孟淑榮，王山山

乙型肝炎可導(dǎo)致肝硬化、肝功能衰竭和原發(fā)性肝癌，其中失代償期肝硬化常并發(fā)腹水、肝性腦病和食管胃底靜脈曲張破裂出血等嚴(yán)重并發(fā)癥，治療難度大。研究表明，乙型肝炎病毒（HBV）對肝細(xì)胞的損害并非病毒直接破壞肝細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能，而是通過免疫介導(dǎo)反應(yīng)造成的損傷過程。以B7-H3為代表的共刺激分子 B7家族在調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫應(yīng)答的雙信號系統(tǒng)中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[1]。白介素-18（IL-18）是機體內(nèi)一種非常重要的前炎性細(xì)胞因子，由活化的巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞和NK細(xì)胞等產(chǎn)生，有多種生物學(xué)功能，如能增強NK細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖、分化和成熟，促進和調(diào)節(jié)機體的免疫應(yīng)答反應(yīng)等[2，3]。本研究檢測了乙型肝炎肝硬化患者血清B7-H3和IL-18水平，以探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2015年4月～2017年3月我院收治的乙型肝炎肝硬化患者113例，男性67例，女性46例；年齡 31～52歲，平均年齡為（43.52±6.69）歲。診斷符合慢性乙型肝炎防治指南的診斷標(biāo)準(zhǔn)，其中代償期肝硬化33例，失代償期肝硬化80例。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）肝細(xì)胞癌者；（2）合并甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、戊型肝炎病毒或人類免疫缺陷病毒感染者；（3）合并自身免疫性疾病者；（4）接受過器官或骨髓移植后服用免疫抑制劑者；（5）妊娠或哺乳期婦女。另選擇同期健康志愿者20名，男性12例，女性8例；年齡30～53歲，平均年齡（41.29±5.19）歲。受試者簽署知情同意書，本研究獲得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 血清檢測 晨起，抽取外周靜脈血5 ml，3000 r/m 離心10 min，分離血清，置-80℃冰箱凍存。采用ELISA法檢測血清B7-H3和IL-18水平（試劑盒均購自上海晶美生物有限公司，參考說明書制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，使用EXL800酶標(biāo)儀讀取吸光度值）；常規(guī)行肝功能指標(biāo)檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 21.0軟件行數(shù)據(jù)處理，計量資料以（±s）表示，兩樣本間均數(shù)的比較采用t檢驗，多組樣本間均數(shù)的比較比較采用方差分析；采用直線相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組受試對象血清B7-H3水平比較 80例失代償期肝硬化患者血清B7-H3水平為（62.29±22.17）ng/ml，顯著高于33例代償期肝硬化患者的（32.27±10.29）ng/ml（P＜0.05）或 20例健康人的（11.35±4.48）ng/ml（P＜0.05，圖1）；代償期肝硬化患者血清B7-H3水平也顯著高于健康人（P＜0.05）。

圖1 不同受試對象血清B7-H3水平比較

2.2 不同受試對象血清IL-18水平比較 失代償期肝硬化患者血清IL-18水平為（585.63±121.28）pg/ml，顯著高于代償期肝硬化患者的（396.29±86.91）pg/ml（P＜0.05）或健康人的（155.31±76.93）pg/ml（P＜0.05，圖2）；代償期肝硬化患者血清IL-18水平也顯著高于健康人（P＜0.05）。

圖2 不同受試對象血清IL-18水平比較

2.3 肝硬化患者血清B7-H3與IL-18水平相關(guān)性分析 經(jīng)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，肝硬化患者血清B7-H3水平與IL-18水平間呈顯著正相關(guān)（r=0.4111，P＜0.01，圖 3）。

圖3 肝硬化患者血清B7-H3與IL-18水平相關(guān)性分析

2.4 不同Child-Pugh分級患者血清B7-H3和IL-18水平比較 根據(jù)Child-Pugh分級標(biāo)準(zhǔn)，將肝硬化患者分為Child-Pugh A、Child-Pugh B和Child-Pugh C級。結(jié)果26例Child-Pugh C級患者血清B7-H3和IL-18水平顯著高于33例Child-Pugh A級或54例 Child-Pugh B 級（P＜0.05），Child-Pugh B 級患者血清B7-H3和IL-18水平也顯著高于Child-Pugh A 級（P＜0.05，表 1）。

表1 不同Child-Pugh分級患者血清B7-H3和IL-18 水平（±s）比較

表1 不同Child-Pugh分級患者血清B7-H3和IL-18 水平（±s）比較

與Child-Pugh A級比，①P＜0.01；Child-Pugh B級比，②P＜0.01

Child-Pugh 分級 例數(shù) B7-H3（ng/ml） IL-18（pg/ml）A級 33 23.3±9.8 243.8±57.0 B級 54 52.2±13.9① 408.1±92.4①C級 26 76.5±22.8①② 594.1±112.2①②

