夏良萍 劉大標(biāo)

江蘇省鎮(zhèn)江市第四人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇鎮(zhèn)江 212001

女性惡性腫瘤中宮頸癌的發(fā)病率僅次于乳腺癌，我國宮頸癌發(fā)病率為99/10 萬，死亡率為30.5/10 萬［1］。宮頸癌形成前有一個(gè)漫長的宮頸病變階段，即慢性宮頸炎癥、宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變等，早期診斷并判斷病情進(jìn)展情況，對(duì)制訂宮頸癌防治措施具有重要價(jià)值［2］。研究發(fā)現(xiàn)［3］，在宮頸病變過程中，細(xì)胞免疫功能異常，免疫系統(tǒng)抑制后，對(duì)上皮突變細(xì)胞的識(shí)別與殺傷能力明顯降低，促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移。T 淋巴細(xì)胞亞群介導(dǎo)了細(xì)胞免疫反應(yīng)，且具有維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)和殺傷腫瘤細(xì)胞的功能，調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞參與免疫負(fù)調(diào)控過程，抑制多種免疫細(xì)胞的活化［4-5］。本研究通過檢測外周血T 淋巴細(xì)胞亞群、調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞的表達(dá)水平，旨在探討其在宮頸病變過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017 年1 月～2019 年6 月江蘇省鎮(zhèn)江市第四人民醫(yī)院（以下簡稱“我院”）的宮頸病變患者100 例為病例組，根據(jù)宮頸病變類型結(jié)果，分為慢性宮頸炎亞組（n=24），宮頸上皮內(nèi)瘤變亞組（n=37），宮頸癌亞組（n=39）；根據(jù)人乳頭瘤病毒（HPV）感染情況分為HPV 高危亞組（n=58），HPV 低危亞組（n=42）。同期隨機(jī)選取65 例健康體檢女性為對(duì)照組。病例組年齡23～76 歲，平均（45.23±8.75）歲；體重指數(shù)（BMI）22～27 kg/m2，平均（22.61±1.64）kg/m2；HPV 感染86 例；對(duì)照組年齡22～69 歲，平均（43.38±9.59）歲；BMI 21～26 kg/m2，平均（22.40±1.79）kg/m2。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。研究對(duì)象及家屬均簽署知情同意書，且本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理活檢證實(shí)存在宮頸病變；②首次確診；③年齡≥18 歲；④臨床病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期以及哺乳期者；②心臟功能不全者及肝、腎功能障礙者；③伴有急慢性炎性反應(yīng)疾??；④伴有自身免疫性疾病；⑤伴有精神疾??；⑥乳腺癌、卵巢癌等可能影響本研究結(jié)果的惡性腫瘤患者；⑦納入研究前接受過藥物或者手術(shù)治療。

1.2 方法

對(duì)照組于體檢當(dāng)日抽取空腹肘靜脈血6 mL，病例組于入院次日收集空腹肘靜脈血6 mL。肝素鈉抗凝后采用FACS Canto Ⅱ型流式細(xì)胞儀（美國BD 公司）檢測T 淋巴細(xì)胞亞群和調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞水平。檢測方法：肝素抗凝后的血液標(biāo)本加入5 mL 流式管，分別將10 μL CD3、CD4、CD8 抗體［貝克曼庫爾特商貿(mào)（中國）有限公司提供，批號(hào)：161207］加入管中混勻，37℃避光孵育20 min；加入2 mL 1×紅細(xì)胞裂解液,混勻，避光放置10 min，溶解紅細(xì)胞；2000 r/min 離心10 min（離心半徑為10 cm），取血漿；加入2 mL 磷酸鹽緩沖液（PBS），重懸細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測T 淋巴細(xì)胞亞群（CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+），同時(shí)檢測調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞CD4+CD25+CD127-水平。CD4+CD25+CD127-試劑盒由貝克曼庫爾特商貿(mào)（中國）有限公司提供（批號(hào)：20161025）。本研究均在同一環(huán)境下、由同一名操作人員使用相同的儀器進(jìn)行檢測。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SAS 9.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD 檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson 積聚相關(guān)分析。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組外周血T 淋巴細(xì)胞亞群、調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞水平比較

