔn)，有效性指標(biāo)含量測(cè)定方法可靠，可為黨參的質(zhì)量監(jiān)控及臨床使用提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞：黨參；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；安全性；有效性；含量測(cè)定

中圖分類號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-5304（2019）03-0071-06

Abstract： Objective To study the safety and effectiveness of quality standards of sulfur-free Codonopsis Radix Decoction Pieces； To provide references for the quality monitoring and clinical application of sulfur-free Codonopsis Radix Decoction Pieces. Methods The check items （water， total ash， sulphur dioxide， and ethanol-soluble extractives） of 21 batches of sulfur-free Codonopsis Radix Decoction Pieces from five producing areas were determined by TLC and GC. Heavy metals， harmful elements and pesticide residues were detected by atomic absorption spectrophotometry and GC. The method for content determination of Lobetyolin in Codonopsis Radix was established by HPLC. Results Safety index check items of 21 batches of Codonopsis Radix Decoction Pieces showed： Sulfur dioxide residue ≤ 7 mg/kg， Pb content ≤ 1.124 mg/kg， As content ≤ 0.067 mg/kg， Cd content ≤ 0.058 mg/kg， Hg content ≤ 0.003 mg/kg， Cu content ≤ 14.121 mg/kg. total BHC ≤ 0.03 mg/kg， total DDT ≤ 0.031 mg/kg， and pentachloronitrobenzene （PCNB） ≤ 0.008 mg/kg. The average sample recovery rate of Lobetyolin content was 97.71%， RSD was 1.32%， and the average fraction was 0.138%. Conclusion The safety index of sulfur-free Codonopsis Radix Decoction Pieces is sulfur dioxide residue ≤ 10 mg/kg. The heavy metal and pesticide residue standards meet the limit standard for Codonopsis Radix in pharmacopoeia. The method for determining the effectiveness index is reliable， which can provide a basis for the quality control and clinical use of Codonopsis Radix.

Keywords： Codonopsis Radix； quality standards； safety； effectiveness； content determination

黨參為桔?？浦参稂h參Codonopsis pilosula （Franch.）Nannf.、素花黨參Codonopsis pilosula Nannf. var. modesta（Nannf.）L. T. Shen或川黨參Codonopsis tangshen Oliv.的干燥根[1]，為臨床常用補(bǔ)氣藥，功效近似人參而稍弱，能健脾益肺、養(yǎng)血生津，主產(chǎn)于山西、甘肅、陜西、四川等地，市場(chǎng)上有潞黨、白條黨、紋黨、板橋黨、西黨、川黨等品種[2]。黨參為傳統(tǒng)的熏硫加工中藥材[3]。近年來，隨著無硫加工技術(shù)的興起，可以在不使用二氧化硫熏蒸的條件下使黨參干燥而達(dá)到防腐爛、防霉變、防蟲蛀等效果，其質(zhì)量也得以提高[4]。然而，目前尚缺少無硫黨參飲片重金屬及有害元素限量、有機(jī)農(nóng)藥殘留限量、指標(biāo)含量測(cè)定等評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，使其臨床應(yīng)用缺乏一定的有效性和安全性保障?；谝陨犀F(xiàn)狀，本試驗(yàn)從黨參安全性指標(biāo)如二氧化硫、重金屬及有害元素、有機(jī)農(nóng)藥等方面對(duì)黨參的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行提高，以黨參中具有顯著生理活性的主要成分黨參炔苷為有效性指標(biāo)成分，建立其含量測(cè)定方法，為無硫加工黨參飲片的質(zhì)量監(jiān)控和臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent1200高效液相色譜儀（G131513二極管陣列檢測(cè)器），安捷倫科技有限公司；Clarus600氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國(guó)PE公司；AA240Z、AA240原子吸收分光光度計(jì)，美國(guó)瓦里安；AFS-3100雙通道原子熒光光度計(jì)，北京科創(chuàng)海光儀器有限公司；BS 224 S型電子天平，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；METTLER AL204型電子天平，瑞士梅特勒公司；Ethos T型微波消解儀，意大利Milestone公司；KQ-250高頻數(shù)控超聲波清洗儀，昆山市超聲儀器有限公司。

