劉 納,高 琴,鐘 攀

(四川省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全中心，四川 成都 610041)

測(cè)量不確定度是利用可獲得的信息，表征賦予被測(cè)量值分散性的非負(fù)參數(shù)[1]。不確定度的評(píng)估是檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室之間互認(rèn)的基礎(chǔ)，是評(píng)定測(cè)量結(jié)果質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)[2]。本文結(jié)合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法和實(shí)際操作，以黃瓜中聯(lián)苯菊酯測(cè)量為例，對(duì)其農(nóng)藥殘留的不確定度進(jìn)行了評(píng)定，為蔬果中有機(jī)氯農(nóng)殘檢測(cè)提供了質(zhì)量控制的科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器設(shè)備 Agilent7890A 氣相色譜儀[配氣相色譜電子捕獲檢測(cè)器 (ECD)，7693 自動(dòng)進(jìn)樣器，分流/不分流進(jìn)樣口]，TE612-L電子天平(德國(guó)Sartorius)，XH-C旋渦混合器(上海梅香儀器有限公司)，T25勻漿機(jī)(德國(guó)IKA),R-210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士BUCHI)，配套蒸發(fā)儀使用的SHB-3A循環(huán)水式多用真空泵和低溫冷卻液循環(huán)泵(鄭州杜甫儀器廠)。

1.1.2 農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品 聯(lián)苯菊酯 (100μg/mL,不確定度為0.12μg/mL，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所)，氯化鈉(分析純，成都市科龍化工試劑廠,使用前140℃烘烤4h，在干燥器中冷卻至室溫)，乙腈、丙酮、正己烷(色譜純，美國(guó)Fisher)。

1.1.3 其他 20μL和1000μL可調(diào)移液器(德國(guó)VITLAB)，各種玻璃儀器若干。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備和添加

準(zhǔn)確量取1mL濃度為(100±0 .12)μg/mL聯(lián)苯菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，定容于5mL容量瓶中，此溶液濃度為20μg/mL；取20μL濃度為20μg/mL聯(lián)苯菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，定容于5mL容量瓶中，此溶液濃度為0.08μg/mL，制備好氣相色譜儀標(biāo)定用的上機(jī)標(biāo)液；用可調(diào)移液器取20μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液1mL于樣品中，并靜置30min，制備好加標(biāo)樣品。

1.3 處理方法

本文參考農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》[3]，同時(shí)結(jié)合實(shí)驗(yàn)室實(shí)際，前處理如下：準(zhǔn)確稱取25.00g黃瓜樣品于廣口三角瓶中，加入乙腈50.0mL，在勻漿機(jī)中高速勻漿2min后過(guò)濾，濾液收集到裝有7g氯化鈉的100mL比色管中，收集濾液，蓋上塞子，劇烈震蕩 1min，在室溫下靜置30min，使乙腈和水相分層。從100mL比色管中準(zhǔn)確吸取10.00mL乙腈相溶液于雞心瓶中，40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，加入2.0mL正己烷，待凈化。將弗羅里矽柱依次用5.0mL丙酮+正己烷(10+90)、5.0mL正己烷預(yù)淋洗，棄去淋洗液，當(dāng)溶劑液面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，立即加入待凈化液，收集洗脫液于100mL雞心瓶中，用5mL丙酮+正己烷(10+90)淋洗雞心瓶后倒入弗羅里矽柱，并重復(fù)1次。將盛有洗脫液的雞心瓶于40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，加入5.00mL正己烷，混勻，待色譜測(cè)定。

1.4 色譜條件

DB-5石英毛細(xì)管柱(Aglient,30m×0.32mm×0.25μm)；以高純氮?dú)鉃檩d氣，載氣流速1.5mL/min，恒流模式；ECD檢測(cè)器溫度300℃；氮?dú)馕泊盗魉?8.5mL/min；分流進(jìn)樣，分流比為10∶1;進(jìn)樣量1μL，進(jìn)樣口溫度：250℃。程序升溫：120℃(保持2min)按照10℃/min升溫至270℃(保持10min)。

2 結(jié)果與分析

2.1 結(jié)果計(jì)算

樣品和標(biāo)準(zhǔn)品等體積穿插進(jìn)氣相色譜儀測(cè)定，以峰面積外標(biāo)法定量，聯(lián)苯菊酯基質(zhì)標(biāo)樣色譜圖見(jiàn)圖1。

