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        膽石癥患者血清微小RNA-122、高遷移率族蛋白1和角蛋白-18水平及其臨床意義*

        2019-03-27 03:27:14程鐵軍張明智
        實(shí)用肝臟病雜志 2019年2期
        關(guān)鍵詞:膽石癥單純性復(fù)雜性

        程鐵軍,張明智

        血清學(xué)指標(biāo)對膽石癥也具有一定的判斷價(jià)值,miR-122、高遷移率族蛋白1(high mobility group box 1,HMGB 1)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶裂解角蛋白-18(cysteine aspartate protease cleavage keratinocyte-18,CCK-18)曾作為急性肝損傷的標(biāo)志物,因?yàn)閙iR-122僅表達(dá)于肝細(xì)胞,通過調(diào)節(jié)膽固醇和脂肪酸代謝,參與膽結(jié)石的發(fā)生和發(fā)展[1-4],而HMGB 1和CCK-18是由免疫細(xì)胞和壞死細(xì)胞釋放的具有促炎活性的核結(jié)合蛋白,兩者均為肝上皮細(xì)胞的標(biāo)志物[5]。動物實(shí)驗(yàn)表明[6],膽管結(jié)扎后動物血清miR-122、HMGB 1和CCK-18水平升高。本研究檢測了膽石癥患者血清miR-122、HMGB 1和CCK-18水平變化,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 2015年1月~2018年2月我院收治的膽石癥患者201例,男性69例,女性132例;平均年齡為(49.6±6.1)歲。所有膽石癥患者均經(jīng)超聲和CT檢查診斷,其中膽色素型膽管結(jié)石68例(33.8%)、膽固醇型膽管結(jié)石71例(35.3%)、混合型膽管結(jié)石61例(30.8%)。BMI為(23.9±3.9)kg/m2。根據(jù)疾病嚴(yán)重程度,將患者分為單純性膽石癥組(n=97)和復(fù)雜性膽石癥組(n=104)。復(fù)雜性膽石癥診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]為:(1)膽囊纖維化嚴(yán)重或Calot三角粘連、瘢痕化、脂肪堆積、分離難度大;(2)膽囊前三角區(qū)與后三角區(qū)之間界限不清;(3)膽囊嚴(yán)重炎性水腫或萎縮。符合其中1項(xiàng)者,則診斷為復(fù)雜性膽石癥。納入標(biāo)準(zhǔn)為:(1)膽囊結(jié)石診斷明確,伴或不伴繼發(fā)性膽總管結(jié)石;(2)無梗阻性黃疸表現(xiàn)。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)伴有急性膽道感染;(2)合并膽道腫瘤;(3)伴有嚴(yán)重的膽源性胰腺炎;(4)入組前曾接受過外科治療患者。選擇同期健康體檢者103例作為對照,男性45例,女性58例;平均年齡為(50.5±5.8)歲,BMI為(23.5±3.5)kg/m2。兩組人群性別、年齡和BMI比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。所有患者簽署知情同意書,本研究獲得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

        1.2 觀察指標(biāo) 采用RT-PCR法測定血清miR-122水平;采用ELISA法測定血清HMGB 1和CCK-18水平(試劑盒購自上海創(chuàng)祥生物科技有限公司)。

        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSSS 22.0和Medcalc 16.2軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。首先進(jìn)行正態(tài)性分布檢驗(yàn),對正態(tài)分布的計(jì)量資料以(x±s)表示,兩組間比較采用t檢驗(yàn)。對非正態(tài)分布的計(jì)量資料以【M(Q1,Q3)】表示,組間比較采用Mann-Whitney U秩和檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以n(%)表示,采用卡方檢驗(yàn)。以患者病情嚴(yán)重程度為因變量,以Child分級、肝硬化、膽結(jié)石分期、腹腔積液、血清白蛋白、miR-122、HMGB 1和CCK-18作為自變量,建立Logistic回歸模型,構(gòu)建miR-122、HMGB 1和CCK-18診斷的ROC曲線,計(jì)算曲線下面積(AUC)。取約登指數(shù)(靈敏度+特異度-1)最大處作為各指標(biāo)診斷復(fù)雜性膽石癥的截?cái)帱c(diǎn)。P<0.05被定義為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 兩組受試者血清miR-122、HMGB 1和CCK-18水平比較 膽石癥患者血清miR-122、HMGB 1和CCK-18水平均顯著高于健康人,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,表 1)。

