谷小鳳，于宙 ，蘇濤，李建兵

(1.青島市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗技術(shù)研究所，山東 青島 266061；2.青島市標(biāo)準(zhǔn)化研究院，山東 青島 266101)

氯丙醇是在酸水解植物蛋白的過程中產(chǎn)生的一種致癌物質(zhì)[1]。由于酸水解蛋白液成本低，且具有氨基酸系列物質(zhì)和呈味性成分，能增加食品中的營養(yǎng)成分，因而近年來酸水解植物蛋白越來越廣泛地應(yīng)用在醬油等食用調(diào)味料的生產(chǎn)過程中。其代謝產(chǎn)物氯丙醇具有急、慢性毒性作用、致突變性、致癌性，對人體健康存在著巨大的潛在威脅。我國規(guī)定固態(tài)和液態(tài)調(diào)味品中3-氯-1,2-丙二醇的含量分別小于1.0，0.4 mg/kg[2]。

目前氯丙醇的檢測方法主要有氣質(zhì)聯(lián)用法[3-6]、氣相色譜法[7，8]、高效液相色譜法[9]?，F(xiàn)有的實驗方法在實際檢測富含油脂調(diào)味品時，前處理過程中油層與水相不能很好地分離，油脂含量過高，導(dǎo)致樣品難以通過SPE小柱，無法收集洗脫液，進而影響實驗進程。本文針對富含油脂樣品，優(yōu)化樣品前處理方法，建立了同位素內(nèi)標(biāo)氣質(zhì)聯(lián)用法測定含油脂調(diào)味品中氯丙醇的含量。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

試劑：3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)、乙酸乙酯、正己烷：購自Sigma公司；D5-3-氯-1,2-丙二醇(D5-3-MCPD)：購自CNW公司；七氟丁?；溥颉o水硫酸鈉、氯化鈉、無水硫酸鈉：均為優(yōu)級純，購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司。

儀器：Agilent6890+5975B氣相質(zhì)譜聯(lián)用儀，安譜DC-24-TR氮吹儀，SHA-B恒溫震蕩儀，KQ-400KDE超聲儀，Sigma 3K-15離心機，Supelso SPE固相萃取儀，Agela 3-MCD專用固相萃取柱。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制與標(biāo)準(zhǔn)曲線

3-氯-1,2-丙二醇標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：稱取10 mg(精確至0.01 mg) 3-MCPD標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用乙酸乙酯定容至10 mL，作為儲備液，濃度為1.0 mg/mL；取儲備液用正己烷稀釋至濃度10.0 mg/L作為中間液；取中間液用正己烷稀釋至濃度1.0 mg/L作為工作液。

D5-3-氯-1,2-丙二醇內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：稱取100 mg(精確至0.01 mg)D5-3-MCPD標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用乙酸乙酯定容至100 mL，作為儲備液，濃度為1.0 mg/mL，取儲備液用正己烷稀釋至10.0 mg/L，作為中間液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制：分別移取3-MCPD工作液和中間液，加入D5-3-MCPD中間液 200 μL，用正己烷稀釋至2 mL，得到3-MCPD含量為50，100，200，400，800，1600，3200 ng的標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中內(nèi)標(biāo)含量為2 mg。

1.3 樣品處理

稱取1 g(精確到0.01 g)樣品，加入3 mL 20%NaCl溶液和200 μL D5-3-MCPD中間液，超聲提取5 min。對于含有油脂的樣品，超聲后于-18 ℃冷凍30 min，在-5 ℃條件下8000 r/min離心3 min，使得油脂層和樣品其他成分分離。將樣品水層相轉(zhuǎn)移至固相萃取小柱，靜置10 min。用10 mL正己烷淋洗，棄去淋洗液，再用15 mL乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液。將洗脫液氮吹至近干，加入2 mL正己烷溶解殘渣，加入40 μL七氟丁酰基咪唑，于70 ℃恒溫水浴中衍生20 min。冷卻至室溫，加入2 mL 20% NaCl溶液，充分混勻后靜置分層，取正己烷層，加入少量無水硫酸鈉除水，待測。

1.4 氣相色譜-質(zhì)譜條件

氣相色譜條件：色譜柱為DB-5MS毛細管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；進樣口溫度為250 ℃，分流比為10∶1；柱初始溫度為50 ℃，保持1 min，以2 ℃/min的速率升到90 ℃，然后以40 ℃/min的速率升到270 ℃，保持5 min。

質(zhì)譜條件：離子源為EI源，溫度為230 ℃，四級桿溫度為150 ℃，接口溫度為280 ℃，掃描模式為SIM。

2 結(jié)果與分析

2.1 3-氯-1,2-丙二醇標(biāo)準(zhǔn)曲線

以D5-3-氯-1,2-丙二醇作為內(nèi)標(biāo)，利用GC-MS測定不同濃度3-氯-1,2-丙二醇和內(nèi)標(biāo)D5-3-氯-1,2-丙二醇的響應(yīng)值。以3-MCPD和D5-3-MCPD的峰面積比值為縱坐標(biāo)，以3-MCPD的質(zhì)量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見圖1。

圖1 3-MCPD標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of 3-MCPD

3-氯-1,2-丙二醇的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0.1224x-1.0511×10-4，相關(guān)系數(shù)R2=0.9992，根據(jù)信噪比計算得出的檢出限為0.031 mg/kg。

2.2 油脂去除優(yōu)化

油脂含量高的樣品，如一些湯料、方便面調(diào)料，無法過SPE小柱，因此本文通過冷凍和低溫離心將油脂分離。經(jīng)試驗，冷凍30 min左右油脂會凝固，經(jīng)低溫離心，油脂與水相可分離。

2.3 加標(biāo)回收率

選取不含3-氯-1,2-丙二醇的空白樣品，分別添加3-氯-1,2-丙二醇400，1000 ng，樣品按1.3部分處理后用GC-MS進行分析，3-氯-1,2-丙二醇的回收率為80.0%～89.0%，結(jié)果見表1。

表1 3-MCPD回收率試驗Table 1 3-MCPD recovery test

2.4 精密度試驗

由表1可知，在添加400，1000 ng水平下，6次重復(fù)測定結(jié)果的精密度分別為4.05%和3.76%，方法精密度好，滿足日常分析的要求。

2.5 實際樣品的測定

選取5種不同樣品，用該方法測定其3-氯-1,2-丙二醇的含量，結(jié)果見表2。

表2 不同樣品中3-MCPD含量Table 2 3-MCPD content in different samples mg/kg

由表2可知，所選樣品中4種樣品有檢出3-MCPD，含量在0.067～0.115 mg/kg之間。將5種樣品在前處理方法中略去油脂，去除優(yōu)化過程，樣品離心后水相很難通過SPE小柱，無法收集洗脫液。因此，該方法適用于富含油脂調(diào)味品中3-MCPD含量的檢測。

3 結(jié)論

本文改進了氯丙醇的前處理方法，建立了利用GC-MS檢測3-氯-1,2-丙二醇的方法。實驗表明，該方法能夠?qū)⒏缓椭{(diào)味料中的油脂和水相實現(xiàn)很好的分離，降低樣品水相中的油脂含量，縮短過SPE柱時間，降低樣品檢測過程中雜質(zhì)的干擾。該方法檢出限低，回收率好，準(zhǔn)確度好，重現(xiàn)性好，可用于富含油脂調(diào)味品中3-氯-1,2-丙二醇的檢測。