對(duì)照品黨參炔苷（批號(hào)111732-200904），中國(guó)食品藥品檢定研究院；鉛（批號(hào)GBW08619 9031，500 mg/L）、砷（批號(hào)GBW08611 8114，100 mg/L）、鎘（批號(hào)GBW0612 8112，100 mg/L）、汞（批號(hào)GBW08619 9041，100 mg/L）、銅（批號(hào)GBW08615 7064，500 mg/L），五氯硝基苯（PCNB）、α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、pp'-DDE、PP'-DDD、OP'-DDT、PP'-DDT對(duì)照品溶液（濃度均為0.05 mg/mL），亞硫酸鈉，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心。乙腈（色譜純），天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所；硝酸（優(yōu)級(jí)純）、甲醇（分析純）、丙酮（色譜純）、石油醚（沸程60～90 ℃，色譜純）、二氯甲烷（色譜純），天津市大茂化學(xué)試劑廠；其余試劑均為分析純，水為純凈水和重蒸水。

21批黨參飲片由甘肅神農(nóng)文峰藥業(yè)有限公司（神農(nóng)藥業(yè)）、隴西保和堂藥業(yè)有限責(zé)任公司（保和堂藥業(yè)）生產(chǎn)并提供，由國(guó)康本草生物科技有限公司認(rèn)證。樣品來源和生產(chǎn)信息見表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 飲片鑒別

2.1.1 性狀鑒別

呈圓柱形不規(guī)則的小段（長(zhǎng)0.5～1 cm，直徑0.4～2 cm）、小節(jié)（長(zhǎng)3～5 cm，直徑0.4～2 cm）。其余性狀符合2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》（一部）黨參藥材的性狀特征。

2.1.2 橫斷面顯微特征

符合2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》（一部）黨參藥材橫斷面顯微特征：木栓細(xì)胞數(shù)列至10數(shù)列，外側(cè)有石細(xì)胞，單個(gè)或成群。栓內(nèi)層窄。韌皮部寬廣，外側(cè)常現(xiàn)裂隙，散有淡黃色乳管群，并常與篩管群交互排列。形成層成環(huán)。木質(zhì)部導(dǎo)管單個(gè)散在或數(shù)個(gè)相聚，呈放射狀排列。薄壁細(xì)胞含菊糖。

2.1.3 薄層色譜鑒別

按2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》（一部）規(guī)定，黨參以黨參炔苷作為對(duì)照進(jìn)行鑒別。取10批樣品進(jìn)行薄層色譜試驗(yàn)。供試品色譜中，在與黨參炔苷對(duì)照品相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。

2.2 檢查項(xiàng)和浸出物測(cè)定

分別按2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》（四部）通則0832水分測(cè)定法第二法、通則2302灰分測(cè)定法、通則2331二氧化硫殘留量測(cè)定法、通則2201醇溶性浸出物測(cè)定法（熱浸法）對(duì)21批黨參樣品的水分、總灰分、二氧化硫殘留量和浸出物進(jìn)行考察。結(jié)果見表2。

由檢測(cè)結(jié)果可以看出，不同時(shí)間、不同生產(chǎn)企業(yè)加工的黨參飲片水分含量介于8%～12.5%，平均9.638%；總灰分介于2.6%～4.8%，平均3.662%；二氧化硫殘留量介于2～7 mg/kg，平均3.81 mg/kg；浸出物介于57.2%～71.6%，平均64.314%。以上各項(xiàng)均在2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》（一部）對(duì)黨參藥材規(guī)定的限度之內(nèi)。

2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》（一部）增補(bǔ)規(guī)定了中藥材及其飲片二氧化硫殘留限量，山藥、牛膝、粉葛、甘遂、天冬、天麻、天花粉、白及、白芍、白術(shù)、黨參等13種傳統(tǒng)習(xí)用硫黃熏蒸的中藥材及其飲片的二氧化硫殘留量不得超過400 mg/kg，其余不得超過150 mg/kg。因傳統(tǒng)加工、儲(chǔ)存過程中存在硫磺熏蒸習(xí)慣，而無硫黨參飲片采用黨參段、黨參節(jié)鮮貨直接加工，沒有經(jīng)過硫磺熏蒸，所以，可以考慮將非硫磺熏蒸的二氧化硫殘留限量作為無硫加工黨參的標(biāo)準(zhǔn)，也可考慮對(duì)無硫加工黨參飲片的二氧化硫殘留量標(biāo)準(zhǔn)做進(jìn)一步提高。

2.3 重金屬及有害物質(zhì)殘留量測(cè)定

按2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》（四部）通則0406原子吸收分光光度法測(cè)定21批黨參樣品的重金屬及有害元素含量。按2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》（四部）通則2341有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量測(cè)定法，采用氣相色譜法測(cè)定有機(jī)氯殘留。結(jié)果見表3。