2 討論

約2%～6%慢性乙型肝炎患者將會進展為肝硬化。乙型肝炎病毒本身并不直接引起肝細(xì)胞病變，主要是通過激發(fā)人體的免疫系統(tǒng)反應(yīng)進而識別并破壞肝細(xì)胞[4]。經(jīng)典的T淋巴細(xì)胞的有效活化和功能介導(dǎo)主要依賴于兩個信號的調(diào)節(jié)：（1）抗原遞呈細(xì)胞遞呈主要組織相容性復(fù)合體-抗原復(fù)合物；（2）協(xié)同刺激分子介導(dǎo)的輔助信號的協(xié)同作用。目前，針對T細(xì)胞活化的第2信號，即協(xié)同刺激分子的研究已逐漸成為研究的熱點?，F(xiàn)已知協(xié)同刺激分子主要包括3個家族，分別為B7家族（免疫球蛋白超家族）、腫瘤壞死因子（TNF）家族和細(xì)胞因子家族，其中B7家族是研究最早和一直受高度關(guān)注的協(xié)同刺激分子?，F(xiàn)有研究證實[5，6]，B7家族在抗病毒和抗腫瘤等諸多免疫反應(yīng)過程中起到了非常重要的作用。B7-H3作為B7家族的成員之一，在免疫調(diào)節(jié)過程中介導(dǎo)負(fù)性協(xié)同信號的發(fā)出，該信號在免疫負(fù)性調(diào)控中發(fā)揮著重要的作用，并在腫瘤免疫、自身免疫性疾病、移植免疫、病毒感染性疾病和血液病等發(fā)病過程中具有重要的意義[7]。有研究表明，B7-H3具有共刺激和共抑制的雙重作用，而其表達(dá)的微環(huán)境對B7-H3的功能發(fā)揮起了重要的調(diào)節(jié)作用。具體地說，B7-H3能夠促進刺激CD4+和CD8+T細(xì)胞的增殖，促進細(xì)胞因子IFN-γ、IL-8、TNF-α等的分泌，增強CD8+T細(xì)胞的細(xì)胞毒作用等。近年來研究發(fā)現(xiàn)[8-10]，B7-H3在包括肝細(xì)胞癌在內(nèi)的多種實體腫瘤呈異常高表達(dá)，并與疾病進展和預(yù)后較差相關(guān)?！耙倚透窝?肝硬化-肝癌”是目前較為公認(rèn)的病理生理過程，既然現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)B7-H3在肝癌發(fā)病過程中發(fā)揮了較為重要的作用[11]，那其在具有高度癌變可能的肝硬化患者中表達(dá)情況及與疾病預(yù)后的關(guān)系如何，自然成為人們關(guān)注的課題，而目前相關(guān)研究卻鮮見。

IL-18最初是在經(jīng)內(nèi)毒素刺激誘發(fā)的中毒性休克小鼠肝臟提取液中發(fā)現(xiàn)的一種具有強烈誘生IFN-γ的蛋白質(zhì)[12]。成熟的IL-18主要由活化的巨噬細(xì)胞和肝臟庫普弗細(xì)胞產(chǎn)生。IL-18主要通過與宿主細(xì)胞表面IL-18受體的相互作用從而實現(xiàn)多種生理生化功能[13，14]。IL-18的主要生物學(xué)功能有[15-18]：（1）刺激T細(xì)胞增殖，增強淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性；（2）誘導(dǎo)Th1類細(xì)胞產(chǎn)生相應(yīng)的細(xì)胞因子，主要包括IFN-γ、IL-2、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）等；（3）誘導(dǎo)免疫細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ和激活NK 細(xì)胞活化；（4）增強 ICAM-1和FasL的表達(dá)；（5）抗感染、抗腫瘤和抗超敏反應(yīng)等。在乙型肝炎發(fā)病過程中，Th1/Th2細(xì)胞比例失衡是乙型肝炎病毒感染慢性化的機制之一，而IL-18可通過誘生IFN-γ，促進Th1應(yīng)答，從而調(diào)節(jié)Th1/Th2細(xì)胞平衡[19]。隨著疾病的持續(xù)進展，當(dāng)進展至肝硬化過程時，IL-18起到了何種作用，目前相關(guān)研究亦不充分。

我們分析了正常人群、代償期肝硬化患者和失代償期肝硬化患者血清B7-H3和IL-18水平差異。研究發(fā)現(xiàn)，肝硬化患者血清B7-H3和IL-18水平均顯著高于正常人群，提示兩者在乙型肝炎肝硬化發(fā)病過程中起了某種作用。進一步觀察發(fā)現(xiàn)，失代償期肝硬化患者兩指標(biāo)均顯著高于代償期肝硬化患者。一方面，考慮B7-H3刺激CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞增殖，增強細(xì)胞毒性T細(xì)胞的誘導(dǎo)和選擇性地刺激IFN-γ 的 生產(chǎn)[20，21]；另一方面，考慮 IL-18 協(xié)同誘導(dǎo)Th1等細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ，而IFN-γ是一類主要在免疫細(xì)胞中合成的細(xì)胞因子，可作為抗原提呈細(xì)胞和淋巴細(xì)胞增殖、分化的調(diào)節(jié)劑，參與機體的炎癥反應(yīng)和抗病毒免疫。有研究顯示[22，23]，IFN-γ可能作為主要細(xì)胞因子，在引起肝損傷過程中發(fā)揮觸發(fā)作用。此外，我們還進一步分析了肝硬化患者外周血B7-H3與IL-18水平間的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩指標(biāo)間存在顯著的正相關(guān)，提示B7-H3與IL-18在乙型肝炎肝硬化發(fā)生、發(fā)展過程中可能起到了協(xié)同作用。我們進一步分析了不同Child-Pugh分級的肝硬化患者血清B7-H3和IL-18水平變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著肝功能變差或病情加重，血清B7-H3和IL-18水平均呈明顯上升趨勢，這也印證了B7-H3和IL-18對促進乙型肝炎肝硬化患者疾病進展發(fā)揮協(xié)同作用。

本研究對肝硬化的分級還是停留在臨床檢測方面，缺乏影像學(xué)和病理學(xué)檢查的支持，且肝硬化的病因有些混雜，這些因素的存在可能造成數(shù)據(jù)偏倚，血清B7-H3和IL-18升高與肝組織內(nèi)的表達(dá)的關(guān)系還需要進一步研究，它們在乙型肝炎肝硬化發(fā)病過程中的作用也還需要更多研究去探明。