式中ω—黃瓜中聯(lián)苯菊酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)，mg/kg;

ρ—參考標(biāo)準(zhǔn)溶液中聯(lián)苯菊酯濃度，mg/L;

frec—回收率校正因子；

A—樣品溶液中聯(lián)苯菊酯峰面積；

As—參考標(biāo)準(zhǔn)溶液中聯(lián)苯菊酯峰面積；

V1—提取溶劑總體積，mL；

V2—吸取用于檢測(cè)的提取溶液體積，mL；

V3—樣品定容體積，mL；

m—樣品質(zhì)量，g；

圖1 聯(lián)苯菊酯基質(zhì)標(biāo)樣色譜圖

2.2 不確定度來(lái)源

結(jié)合檢測(cè)過(guò)程看，黃瓜中聯(lián)苯菊酯農(nóng)藥殘留測(cè)定的不確定度來(lái)源于測(cè)量方法重復(fù)性引入的不確定度、樣品稱重引入的不確定度、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液純度、配制和添加引入的不確定度、加入提取液體積、分取液體積和最終定容體積引入的不確定度、凈化過(guò)程的回收率帶來(lái)的不確定度等。

2.3 不確定評(píng)定

2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制量器校準(zhǔn)引起的相對(duì)不確定度urel(ρv) 由于移液槍和容量瓶因溫度帶來(lái)的體積變化不大，故兩種量器均忽略因溫度引起的體積變化而產(chǎn)生的不確定度。

標(biāo)準(zhǔn)溶液添加入樣品的過(guò)程中用到了1000μL可調(diào)移液器，加入量為1000μL，其相對(duì)不確定度urel(S1)計(jì)算公式和結(jié)果urel(A)相同，即urel(A)=urel(S1)=0.58%。

最終經(jīng)過(guò)2次標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋和一次標(biāo)準(zhǔn)溶液添加引入的相對(duì)不確定度：

urel(ρv)=

2.3.5 樣品含量重復(fù)測(cè)定產(chǎn)生的相對(duì)不確定度urel(r) 在檢測(cè)過(guò)程中于25g空白樣品中添加2.0μg聯(lián)苯菊酯，按文中所述方法對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 樣品重復(fù)測(cè)量結(jié)果

樣品重復(fù)測(cè)定產(chǎn)生的相對(duì)不確定度為：

因樣品重復(fù)測(cè)定已考慮儀器的分辨率和穩(wěn)定性，評(píng)定測(cè)量不確定度時(shí)不再另外計(jì)算儀器檢測(cè)器給出的不確定度。

說(shuō)明平均回收率與1沒(méi)有顯著差異，不必考慮回收率校正因子frec即方法回收率帶入的不確定度。

2.4 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度uc(ω)

樣品6次測(cè)定的平均值為0.083mg/kg，則合成不確定度為：uc(ω)=0.083mg/kg×4.0%=0.0033mg/kg。

2.5 擴(kuò)展不確定度計(jì)算

不確定度各分量按正態(tài)分布處理，取包含因子k=2，包含概率P=95%，擴(kuò)展不確定度：

U=k×uc(ω)=2×0.0033mg/kg=0.0066mg/kg

2.6 測(cè)量不確定度報(bào)告

黃瓜中聯(lián)苯菊酯檢測(cè)結(jié)果：

ω=(0.083±0.0066)mg/kg，k=2

3 結(jié)果與討論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)黃瓜中聯(lián)苯菊酯測(cè)量過(guò)程中不確定度分析，找到了影響該方法不確定度的主要因素為測(cè)定結(jié)果重復(fù)性、標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制；其次為樣品處理過(guò)程中分取及定容，而樣品稱重、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液純度影響不大。因此需控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)主要包括：檢測(cè)人員應(yīng)熟練掌握樣品前處理步驟并維護(hù)好儀器使其達(dá)到最佳狀態(tài)，以提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性，配制標(biāo)液時(shí)使用精度更高的量器，保證標(biāo)準(zhǔn)溶液配置及處理過(guò)程中分取和定容的準(zhǔn)確性,減少測(cè)定結(jié)果的不確定度。