秦 慶，呂永強(qiáng)

（聯(lián)勤保障部隊(duì)第967醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧大連 116021）

0 引言

全自動(dòng)生化分析儀的普及提高了臨床化學(xué)檢查的檢測(cè)速度和準(zhǔn)確度[1]，但在檢測(cè)過程中，前一個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目可能會(huì)給后一個(gè)項(xiàng)目甚至后幾個(gè)項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果帶來干擾[2]，而嚴(yán)重的干擾會(huì)大大影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，給臨床診斷帶來困惑[3]。筆者在實(shí)際工作中發(fā)現(xiàn)，全自動(dòng)生化分析儀（本院使用的是日立LABOSPECT 008全自動(dòng)生化分析儀）測(cè)定血清中總蛋白（TP）和鈣（Ca2+）時(shí)，在測(cè)定大量樣品之后，Ca2+測(cè)定結(jié)果會(huì)明顯偏低，這可能是TP測(cè)定對(duì)Ca2+測(cè)定產(chǎn)生了干擾。為此，本研究設(shè)計(jì)了一系列試驗(yàn)，對(duì)產(chǎn)生干擾的因素進(jìn)行了分析，并提出了相應(yīng)的措施。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

為了避免實(shí)驗(yàn)受到某些疾病人群的干擾，特從日常體檢者中篩選出上百例健康者，再?gòu)慕】嫡咧须S機(jī)抽取40例，抽血離心，將血清充分混勻后備用，作為研究標(biāo)本。

1.2 儀器與試劑

日立LABOSPECT 008全自動(dòng)生化分析儀?？偟鞍诇y(cè)定試劑盒（雙縮脲法）、鈣測(cè)定試劑盒（甲烷基二甲苯酚藍(lán)法）與各自的校準(zhǔn)品均購(gòu)自日本和光純藥工業(yè)株式會(huì)社。

1.3 方法

1.3.1 TP測(cè)定對(duì)Ca2+測(cè)定干擾試驗(yàn)

1.3.1.1 Ca2+水平參照值的確定試驗(yàn)

在保證比色杯清洗干凈的前提下，連續(xù)測(cè)定混合血清標(biāo)本Ca2+水平8次，測(cè)定結(jié)果記為R，計(jì)算均值、標(biāo)準(zhǔn)差及變異系數(shù)，以均值作為Ca2+水平參照值。

1.3.1.2 可能干擾源的確定試驗(yàn)

觀察日立LABOSPECT 008全自動(dòng)生化分析儀的分析過程，試劑針和比色杯有可能是對(duì)后續(xù)分析造成干擾的污染源。鑒于此，設(shè)計(jì)下述試驗(yàn)：

（1）測(cè)定混合血清標(biāo)本TP水平一次，使用另外的比色杯測(cè)定Ca2+水平一次，測(cè)定結(jié)果記為T1，按此過程重復(fù)測(cè)定8次。若T1均值與參照值相差5%及以上，則認(rèn)為存在試劑針攜帶污染。

（2）測(cè)定混合血清標(biāo)本TP水平一次后不更換比色杯，常規(guī)清洗程序后進(jìn)行Ca2+水平測(cè)定一次，結(jié)果記為T2，按此過程重復(fù)測(cè)定8次。若T2均值與參照值相差5%及以上，則認(rèn)為存在反應(yīng)杯攜帶污染。

1.3.1.3 多次清洗后可否去除干擾試驗(yàn)

測(cè)定混合血清標(biāo)本TP水平一次后不更換比色杯，設(shè)置清洗程序重復(fù)3次，再進(jìn)行Ca2+水平測(cè)定，結(jié)果記為T3，按此過程重復(fù)測(cè)定8次。若T3均值與參照值相差5%及以上，則認(rèn)為清洗無效。

1.3.2 Ca2+測(cè)定對(duì)TP測(cè)定干擾試驗(yàn)

1.3.2.1 TP水平參照值的確定試驗(yàn)

在保證清洗干凈的前提下，連續(xù)測(cè)定混合血清標(biāo)本TP水平8次，測(cè)定結(jié)果記為A，計(jì)算均值、標(biāo)準(zhǔn)差及變異系數(shù)，以均值作為TP水平參照值。

1.3.2.2 可能干擾源的確定試驗(yàn)

由于并未發(fā)現(xiàn)TP的測(cè)定結(jié)果出現(xiàn)異常，因此設(shè)計(jì)如下簡(jiǎn)化試驗(yàn)：測(cè)定混合血清標(biāo)本Ca2+水平一次后不更換試劑針及比色杯，常規(guī)清洗程序后進(jìn)行TP水平測(cè)定一次，結(jié)果記為B，按此過程重復(fù)測(cè)定8次。若B均值與參照值相差5%及以上，則認(rèn)為Ca2+測(cè)定對(duì)TP測(cè)定存在干擾。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析。組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