測(cè)定結(jié)果顯示，不同時(shí)間、不同生產(chǎn)企業(yè)加工的黨參飲片中鉛含量不超過1.124 mg/kg，砷含量不超過0.067 mg/kg，鎘含量不超過0.058 mg/kg，汞含量不超過0.003 mg/kg，銅含量不超過14.121 mg/kg；總六六六（總BHC）含量不超過0.03 mg/kg，總滴滴涕（總DDT）含量不超過0.031 mg/kg，PCNB含量不超過0.008 mg/kg。2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》（一部）對(duì)甘草、黃芪等部分中藥重金屬及有害元素、有機(jī)農(nóng)藥殘留的限量規(guī)定：鉛不得過5 mg/kg，砷不得過2 mg/kg，鎘不得過0.3 mg/kg，汞不得過0.2 mg/kg，銅不得過20 mg/kg；總BHC不得過0.2 mg/kg，總DDT不得過0.2 mg/kg，PCNB不得過0.1 mg/kg。按此規(guī)定，所檢測(cè)的21批黨參樣品全部符合標(biāo)準(zhǔn)。可以考慮將甘草、黃芪等重金屬、有機(jī)農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)作為黨參的標(biāo)準(zhǔn)。

2.4 黨參炔苷含量測(cè)定

2.4.1 色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 ?m）；流動(dòng)相：乙腈-水溶液（28∶72，V/V）；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 ?L；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：269 nm。理論塔板數(shù)大于4000，黨參炔苷與相鄰峰分離度均大于1.5，分離度良好[5]。色譜圖見圖1。

2.4.2 對(duì)照品溶液的制備

將黨參炔苷對(duì)照品置于干燥器中，用五氧化二磷減壓干燥12 h以上，精密稱取黨參炔苷對(duì)照品4.82 mg，置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對(duì)照品貯備液（0.482 mg/mL），精密移取此溶液5.0 mL，置于10 mL棕色容量瓶，定容至刻度，即得0.241 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.4.3 供試品溶液的制備

取黨參粉末（過4號(hào)篩）約2 g，精密稱定，置150 mL具塞三角瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲提?。üβ?50 W，頻率40 kHz）30 min，放至室溫，稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾，過0.45 ?m微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2.4.4 線性關(guān)系考察

精密移取濃度為0.241 mg/mL的黨參炔苷對(duì)照品溶液1、2、4、6、8、10、12 ?L，按上述色譜條件進(jìn)樣，以進(jìn)樣量（?g）為橫坐標(biāo)、峰面積（mAU）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程Y=435.56X+17.491（r=0.999 2）。結(jié)果表明，黨參炔苷進(jìn)樣量在0.241～2.892 ?g范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.4.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取黨參細(xì)粉6份，每份2.0 g，分別精密稱定，按“2.4.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算得黨參炔苷含量RSD=1.56%，表明該方法重復(fù)性較好。

2.4.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取濃度為0.241 mg/mL的黨參炔苷對(duì)照品溶液10 ?L，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算得黨參炔苷峰面積RSD=0.07%，表明該儀器精密度良好。

2.4.7 穩(wěn)定性考察

稱取黨參藥材細(xì)粉約2 g，精密稱定，按“2.4.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于制備后0、2、4、6、8、10、16、24 h進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算得峰面積RSD=2.79%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知黨參炔苷含量（0.812 mg/g）的黨參樣品約1 g，共6份，精密稱定，置150 mL具塞三角瓶中，各加濃度為0.832 mg/mL黨參炔苷對(duì)照品溶液1 mL，按“2.4.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定黨參炔苷含量，結(jié)果平均加樣回收率為97.71%，RSD=1.32%，見表4。

2.4.9 樣品含量測(cè)定

取21份黨參樣品，按“2.4.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算黨參炔苷含量，結(jié)果見表5?？梢姡煌a(chǎn)區(qū)黨參藥材生產(chǎn)的黨參飲片中黨參炔苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)介于0.042%～0.318%，平均為0.138%。表明不同產(chǎn)地黨參藥材質(zhì)量差異較大，導(dǎo)致黨參飲片的質(zhì)量也有較大的差異。

