劉 奕

(天津市胸科醫(yī)院檢驗(yàn)科，天津 300350)

非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)是臨床最為常見的肺癌類型，約有4/5以上的肺癌都為NSCLC。NSCLC的治療方案、預(yù)后與腫瘤類型及診斷時(shí)機(jī)有著緊密聯(lián)系[1]。NSCLC的診斷多采用支氣管鏡檢查結(jié)合活檢、痰脫落細(xì)胞學(xué)檢查、影像引導(dǎo)穿刺活檢、胸部CT等手段，但是這些診斷手段都為有創(chuàng)檢查，并且多用于NSCLC中晚期診斷[2]。肺癌在早期通常無明顯臨床癥狀，患者多在體檢時(shí)發(fā)現(xiàn)肺部實(shí)質(zhì)性病灶，而早期肺癌的肺部實(shí)質(zhì)性病灶缺乏特異性，臨床容易將其與肺結(jié)核、肺炎、肺部炎性假瘤等混淆而延誤診斷[3]。近年來，腫瘤標(biāo)志物在肺癌診斷中的應(yīng)用越來越受關(guān)注，但是目前還未發(fā)現(xiàn)肺癌的特異性抗原，所運(yùn)用的肺癌標(biāo)志物均為腫瘤相關(guān)物質(zhì)。癌胚抗原(CEA)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、鱗狀細(xì)胞癌抗原(SCC-Ag)、細(xì)胞角蛋白19片段抗原(CYFRA21-1)是目前臨床用于肺癌診斷的幾種常用腫瘤標(biāo)志物，這些標(biāo)志物各有優(yōu)勢(shì)，但均不是器官特異性標(biāo)志物，并且診斷不同類型肺癌的敏感性差異明顯。有研究發(fā)現(xiàn)[5]，D-二聚體(D-D)在癌癥患者體內(nèi)的表達(dá)有一定的特殊性，其在NSCLC患者血清中有明顯的升高趨勢(shì)。本次研究擬將腫瘤標(biāo)志物CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1與D-D共同用于NSCLC的早期診斷中，現(xiàn)將其應(yīng)用情況報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

研究對(duì)象為60例NSCLC患者、60例良性肺病患者和60例健康志愿者，分別納入NSCLC組、良性肺病組、對(duì)照組，病例來源于本院2016年6月至2018年6月腫瘤科、胸外科的住院或門診患者。(1)納入標(biāo)準(zhǔn)：NSCLC患者經(jīng)組織學(xué)或病理學(xué)檢查明確診斷，良性肺病患者經(jīng)纖維支氣管鏡、肺部螺旋CT等檢查確診，健康志愿者無肺部疾??；體溫、血常規(guī)檢查正常；無感染征象；無心、腦、肝、腎等重要臟器疾??；患者自愿參與研究并簽署了知情同意書。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤者；接受過抗癌系統(tǒng)治療者；伴有肝硬化者；合并嚴(yán)重腎病、心臟疾病者；測(cè)量前1周應(yīng)用過高劑量利尿劑者，或應(yīng)用過可影響測(cè)量指標(biāo)相關(guān)藥物者；病歷資料不完整者。NSCLC組男34例，女26例，其中鱗癌32例，腺癌28例，年齡50～73歲，平均(59.8±8.2)歲；良性肺病組男28例，女32例，其中炎性假瘤10例、結(jié)核瘤24例、錯(cuò)構(gòu)瘤16例、纖維瘤10例，年齡47～76歲，平均(58.3±7.9)歲；對(duì)照組男30例，女30例，年齡49～75歲，平均(59.0±10.6)歲。3組研究對(duì)象的性別構(gòu)成比、平均年齡接近(均P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1檢測(cè)試劑與儀器

儀器：TECAN SUNRISE酶標(biāo)儀；Roche E601型電化學(xué)發(fā)光儀；SC-3610離心機(jī)；Sysmex CA7000全自動(dòng)凝血分析儀。

試劑：CYFRA21-1試劑盒、NSE試劑盒、CEA試劑盒、SCC-Ag試劑盒均為美國(guó)Roche公司產(chǎn)品；D-D試劑盒為上海捷門生物技術(shù)合作公司產(chǎn)品；肝素鈉、枸櫞酸鈉均為賽諾菲(北京)制藥有限公司產(chǎn)品。

1.2.2標(biāo)本采集與檢驗(yàn)

采集3組研究對(duì)象的空腹靜脈血(3 ml)，進(jìn)行離心處理(2000 r/min，5 min)后，保留血清及血漿，放置于-20℃的冰箱中保存待檢。檢測(cè)前，將標(biāo)本放置于室溫平衡。在電化學(xué)發(fā)光儀中加入待檢試劑盒(CEA、SCC-Ag、CYFRA21-1、NSE)，儀器對(duì)試劑自動(dòng)攪拌使其處于懸浮狀態(tài)，然后加入血清標(biāo)本，2 h后讀取結(jié)果。在全自動(dòng)凝血分析儀中加入D-D試劑盒，儀器自動(dòng)攪拌讓試劑處于懸浮狀態(tài)，然后加入血漿標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，2 h后讀取數(shù)據(jù)。