Ca2+水平測(cè)定干擾試驗(yàn)結(jié)果見表1，TP水平測(cè)定干擾試驗(yàn)結(jié)果見表2。試驗(yàn)結(jié)果中，6組試驗(yàn)8次測(cè)定結(jié)果的變異系數(shù)都很小，表明儀器的精密度良好、運(yùn)行穩(wěn)定，排除了由于儀器運(yùn)行不穩(wěn)定帶來的偏差。

表1 Ca2+水平測(cè)定干擾試驗(yàn)結(jié)果

表2 TP水平測(cè)定干擾試驗(yàn)結(jié)果

2.1 TP測(cè)定對(duì)Ca2+測(cè)定干擾試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 Ca2+水平參照值的確定試驗(yàn)結(jié)果

從表1得到參照值R均值為2.294 mmol/L，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.021 2 mmol/L，變異系數(shù)為0.924%。

2.1.2 可能干擾源的確定試驗(yàn)結(jié)果

（1）測(cè)定結(jié)果T1的均值為2.289 mmol/L，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.018 3 mmol/L，變異系數(shù)為0.799%。T1均值與參照值相差0.218%[（2.294-2.289）/2.294×100%]，小于5%，無明顯偏差。對(duì)T1與R進(jìn)行t檢驗(yàn)，t值為0.472，P值為 0.644，P＞0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此組試驗(yàn)沒有更換試劑針，僅更換了比色杯，結(jié)果說明不存在試劑針攜帶污染。

（2）測(cè)定結(jié)果T2的均值為1.926 mmol/L，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.031 6 mmol/L，變異系數(shù)為1.641%。T2均值與參照值相差16.042%[（2.294-1.926）/2.294×100%]，大于5%，偏差較大。對(duì)T2與R進(jìn)行t檢驗(yàn)，t值為25.562，P值為 0.000，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此組試驗(yàn)沒有更換試劑針，也沒有更換比色杯，但對(duì)比色杯進(jìn)行了常規(guī)清洗，結(jié)果說明存在比色杯攜帶污染。

2.1.3 多次清洗后可否去除干擾試驗(yàn)結(jié)果

測(cè)定結(jié)果T3的均值為2.289 mmol/L，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.024 7 mmol/L，變異系數(shù)為1.079%。T3均值與參照值相差0.218%[（2.294-2.289）/2.294×100%]，小于5%，無明顯偏差。對(duì)T3與R進(jìn)行t檢驗(yàn)，t值為0.406，P值為0.691，P＞0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。試驗(yàn)結(jié)果說明多次清洗后能去除干擾。

2.2 Ca2+測(cè)定對(duì)TP測(cè)定干擾試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 TP水平參照值的確定試驗(yàn)結(jié)果

從表2得到參照值A(chǔ)均值為71.2 g/L，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.627 g/L，變異系數(shù)為0.881%。

2.2.2 可能干擾源的確定試驗(yàn)結(jié)果

測(cè)定結(jié)果B的均值為71.1 g/L，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.634 g/L，變異系數(shù)為0.892%。B均值與參照值相差，小于 5%，無明顯偏差。對(duì)B與A進(jìn)行t檢驗(yàn)，t值為0.278，P值為0.785，P＞0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。試驗(yàn)結(jié)果說明不存在Ca2+測(cè)定對(duì)TP測(cè)定的干擾。

3 討論

目前，各大醫(yī)療機(jī)構(gòu)普遍使用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行生化指標(biāo)測(cè)定，此種方式存在的問題是可能會(huì)攜帶污染直接導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的重復(fù)性和準(zhǔn)確性變差。攜帶污染的產(chǎn)生是由于前一測(cè)試的試劑、標(biāo)本或反應(yīng)產(chǎn)物中的某些成分影響了下一測(cè)試項(xiàng)目的反應(yīng)或相應(yīng)的反應(yīng)條件等，從而對(duì)后續(xù)項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生正向或負(fù)向干擾[4-7]。針對(duì)本實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)的TP測(cè)定對(duì)Ca2+測(cè)定的干擾，設(shè)計(jì)了一系列試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，并分析了產(chǎn)生干擾的原因。目前，該方面的研究鮮見報(bào)道[8]。

