賀長(zhǎng)興，鄒韶紅，賈麗娜，徐向東，趙宗峰，佟鈣玉，張 義，張 丞

(1.石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院，新疆 石河子 832003；2.新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830001；3.新疆精神衛(wèi)生中心，新疆 烏魯木齊 830002

酒依賴在雙相情感障礙患者中較普遍，45%的雙相情感障礙患者共病酒依賴，兩種疾病共病的終身患病率約為35%[1-3]。雙相情感障礙的自殺率是普通人群的20～30倍[4]，酒精的使用會(huì)影響雙相情感障礙的預(yù)后并增加其復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)[5-6]。雙相情感障礙遺傳度為60%～85%，其遺傳度與親屬關(guān)系程度存在顯著關(guān)聯(lián)[7-8]。酒依賴的遺傳度為30%～70%，多巴胺(DA)系統(tǒng)、5-羥色胺(5-HT)系統(tǒng)與酒依賴相關(guān)[9-10]。精神疾病的攻擊行為分為手段性、沖動(dòng)性、精神病性攻擊行為，雙相情感障礙的攻擊行為多數(shù)是沖動(dòng)攻擊行為，大腦前額葉皮質(zhì)5-HT能神經(jīng)元減少與其攻擊行為有關(guān)[11-13]。5-HT及其代謝物水平下降導(dǎo)致沖動(dòng)攻擊行為增加，5-HTR1B被認(rèn)為是與人類和嚙齒類動(dòng)物攻擊性有關(guān)的候選基因，與多種精神病理學(xué)有關(guān)，包括病理性侵犯、酗酒和自殺等[14-15]。研究顯示，暴露在攻擊性環(huán)境中的大鼠5-HTR1B濃度增加，進(jìn)而導(dǎo)致大鼠的沖動(dòng)攻擊性增加[16]。已有較多關(guān)于5-HTR1B rs6296多態(tài)性與各種精神疾病患者沖動(dòng)攻擊行為關(guān)聯(lián)性的研究報(bào)道[17-22]，但關(guān)于該基因多態(tài)性與酒依賴共病雙相情感障礙的研究尚無報(bào)道。本研究探討酒依賴共病雙相情感障礙患者的沖動(dòng)攻擊行為與5-HTR1B rs6296基因多態(tài)性的關(guān)聯(lián)性，為酒依賴共病雙相情感障礙患者的沖動(dòng)攻擊行為導(dǎo)致病理生理改變機(jī)制潛在遺傳學(xué)差異的研究提供參考。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

收集2013年1月-2014年10月就診于新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院臨床心理科與新疆精神衛(wèi)生中心戒酒科的住院患者。入組標(biāo)準(zhǔn)：①符合《精神障礙診斷與統(tǒng)計(jì)手冊(cè)(第4版)》(Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders，fourth edition，DSM-IV)酒依賴診斷標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)符合雙相情感障礙診斷標(biāo)準(zhǔn)；②男性；③經(jīng)兩名具備精神科主治醫(yī)師以上職稱的醫(yī)師明確診斷。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有腦器質(zhì)性疾病史、軀體疾病史；②患有其他精神活性物質(zhì)和非依賴性物質(zhì)所致心境障礙。符合入組標(biāo)準(zhǔn)且不符合排除標(biāo)準(zhǔn)共230例。根據(jù)修訂版外顯攻擊行為量表(Modified Overt Aggression Scale，MOAS)評(píng)分分為研究組(沖動(dòng)攻擊行為組)和對(duì)照組(無沖動(dòng)攻擊行為組)：MOAS加權(quán)總分≥5分且“體力攻擊”項(xiàng)≥1分，為研究組(n=128)；加權(quán)總分≤4分且“體力攻擊”項(xiàng)為0分，為對(duì)照組(n=102)。本研究通過新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院倫理委員會(huì)審批，研究對(duì)象及家屬均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 評(píng)定方法

采用自制一般情況調(diào)查表收集研究對(duì)象的年齡、民族、受教育程度、經(jīng)濟(jì)狀況等資料。采用MOAS評(píng)定患者入院前1周攻擊行為的種類和程度。采用0～4分5級(jí)評(píng)分法，MOAS將4類攻擊行為分別命名為言語攻擊、對(duì)財(cái)產(chǎn)的攻擊、自身攻擊和體力攻擊。以MOAS加權(quán)總分評(píng)定患者總體嚴(yán)重程度，加權(quán)總分=言語攻擊評(píng)分×1+對(duì)財(cái)產(chǎn)的攻擊評(píng)分×2+自身攻擊評(píng)分×3+體力攻擊評(píng)分×4。加權(quán)總分越高，攻擊行為越強(qiáng)。

由1名精神科主治醫(yī)師和研究者共同對(duì)患者進(jìn)行測(cè)評(píng)，測(cè)評(píng)地點(diǎn)為心理測(cè)評(píng)室。在調(diào)查前進(jìn)行系統(tǒng)的評(píng)定方法學(xué)習(xí)和訓(xùn)練?；颊咴谘芯空咧笇?dǎo)下填寫MOAS，其中有關(guān)攻擊行為的敏感問題由研究者對(duì)患者進(jìn)行詳細(xì)講解溝通后記錄，若有可疑信息，則再次詢問其家屬以確認(rèn)。