正常值參考范圍：D-D<1 μg/ml；CYFRA21-1<3.3 ng/ml；NSE<12 μg/L；CEA<3 μg/L；SCC-Ag<5 ng/ml，檢測(cè)結(jié)果超過正常值即判定為陽性，聯(lián)合檢測(cè)中其中任何一項(xiàng)超過正常值即判定為陽性。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)對(duì)比3組的CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D檢測(cè)結(jié)果。(2)對(duì)比不同病理類型NSCLC患者的CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D檢測(cè)結(jié)果。(3)對(duì)各指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果繪制ROC曲線，并計(jì)算曲線下面積(AUC)，對(duì)比CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D單項(xiàng)檢測(cè)與聯(lián)合檢測(cè)對(duì)NSCLC的診斷敏感性、特異性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D檢測(cè)結(jié)果

3組研究對(duì)象的各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；肺癌組的CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D水平均顯著高于良性肺病組與對(duì)照組(P<0.05)，良性肺病組的CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D水平又顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。見表1。

2.2 CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D陽性率

與對(duì)照組和良性肺病組比較，肺癌組的CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D陽性率均明顯更高(P<0.05)。見表2。

2.3 不同病理類型NSCLC患者的各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果

肺癌組中，腺癌患者的CEA水平顯著高于鱗癌患者，SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D水平均顯著低于鱗癌患者(P<0.05)。見表3。

表1 3組研究對(duì)象的CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D檢測(cè)結(jié)果比較

表2 3組研究對(duì)象的CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D陽性率比較[n(%)]

表3 不同病理類型NSCLC患者的各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果

2.4 ROC曲線分析

CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1、D-D單獨(dú)檢測(cè)及5項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)診斷NSCLC的ROC曲線下面積分別為0.736、0.771、0.814、0.755、0.764、0.915，聯(lián)合檢測(cè)的AUC值明顯比5項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)檢測(cè)更高(圖1)。5項(xiàng)指標(biāo)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)NSCLC的診斷敏感性、特異性、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值分別為87.3%、89.6%、88.5%、86.5%，均顯著高于各項(xiàng)單獨(dú)檢測(cè)(P<0.05)。見表4。

圖1 各項(xiàng)指標(biāo)診斷NSCLC的ROC曲線

3 討 論

CEA是一種具有胚胎抗原特異性決定簇的酸蛋白，早期研究認(rèn)為CEA為大腸癌的特異性抗原，但隨著后續(xù)研究的不斷深入，越來越多的研究顯示在肺癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌等惡性腫瘤中也能檢測(cè)到CEA，故認(rèn)為CEA并非大腸癌的特異性抗原，其本質(zhì)可能為腺癌標(biāo)志物[6-7]。本次研究結(jié)果顯示肺癌組的血清CEA水平、CEA陽性率均顯著高于另外兩組，并且腺癌患者的血清CEA水平明顯比鱗癌患者更高。這一結(jié)論契合了前述文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果，提示CEA是一種較為普遍的腫瘤標(biāo)志物，并且相比肺鱗癌，CEA與肺腺癌的關(guān)系更為密切。

CYFRA21-1是一種可溶性酸性多肽物質(zhì)，是一種細(xì)胞骨骼標(biāo)記物。在腫瘤細(xì)胞死亡或溶解時(shí)會(huì)激活蛋白酶，加速細(xì)胞角蛋白降解，從而將大量的CYFRA21-1釋放到血液中引起血清CYFRA21-1含量升高。研究顯示[8]，NSCLC患者血液中的CYFRA21-1水平明顯升高，其對(duì)NSCLC的敏感性超過50%，并且相比腺癌，CYFRA21-1對(duì)鱗癌的敏感性更高，是目前臨床用于診斷鱗癌的可靠標(biāo)記物。本次研究結(jié)果也顯示，相比良性肺病組與對(duì)照組，肺癌組的血清CYFRA21-1水平明顯更高，并且在肺癌組中，鱗癌患者的CYFRA21-1水平顯著高于腺癌患者。這一結(jié)果說明血CYFRA21-1對(duì)NSCLC有較高的預(yù)測(cè)價(jià)值，但CYFRA21-1對(duì)腺癌的敏感性不及鱗癌。