3.1 干擾來源的確定

在TP測(cè)定對(duì)Ca2+測(cè)定干擾試驗(yàn)中，幾組試驗(yàn)結(jié)果表明，日常工作程序可忽略試劑針攜帶污染，但存在比色杯攜帶污染。Ca2+測(cè)定對(duì)TP測(cè)定干擾試驗(yàn)結(jié)果表明，不存在Ca2+測(cè)定對(duì)TP測(cè)定的干擾。

3.2 產(chǎn)生干擾的原因分析

在實(shí)際工作中，這種干擾往往在樣品量較大的情況下才會(huì)發(fā)生，根據(jù)前述分析，已知是比色杯產(chǎn)生的攜帶污染。進(jìn)一步分析原因，該儀器比色杯共有406個(gè)，其測(cè)定過程是取樣針取一次樣到一個(gè)比色杯中測(cè)定一個(gè)項(xiàng)目，之后再取一次樣到下一個(gè)比色杯中測(cè)定另一個(gè)項(xiàng)目。因此，樣品量較少時(shí)，比色杯不會(huì)重復(fù)使用，就不會(huì)產(chǎn)生TP測(cè)定對(duì)Ca2+測(cè)定的干擾，而當(dāng)樣品量較大時(shí)，使用的比色杯超過406個(gè)，就會(huì)重復(fù)使用比色杯，而比色杯常規(guī)清洗不足以消除TP測(cè)定的影響，這時(shí)就有可能會(huì)發(fā)生干擾，使Ca2+測(cè)定結(jié)果偏低。

本實(shí)驗(yàn)室Ca2+測(cè)定使用甲烷基二甲苯酚藍(lán)（MXB）作為顯色劑，它和Ca2+在堿性條件下螯合，呈現(xiàn)藍(lán)色，反應(yīng)式為MXB+Ca2+→MXB-Ca2+。TP測(cè)定使用的是雙縮脲試劑，即堿性硫酸銅溶液，其中Cu2+與Ca2+同為金屬離子，價(jià)態(tài)相同，某些性質(zhì)也相似，因此可以推斷，Cu2+與MXB在堿性條件下也可能發(fā)生螯合反應(yīng)，反應(yīng)式為MXB+Cu2+→MXB-Cu2+。當(dāng)做過TP的比色杯沒有徹底清洗時(shí)，殘留的Cu2+會(huì)螯合部分MXB試劑，導(dǎo)致試劑不足而出現(xiàn)Ca2+測(cè)定結(jié)果偏低的現(xiàn)象。

既然Cu2+與MXB可能會(huì)發(fā)生螯合反應(yīng)，TP測(cè)定會(huì)影響Ca2+的測(cè)定，Ca2+測(cè)定為什么卻不會(huì)干擾TP測(cè)定？進(jìn)一步分析，發(fā)現(xiàn)MXB溶液的濃度為0.29 mmol/L，加入量為 50 μl，而雙縮脲溶液中 Cu2+濃度為8 mmol/L，加入量為180 μl，簡(jiǎn)單計(jì)算可得Cu2+的加入量約為MXB加入量的100倍。因此，做完TP測(cè)定的比色杯經(jīng)過清洗即使僅殘留1%的Cu2+對(duì)于加入的MXB試劑量來說也是很大的，所以TP測(cè)定會(huì)影響Ca2+的測(cè)定，反之則不會(huì)。

3.3 干擾的消除

干擾消除試驗(yàn)在對(duì)混合血清標(biāo)本TP水平測(cè)定一次后不更換比色杯，但增加清洗程序至3次后，再進(jìn)行Ca2+水平測(cè)定，結(jié)果顯示干擾消除。上述試驗(yàn)說明多次清洗可有效消除TP測(cè)定對(duì)Ca2+測(cè)定的干擾，但多次清洗必然會(huì)降低標(biāo)本檢測(cè)的速度。因此，在實(shí)際工作中應(yīng)根據(jù)具體情況，確保TP測(cè)定使用的比色杯不再進(jìn)行Ca2+測(cè)定或采取比色杯徹底清洗的辦法，以消除TP測(cè)定對(duì)Ca2+測(cè)定的干擾。

目前，臨床開展的生化項(xiàng)目越來越多，而在開展生化項(xiàng)目之前一定要認(rèn)真研究測(cè)定原理和各試劑組分，先做預(yù)試驗(yàn)，觀察它對(duì)其他測(cè)定項(xiàng)目的干擾情況[9]。對(duì)有干擾的項(xiàng)目可采取調(diào)整項(xiàng)目檢測(cè)順序或設(shè)定有效、適合的特殊清洗程序的方法，以減少測(cè)定項(xiàng)目間的相互干擾[10-11]。