劉青焱，先 會，楊曉瑩

（西南醫(yī)科大學附屬醫(yī)院手術(shù)室，四川瀘州 646000）

安爾碘皮膚消毒劑是一種含3 000 mg/L有效碘及乙醇的中效皮膚消毒劑，臨床使用具有皮膚刺激小、作用迅速、著色淺、無需脫碘、操作方便等特點，因此，被廣泛應用于各級醫(yī)療機構(gòu)中。但由于各級醫(yī)療機構(gòu)規(guī)模不同，臨床科室使用環(huán)境、使用頻次不同，安爾碘皮膚消毒劑（60 mL 最小包裝單元）開啟后消毒液的有效期限，使用中污染問題一直困擾著使用者。目前研究主要集中在病房環(huán)境下安爾碘皮膚消毒液安全使用的期限研究，一般為3～7 d[1]，主要與使用頻次和污染有關(guān)，使用頻次＞19次/d，合格率僅為35.7%，而使用頻次＜11 次/d 的合格率為91.67%[2]。但在手術(shù)室恒溫、恒濕，空氣潔凈度控制下安爾碘使用頻次與使用期限的研究還沒有開展。因此，本院于2017年3～5月以安爾碘皮膚消毒劑最小包裝瓶（60 mL）為研究對象，研究其在手術(shù)室開啟后不同使用頻次下消毒液的安全有效性，以探討其在手術(shù)室的使用期限，為手術(shù)室制定皮膚消毒劑開啟后合理的有效期限提供循證依據(jù)。

1 材 料

試驗材料與菌株：由上海利康消毒高科技有限公司生產(chǎn)瓶裝安爾碘皮膚消毒劑，含碘濃度0.2%，規(guī)格為60 mL，生產(chǎn)批號：20170224。血培養(yǎng)基，TSA，TSB 培養(yǎng)基為環(huán)凱生物產(chǎn)品。中和劑組成為5 g/L的硫代硫酸鈉、10 g/L的吐溫-80、5 g/L 的卵磷脂的磷酸鹽緩沖液(PBS)（AXYGEN），試驗菌為大腸桿菌ATCC25922，由西南醫(yī)科大學病原生物學實驗室保存提供。

2 方 法

2.1 試驗用無菌棉簽抽樣檢測

手術(shù)室為萬級手術(shù)間，保持環(huán)境溫度21℃～25℃，濕度40%～70%，手術(shù)間啟用前1 h 開啟層流，進行地表和物表的清潔消毒，空氣微生物監(jiān)測為150 cfu/m3；物表監(jiān)測為＜5 cfu/m3的環(huán)境下，采用無菌剪刀剪開、撕開、頂開的方法取用無菌棉簽，取用后豎放于操作臺，4 h內(nèi)采樣，細菌培養(yǎng)。培養(yǎng)結(jié)果顯示3組棉簽在不同開啟方法后的4 h內(nèi)取用棉簽均無污染。

2.2 安爾碘皮膚消毒液開啟后使用期限試驗

2.2.1 試驗環(huán)境

選擇萬級手術(shù)間，室溫21℃～25℃，濕度40%～70%，手術(shù)間啟用前1 h 開啟層流，進行地表和物表的清潔消毒，空氣微生物監(jiān)測為150 cfu/m3；物表監(jiān)測為＜5 cfu/m3的環(huán)境下進行,試驗期間拒絕參觀,減少非手術(shù)人員走動。

2.2.2 分組與干預方法

將32 瓶安爾碘瓶裝皮膚消毒劑隨機分為A、B、C三組，每組10瓶，空白對照組2瓶。A組：手術(shù)室環(huán)境下24 h 內(nèi)使用頻次為11 次；B 組：手術(shù)室環(huán)境下24 h內(nèi)使用頻次為19次，C組：手術(shù)室環(huán)境下24 h使用頻次為27 次。三組安爾碘消毒液使用方法是每次棉簽蘸取后直接廢棄。