NSE是糖酵解酶的關(guān)鍵酶，是神經(jīng)母細(xì)胞瘤的重要腫瘤標(biāo)志物，其在神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞和神經(jīng)元細(xì)胞中有廣泛分布。肺癌是最常表現(xiàn)有神經(jīng)內(nèi)分泌性質(zhì)的腫瘤，研究顯示[9]NSE在肺癌組織中的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過正常肺組織，二者的NSE含量差值最高可達(dá)到30倍。臨床認(rèn)為NSE是小細(xì)胞肺癌的高特異性、高敏感性標(biāo)志物，其對(duì)小細(xì)胞肺癌的敏感性超過70%，但對(duì)NSCLC的敏感性、特異性相對(duì)較低。本次研究顯示肺癌組的NSE水平顯著高于良性肺病組與對(duì)照組，NSE對(duì)NSCLC的敏感性、特異性分別為66.2%、59.4%。說明NSE對(duì)NSCLC有一定的相關(guān)性，但對(duì)NSCLC的敏感性、特異性并不高。

表4 各檢測(cè)指標(biāo)診斷NSCLC的ROC曲線分析結(jié)果

SCC-Ag為糖蛋白，是從子宮頸鱗狀細(xì)胞中分離出來的抗原TA4的亞組分，廣泛存在于惡變的上皮細(xì)胞中，尤其是鱗癌細(xì)胞。SCC-Ag水平的高低與腫瘤分化程度密切相關(guān)，對(duì)肺鱗癌有較高的診斷特異性，但是對(duì)肺鱗癌的診斷敏感性并不高[10]。國(guó)內(nèi)有文獻(xiàn)報(bào)道[11]，聯(lián)合檢測(cè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞數(shù)與血清SCC-Ag水平，能夠有效提高NSCLC的早期檢出率。本次研究結(jié)果顯示，肺癌組的SCC-Ag水平顯著高于另外兩組，鱗癌患者的SCC-Ag水平顯著高于腺癌患者，ROC曲線分析顯示SCC-Ag對(duì)NSCLC的診斷特異性高達(dá)90.1%，但診斷敏感性僅為55.2%。這一結(jié)果與前述文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)論相符。

D-D是纖溶酶與交聯(lián)纖維蛋白相互作用所產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，其水平的升高預(yù)示著凝血功能異常和機(jī)體處于纖溶亢進(jìn)狀態(tài)。肺部惡性腫瘤細(xì)胞可分泌促凝血物質(zhì)，激活產(chǎn)生凝血酶的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，促進(jìn)纖維蛋白形成。凝血功能系統(tǒng)與惡性腫瘤細(xì)胞之間可相互作用、相互影響，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移，所以惡性腫瘤的生長(zhǎng)、發(fā)展、轉(zhuǎn)移均與凝血系統(tǒng)紊亂有著密切聯(lián)系[12]。有研究顯示[13]，NSCLC患者的血液呈高凝狀態(tài)，D-D水平明顯上升。還有研究發(fā)現(xiàn)，惡性腫瘤患者發(fā)生彌散性血管內(nèi)凝血的風(fēng)險(xiǎn)較高，這主要與腫瘤細(xì)胞引起的凝血功能異常有關(guān)。D-D水平不僅與肺癌預(yù)后密切相關(guān)，還能反映機(jī)體的纖溶亢進(jìn)狀況，可用于臨床評(píng)估肺癌患者預(yù)后的有效指標(biāo)。國(guó)內(nèi)有研究指出[14]，肺癌患者的凝血指標(biāo)多存在一項(xiàng)甚至多項(xiàng)異常，并且晚期肺癌患者表現(xiàn)得更為明顯，所以認(rèn)為D-D在肺癌的診斷中有一定價(jià)值。本研究也發(fā)現(xiàn)肺癌組的D-D水平及D-D陽性率均顯著高于另外兩組，D-D對(duì)NSCLC的診斷敏感性、特異性分別為80.1%和63.2%。這一結(jié)果說明D-D對(duì)NSCLC雖有較高的敏感性，但特異性較低。

CEA、CYFRA21-1、NSE、SCC-Ag、D-D在NSCLC的早期診斷中各具優(yōu)勢(shì)，為提高NSCLC的早期診斷敏感性與特異性，臨床常聯(lián)合檢測(cè)多項(xiàng)指標(biāo)。本次研究結(jié)果顯示CEA、CYFRA21-1、NSE、SCC-Ag、D-D五項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)NSCLC的診斷敏感性、特異性、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值均較高，分別為87.3%、89.6%、88.5%、86.5%，明顯優(yōu)于各項(xiàng)單獨(dú)檢測(cè)的診斷效能(P<0.05)。這是因?yàn)槎囗?xiàng)腫瘤標(biāo)志物及D-D聯(lián)合檢測(cè)有效避免了單一標(biāo)志物檢測(cè)可能帶來的假陽性、假陰性，從而有效降低漏誤診風(fēng)險(xiǎn)。

綜上所述，腫瘤標(biāo)志物CEA、NSE、SCC-Ag、CYFRA21-1與D-D聯(lián)合檢測(cè)對(duì)NSCLC有較高的敏感性、特異性，能夠有效提高NSCLC的早期診斷準(zhǔn)確率，臨床應(yīng)用優(yōu)勢(shì)顯著。