        表1 兩組血清miR-122、HMGB 1和CCK-18水平[M(Q1,Q3),(±s)]比較

        表1 兩組血清miR-122、HMGB 1和CCK-18水平[M(Q1,Q3),(±s)]比較

        膽石癥健康人統(tǒng)計(jì)值P例數(shù)201 103 miR-122 4.7(0.9,14.3)0.9(0.4,3.1)6.107<0.001 HMGB1(ng/mL)2.5±0.7 2.1±0.4 6.332<0.001 CCK-18(U/L)126.8±20.5 101.4±18.7 10.845<0.001

        2.2 不同嚴(yán)重程度膽石癥患者血清miR-122、HMGB 1和CCK-18水平比較 97例單純性膽石癥患者血清 miR-122、HMGB 1和 CCK-18水平分別為 3.5(0.7,8.5)、(2.2±0.5) ng/mL 和(112.4±19.4) U/L,顯著低于104例復(fù)雜性膽石癥患者【分別為5.8(0.9,16.2)、(2.8±0.8) ng/mL 和 (140.2±23.5) U/L,Mann-Whitney U=3.107,P=0.016;Mann-Whitney U=6.241,P<0.001;Mann-Whitney U=9.171,P<0.001】,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

        2.3 影響單純性膽石癥進(jìn)展為復(fù)雜性膽石癥的單因素分析 單因素分析顯示,兩組在性別、年齡、BMI、既往手術(shù)史和糖尿病方面比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),而兩組在肝硬化和腹腔積液方面比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,表 2)。

        表2 影響復(fù)雜性膽石癥發(fā)生的單因素[n(%),(±s)]分析

        表2 影響復(fù)雜性膽石癥發(fā)生的單因素[n(%),(±s)]分析

        單純性(n=97) 復(fù)雜性(n=104) x2/t P性別男32(33.0) 37(35.6) 0.149 0.699女65(67.0) 67(64.4)年齡(歲) 52.4±6.5 51.3±5.2 1.319 0.187 BMI(kg/m2)23.7±4.024.1±4.30.6830.494肝硬化是26(26.8) 69(66.3) 18.418 <0.001否71(73.2) 35(33.7)既往手術(shù)史有13(13.4) 18(17.3) 0.587 0.444無84(86.6) 86(82.7)糖尿病是20(20.6) 25(24.0) 0.338 0.561否77(79.4) 79(76.0)腹腔積液是24(24.7) 47(45.2) 9.187 0.002否73(75.3) 57(54.8)

        2.4 影響單純性膽石癥進(jìn)展為復(fù)雜性膽石癥的多因素分析 將單因素分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素,如肝硬化、腹腔積液、血清miR-122、HMGB 1和CCK-18作為自變量,將膽石癥嚴(yán)重程度作為因變量納入多因素Logistic回歸分析,結(jié)果顯示,肝硬化、腹腔積液、miR-122、HMGB 1和CCK-18水平為單純性膽石癥進(jìn)展為復(fù)雜性膽石癥的危險(xiǎn)因素(表3)。

        2.5 血清miR-122、HMGB 1和CCK-18水平聯(lián)合檢測診斷復(fù)雜性膽石癥的效能分析 在單指標(biāo)檢測方面,血清CCK-18與miR-122或HMGB 1比,其診斷效能差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=0.839,P=0.401;Z=1.266,P=0.206);應(yīng)用血清 miR-122、HMGB 1和CCK-18水平聯(lián)合檢測診斷復(fù)雜性膽石癥的模型為:F=-7.098+0.309×miR-122+1.297×HMGB 1+0.019×CCK-18,即聯(lián)合檢測診斷復(fù)雜性膽石癥的AUC顯著高于miR-122或HMGB 1單指標(biāo)檢測(Z=2.694,Z=3.419,P=0.007,P=0.001,表4,圖 1)。