2.2.3 采樣方法

本試驗按照WS/T367-2012《醫(yī)療機構(gòu)消毒技術(shù)規(guī)范》使用中消毒液和物表染菌采樣方法。A、B、C 組和空白對照組安爾碘皮膚消毒劑開啟后第3 d對消毒液、消毒液容器瓶口、瓶蓋內(nèi)面進行采樣，每間隔1 d再次采樣，直到消毒液使用完畢。A組采樣到15 d，樣本量為210例；B組采樣到13 d，樣本量為180 例；C 組采樣到11 d，樣本量為150 例，空白對照組為42例，共計582例。

2.2.4 檢測指標

2.2.4.1 細菌定量與定性檢測

按照WS/T367-2012《醫(yī)療機構(gòu)消毒技術(shù)規(guī)范》要求進行。使用中安爾碘消毒液染菌量檢測：用無菌吸管按無菌操作方法取1.0 mL 被檢消毒液，加入9 mL中和劑混均，用無菌吸管吸取一定稀釋比例的中和后混合液1.0 mL接種瓊脂培養(yǎng)基平皿，37 ℃溫箱培養(yǎng)72 h，計數(shù)菌落數(shù)。安爾碘消毒液容器瓶口和瓶蓋內(nèi)表面染菌量檢測：用浸有無菌生理鹽水的棉簽在被檢部位涂抹采樣，去除手接觸部分棉簽進行洗脫，取洗脫液1.0 mL接種瓊脂培養(yǎng)基平皿，37℃溫箱培養(yǎng)48 h，計數(shù)菌落數(shù)。

細菌計數(shù)按照消毒液染菌量（CFU/cm2）=平均每皿菌落數(shù)×10×稀釋倍數(shù)。

使用中消毒液和消毒液容器瓶口與瓶蓋內(nèi)表面衛(wèi)生學合格判定標準參照WS/T367-2012《醫(yī)療機構(gòu)消毒技術(shù)規(guī)范》要求進行，即使用中皮膚黏膜消毒液染菌量≤10 cfu/mL、不得檢測出致病菌為合格。

2.2.4.2 最低抑菌濃度（MIC）及最小殺菌濃度（MBC）測定

將大腸桿菌ATCC25922 接種TSA 瓊脂培養(yǎng)基過夜培養(yǎng)，挑取單菌落接種TSB 肉湯培養(yǎng)基至對數(shù)生長期，去菌液稀釋到0.5麥氏濃度備用。無菌取所稀釋的菌液100 μL接種于96孔板，取消毒劑100 μL加于96孔板第1列，混勻后取100 μL與第2列，依次至第12列后，吸取100 μL棄掉，使得96孔板每列的濃度分別為2-1，2-2至2-12。并設(shè)定PBS組為對照組，培養(yǎng)20 h觀察結(jié)果，以肉眼觀察，藥物最低濃度管無細菌生長者，即為受試菌液的MIC值。取96孔板中菌液100 μL均勻涂布于TSA瓊脂平板，如果上一濃度有菌生長，而本濃度若無細菌生長，確定為MBC值。

3 結(jié)果

3.1 使用中安爾碘消毒液、消毒瓶口及瓶蓋內(nèi)表面染菌檢測結(jié)果

對使用中的不同期限及不同使用頻率的安爾碘皮膚消毒液、瓶口、瓶蓋內(nèi)面污染狀況進行細菌檢測。檢測結(jié)果：A 組15 d 消毒液使用完畢，B 組13 d消毒液使用完畢，C 組11 d 消毒液使用完畢，3 組每個時間點消毒液、消毒容器瓶口和瓶蓋內(nèi)表面染菌檢測結(jié)果均為陰性。空白對照組15 d內(nèi)細菌采樣檢測結(jié)果為陰性。