1.2.2 基因組DNA提取及特定片段PCR擴(kuò)增

在患者住院次日早晨，使用抗凝管收集3～4 mL空腹外周靜脈血。采用試劑盒法提取DNA。rs6296上游引物為：5'-GAAACAGACGCC CAACAGGAC-3'，下游引物為：5'-GAAACAGACG CCCAACAGGAC-3'。PCR反應(yīng)總體系：30 μL，反應(yīng)液：PCR mix 15 μL，模板DNA：1 μL，上下游引物各1 μL(10 mol/L)，添加滅菌雙蒸水至30 μL，使用PCR擴(kuò)增儀擴(kuò)增。反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性5 min，95℃變性30 s，58℃退火45 s，72℃延伸30 s；35個(gè)循環(huán)，72℃延伸5 min，4℃保存。反應(yīng)結(jié)束后取擴(kuò)增產(chǎn)物5 μL，置于1%瓊脂糖凝膠中電泳20 min(恒壓150 V)，使用凝膠成像系統(tǒng)對(duì)電泳結(jié)果進(jìn)行觀測(cè)、拍照。由北京鼎國(guó)生物技術(shù)工程公司對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序、分型并記錄rs6296位點(diǎn)的多態(tài)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)、基因型分布和等位基因頻率差異比較均采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 兩組一般情況比較

研究組128例，均為漢族，年齡24～64 歲，平均(40.18±6.25)歲；對(duì)照組102例，均為漢族，年齡26～63 歲，平均( 41.08±6.28)歲。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均> 0.05)。見表1。

表1 兩組一般資料比較

2.2 兩組等位基因和基因型頻率比較

有沖動(dòng)攻擊行為的酒依賴共病雙相情感障礙患者組與無沖攻擊行為組5-HTR1B rs6296位點(diǎn)等位基因和基因型頻率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見表2。

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)酒依賴共病雙相情感障礙患者的沖動(dòng)攻擊行為與5-HTR1B rs6296基因多態(tài)性的關(guān)聯(lián)性進(jìn)行研究，結(jié)果顯示酒依賴共病雙相情感障礙患者沖動(dòng)攻擊行為與5-HTR1B rs6296基因多態(tài)性無相關(guān)性。目前部分關(guān)于精神疾病的癥狀學(xué)、基因?qū)W研究取得了與本研究一致的結(jié)果：Contini等[17]的單倍型分析實(shí)驗(yàn)表明，5-HTR1B rs6296多態(tài)性在酒依賴患者中存在強(qiáng)陽性控制。Yi等[18]對(duì)漢族穢語綜合癥(Tourette syndrome，TS)患者的研究顯示，5-HT1B rs6296基因多態(tài)性與漢族TS患者的沖動(dòng)攻擊行為無相關(guān)性。Müller等[19]對(duì)注意力缺陷多動(dòng)障礙(Attention-deficit hype ractivity disorder，ADHD)患者與5-HT1BR關(guān)聯(lián)性進(jìn)行研究，結(jié)果顯示rs6296位點(diǎn)與ADHD患者外在的反社會(huì)行為無關(guān)聯(lián)性。

表2 兩組等位基因和基因型頻率比較[n(%)]

另外幾項(xiàng)研究結(jié)果與本研究存在差異：Ortiz等[20]認(rèn)為血清素(5-HT又稱為血清素)與谷氨酸之間存在的生物作用可能影響強(qiáng)迫癥(Obsessive-compulsive disorder，OCD)兒童患者的病理生理學(xué)途徑，且rs6296位點(diǎn)基因多態(tài)性與之有著明顯的相關(guān)性。Kao等[21]的研究顯示，5-HTR1B rs6296-C等位基因通過降低HTR1B mRNA水平，進(jìn)而導(dǎo)致抑郁癥患者表現(xiàn)出更多的攻擊行為，甚至產(chǎn)生自殺意念。Hakulinen等[22]的一項(xiàng)大樣本研究顯示，5-HTR1B SNP rs6296與兒童時(shí)期的攻擊行為有關(guān)，攜帶C/C基因型的個(gè)體比攜帶C/G者更具有攻擊性。HTR1B SNP rs6296可能修改了童年攻擊行為與成年人敵對(duì)行為之間的關(guān)系。激進(jìn)的行為和敵意可能會(huì)形成一種生活過程模式，而HTR1B rs6296基因可能有助于這種模式的發(fā)展。5-HT是色氨酸代謝途徑的產(chǎn)物，是人類中樞神經(jīng)系統(tǒng)最重要的神經(jīng)遞質(zhì)之一，在學(xué)習(xí)、記憶、睡眠及情緒中發(fā)揮重要作用。5-HT受體通過激酶和磷脂酶信號(hào)通路級(jí)聯(lián)介導(dǎo)其生物學(xué)效應(yīng)，最終改變突觸后電位、可塑性和基因表達(dá)。

上述實(shí)驗(yàn)提示rs6296基因多態(tài)性與沖動(dòng)攻擊行為的關(guān)聯(lián)性在不同的精神障礙中存在不同的效應(yīng)。也有研究表明5-HTR1B其他位點(diǎn)基因也存在相似的效應(yīng)：Huang等[23]對(duì)精神病患者和健康志愿者的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：藥物濫用障礙和重度抑郁似乎與5-HTR1B G861C基因座有關(guān)，但未發(fā)現(xiàn)雙相情感障礙、精神分裂癥、酗酒和自殺企圖與該基因多態(tài)性相關(guān)。

本研究不足之處：酒依賴及雙相情感障礙是多病因、多基因遺傳性疾病，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了5-HT1B基因單位點(diǎn)的多態(tài)性研究，忽略了環(huán)境因素在疾病病因?qū)W中的作用。在以后的實(shí)驗(yàn)中應(yīng)進(jìn)一步完善各基因的多位點(diǎn)多態(tài)性聯(lián)合研究，并增加與環(huán)境因素、負(fù)性生活經(jīng)歷的交互研究。