        表3 影響單純性膽石癥進(jìn)展為復(fù)雜性膽石癥的多因素分析

        圖1 血清miR-122、HMGB 1和CCK-18聯(lián)合檢測診斷復(fù)雜性膽石癥的ROC曲線比較

        表4 血清miR-122、HMGB 1和CCK-18聯(lián)合檢測診斷復(fù)雜性膽石癥的效能分析

        3 討論

        血清學(xué)指標(biāo)在診斷膽結(jié)石等疾病中表現(xiàn)出一定的優(yōu)勢,其不受膽結(jié)石解剖位置的影響,可以較好地預(yù)測膽結(jié)石患者的病情,為臨床治療提供依據(jù)[8-11]。我們檢測了膽石癥患者血清miR-122、HMGB 1和CCK-18水平變化,并探討了三者與膽石癥病情的關(guān)系,以期為臨床早期判斷膽石癥患者病情提供參考。

        miR-122在肝臟特異性表達(dá),占肝臟miRNA總量的70%,具有調(diào)節(jié)脂肪酸及膽固醇代謝的功能[12]。HMGB 1和CCK-18均為機(jī)體內(nèi)促炎性蛋白,為肝細(xì)胞炎性標(biāo)志物。動物實(shí)驗(yàn)[13]表明,當(dāng)膽囊受到損傷時(shí),血清miR-122、HMGB 1和CCK-18水平呈現(xiàn)升高的趨勢。本研究結(jié)果顯示,膽石癥患者血清miR-122、HMGB 1和CCK-18水平顯著高于健康人,提示其可作為判別膽結(jié)石患者病情的潛在生物學(xué)指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示,復(fù)雜性膽石癥患者血清miR-122、HMGB 1和CCK-18水平顯著高于單純性膽石癥患者,更提示其與患者病情的關(guān)系。為進(jìn)一步分析影響單純性膽石癥進(jìn)展為復(fù)雜性膽石癥的相關(guān)危險(xiǎn)因素,本研究采用單因素和多因素Logistic回歸分析,結(jié)果顯示存在肝硬化、有腹腔積液、血清miR-122、HMGB 1和CCK-18水平升高為復(fù)雜性膽石癥的危險(xiǎn)因素。在肝硬化時(shí),患者肝功能受損,影響了胃腸激素的滅活,促進(jìn)了膽結(jié)石的發(fā)生發(fā)展[14-16]。在肝功能受損后,腹腔積液增多且白蛋白水平降低,腹腔積液的長期存在和低蛋白血癥易導(dǎo)致膽囊壁增厚,甚至膽囊纖維化,導(dǎo)致膽囊收縮能力下降,膽汁淤積,形成結(jié)石[17,18]。miR-122通過抑制脂肪酸和膽固醇代謝,造成膽囊膽固醇過量積聚,導(dǎo)致結(jié)石形成[19]。CCK-18為參與膽囊運(yùn)動調(diào)節(jié)的激素,CCK-18水平升高,胰腺消化酶分泌減少,誘發(fā)膽囊結(jié)石進(jìn)一步發(fā)展[20]。本研究同時(shí)分析血清miR-122、HMGB 1和CCK-18診斷復(fù)雜性膽石癥的效能,結(jié)果顯示,三者單獨(dú)檢測時(shí),AUC值介于0.7~0.8之間,而采用三者聯(lián)合檢測診斷復(fù)雜性膽石癥,結(jié)果顯示可將診斷的AUC提高至0.819,顯著高于三者的單獨(dú)檢測,表明聯(lián)合檢測可最大限度地避免對病情的誤判。

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