3 討論

本試驗(yàn)對(duì)無硫黨參飲片的二氧化硫殘留量進(jìn)行了研究。硫磺熏蒸能有效防腐、防霉、防蟲蛀，并有利于中藥材的干燥和增色，是一項(xiàng)傳統(tǒng)的中藥材貯藏養(yǎng)護(hù)加工技術(shù)。但硫磺熏蒸中藥材導(dǎo)致的二氧化硫殘留量超標(biāo)嚴(yán)重危害患者的健康。代謝組學(xué)和健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估分析計(jì)算認(rèn)為，入湯劑煎煮1 h以上的中藥飲片最大二氧化硫限量為750 mg/kg[6]，也有研究表明可以通過控制硫磺熏蒸時(shí)間來減少二氧化硫殘留[7]。但熏硫過程不可避免會(huì)導(dǎo)致中藥成分發(fā)生變化，進(jìn)而影響其質(zhì)量[8]。無硫黨參飲片由于其特殊的加工工藝減少了二氧化硫殘留量，在安全性方面有了很大提高，有更強(qiáng)的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力和更安全的臨床療效。2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》對(duì)黨參藥材的二氧化硫殘留限量為400 mg/kg，一般不用硫熏的藥材限量為150 mg/kg；WHO對(duì)草藥含硫限量也為150 mg/kg；國(guó)際食品法典委員會(huì)建議，二氧化硫殘留量>10 mg/kg的產(chǎn)品應(yīng)該予以標(biāo)識(shí)[9]。考慮到無硫黨參飲片的含硫量低，建議無硫黨參飲片的二氧化硫殘留限量不超過10 mg/kg，以利于無硫黨參飲片的國(guó)際化。

本試驗(yàn)還開展了無硫黨參飲片的重金屬及有害物質(zhì)殘留、有機(jī)農(nóng)藥殘留等安全性指標(biāo)的限量研究。對(duì)中藥材及飲片中重金屬及有害物質(zhì)、農(nóng)藥殘留的限定已成為行業(yè)趨勢(shì)。土壤的重金屬污染、過量使用有機(jī)農(nóng)藥，使中藥材重金屬及有害物質(zhì)、農(nóng)藥殘留量過大而嚴(yán)重影響了中藥的安全性，各國(guó)藥典均對(duì)這兩項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行了限量要求[10]。2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》的重金屬限量標(biāo)準(zhǔn)只對(duì)11種植物藥、10種動(dòng)物藥和6種礦物藥做了規(guī)定，其標(biāo)準(zhǔn)與國(guó)際ISO標(biāo)準(zhǔn)一致，符合中國(guó)綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[11]。建議無硫黨參飲片的重金屬及有害物質(zhì)殘留限量與藥典和中國(guó)綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)一致：鉛不得過5 mg/kg，砷不得過2 mg/kg，鎘不得過0.3 mg/kg，汞不得過0.2 mg/kg，銅不得過20 mg/kg。由于農(nóng)藥種類的復(fù)雜性以及檢測(cè)方法的局限，目前藥典只對(duì)少數(shù)中藥品種上進(jìn)行了農(nóng)藥殘留量限定[12-13]。建議無硫黨參飲片的有機(jī)農(nóng)藥殘留限量與現(xiàn)有的甘草標(biāo)準(zhǔn)一致：總BHC不得過0.2 mg/kg，總DDT不得過0.2 mg/kg，PCNB不得過0.1 mg/kg。

本試驗(yàn)進(jìn)行了黨參中黨參炔苷含量測(cè)定研究。黨參炔苷具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)及抗癌等多種生理活性，與其臨床藥效一致[14]。因此，開展黨參炔苷含量測(cè)定對(duì)黨參藥材及飲片的質(zhì)量控制和臨床使用具有指導(dǎo)性意義。由測(cè)定結(jié)果可以看出，黨參飲片中黨參炔苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)介于0.042%～0.318%，波動(dòng)范圍較大。建議臨床以所用批次黨參飲片中黨參炔苷的含量作為使用劑量的參考。

總之，新的干燥技術(shù)改善了傳統(tǒng)中藥材的加工方法和工藝，提高了藥材安全指標(biāo)，有效保持了藥材的有用成分，進(jìn)而提高了臨床上中藥飲片的等級(jí)。本試驗(yàn)通過研究現(xiàn)代加工工藝下的無硫黨參飲片的安全性、有效性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為無硫黨參飲片的臨床安全、合理用藥提供依據(jù)和保障，也為藥典黨參飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高提供參考。2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》還收載了黨參的炮制品米炒黨參，此外，黨參還有麩炒等炮制規(guī)格。黨參通過米炒或麩炒后，其化學(xué)成分和藥效作用均可能發(fā)生變化，臨床應(yīng)用也會(huì)有所差別。本試驗(yàn)也可作為黨參炮制品標(biāo)準(zhǔn)提高的參考。

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（收稿日期：2018-05-10）

（修回日期：2018-07-19；編輯：陳靜）