3.2 MIC和MBC

安爾碘皮膚消毒劑對標準菌株大腸桿菌ATCC25922 的抑菌殺菌效果，隨著使用期限的延長和使用頻次的增加，A 組MIC 值由1×2-12 到第15 d 1.6×2-12，MBC 值由1.4×2-6 到第15 d 2×2-6，B 組MIC值由1×2-12到第13 d 2×2-12，MBC值由2-6到第13 d 2.4×2-6，C 組MIC 值由1×2-12 到第11 d 2×2-12，MBC值由1.4×2-6到第11 d 2.4×2-6。見表1、圖1和圖2。

表1 A，B，C 3組取樣MIC與MBC值

圖1 開啟3-15 d A，B，C 3組消毒液對標準菌株大腸桿菌的MIC變化趨勢圖

圖2 開啟3-15 d A，B，C 3 組消毒液對標準菌株大腸桿菌的MBC變化趨勢圖

4 討論

有效的皮膚消毒劑的選擇和管理對確保消毒劑的安全使用和醫(yī)院感染預防與控制具有十分重要的意義。隨著消毒滅菌技術(shù)的發(fā)展，消毒產(chǎn)品也在不斷更新，各種消毒劑廣泛應用于臨床，由于不同級別醫(yī)院病區(qū)、手術(shù)室規(guī)模和業(yè)務量不一，皮膚消毒劑品牌、規(guī)格的使用選擇不一，但臨床使用管理共同存在的困惑是皮膚消毒劑開啟后使用效期管理沒有參照執(zhí)行的統(tǒng)一標準，因此臨床工作中對開啟后的消毒液使用期限難以把控[3]。存在消毒劑安全使用問題與浪費現(xiàn)象，還可導致耐藥菌株在醫(yī)院的定植[4-5]。研究報道指出隨著使用時間的延長，消毒液會發(fā)生細菌污染，且污染率為2.52%，超標率為1.83%[6]；臨床研究發(fā)現(xiàn)皮膚消毒液的安全有效性一般受到環(huán)境溫度、濕度、空氣潔凈度、暴露時間、人為因素（操作習慣、無菌棉簽的使用、反復取用）等多因素的影響[7]。

本試驗在萬級潔凈手術(shù)室環(huán)境下,正確使用無菌棉簽的情況下檢測結(jié)果表明，三組每個時間點消毒液、消毒容器瓶口和瓶蓋內(nèi)表面染菌檢測結(jié)果均為陰性。說明使用頻次為11 次的瓶裝消毒液開啟后存放時間至15 d 未檢測出細菌污染、使用頻次為19 次的瓶裝消毒液開啟后存放時間至13 d 未檢測出細菌污染，使用頻次為27次的瓶裝消毒液開啟后存放時間至11天未檢測出細菌污染。

安爾碘皮膚消毒液開啟后抑菌殺菌效果的穩(wěn)定性是影響消毒液安全使用的重要因素，也是臨床消毒液開啟后明確使使用效期管理的參考依據(jù)之一[9]。本研究中安爾碘皮膚消毒劑對標準菌株大腸桿菌ATCC25922抑菌殺菌效果顯示：隨著使用時間延長，三組MIC 與MBC 值逐漸增大，但是增大不明顯，說明安爾碘皮膚消毒劑殺菌抑菌效果隨著使用時間的延長變化不大；而劉青研究發(fā)現(xiàn)在內(nèi)科病區(qū)、門診輸液中心、普外科等科室在連續(xù)使用7 d 以上也能夠保持良好的殺菌能力[8],林輝研究顯示安爾碘皮膚消毒液相比其它復合碘,抑菌效果較理想[9]。因此，本研究結(jié)果提示安爾碘皮膚消毒劑在手術(shù)室恒溫恒濕恒潔凈度的情況下，控制暴露時間，控制棉簽的無菌使用，控制人員混雜因素的情況下，安爾碘皮膚消毒液使用頻次在11 次以下，存放到15 d，抑菌殺菌效果變化不明顯；使用頻次在19次以下，存放到13 d，抑菌殺菌效果變化不明顯；使用頻次在27 次以下，存放到11 d，抑菌殺菌效果變化不明顯。