病例組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平低于對(duì)照組，CD8+、CD4+CD25+CD127-水平水平高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組外周血T 淋巴細(xì)胞亞群、調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞水平比較（±s）

表1 兩組外周血T 淋巴細(xì)胞亞群、調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞水平比較（±s）

2.2 不同宮頸病變類型亞組外周血T 淋巴細(xì)胞亞群、調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞水平比較

宮頸上皮內(nèi)瘤變亞組、宮頸癌亞組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平低于慢性宮頸炎組，CD8+、CD4+CD25+CD127-水平高于慢性宮頸炎亞組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；宮頸癌亞組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平低于宮頸上皮內(nèi)瘤變亞組，CD8+、CD4+CD25+CD127-水平高于宮頸上皮內(nèi)瘤變亞組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見表2。

2.3 不同HPV 感染亞組外周血T 淋巴細(xì)胞亞群、調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞水平比較

HPV 高危亞組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平低于HPV 低危亞組，CD8+、CD4+CD25+CD127-水平高于HPV 低危亞組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見表3。

2.4 Pearson 積矩相關(guān)分析

宮頸病變嚴(yán)重程度與CD3+（r=-0.617，P＜0.05）、CD4+（r=-0.592，P＜0.05）、CD4+/CD8+（r=-0.628，P＜0.05）呈負(fù)相關(guān)，與CD8+（r=0.603，P＜0.05）、CD4+CD25+CD127-（r=0.624，P＜0.05）呈正相關(guān)。

表2 不同宮頸宮頸病變類型亞組外周血T 淋巴細(xì)胞亞群、調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞水平比較（±s）

表2 不同宮頸宮頸病變類型亞組外周血T 淋巴細(xì)胞亞群、調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞水平比較（±s）

注：與慢性宮頸炎亞組比較，*P＜0.05；與宮頸上皮內(nèi)瘤變亞組比較，#P＜0.05

表3 不同HPV 感染亞組外周血T 淋巴細(xì)胞亞群、調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞水平比較（±s）

表3 不同HPV 感染亞組外周血T 淋巴細(xì)胞亞群、調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞水平比較（±s）

注：HPV：人乳頭瘤病毒

3 討論

宮頸病變是女性生殖系統(tǒng)常見疾病，嚴(yán)重者可發(fā)展為宮頸癌，早期篩查有助于及時(shí)發(fā)現(xiàn)宮頸病變并預(yù)防宮頸癌［6-9］的發(fā)生。臨床主要通過陰道鏡聯(lián)合宮頸組織病理活檢、膜式液基薄層細(xì)胞學(xué)、第二代基因雜交捕獲技術(shù)等手段發(fā)現(xiàn)宮頸上皮內(nèi)瘤變，進(jìn)一步評(píng)估宮頸癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)［10］。但其適用人群不同，且費(fèi)用相對(duì)較高，患者依從性較低。研究顯示［11-12］，免疫功能低下貫穿宮頸病變的整個(gè)環(huán)節(jié)，也是導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生的重要原因。T 淋巴細(xì)胞是具有免疫功能的淋巴細(xì)胞，通過細(xì)胞之間的接觸、競爭性抑制、分泌抑制性細(xì)胞因子等方式，維持機(jī)體免疫穩(wěn)定及調(diào)控免疫應(yīng)答，同時(shí)還能直接殺傷靶細(xì)胞，抑制T 細(xì)胞活化，避免機(jī)體免疫系統(tǒng)識(shí)別和破壞腫瘤細(xì)胞，最終促使機(jī)體耐受腫瘤細(xì)胞［13-15］。T 淋巴細(xì)胞免疫功能失調(diào)或者免疫抑制可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞免疫逃逸，促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、侵襲和轉(zhuǎn)移［16］。調(diào)節(jié)性T 淋巴細(xì)胞主要在胸腺中發(fā)育成熟，經(jīng)誘導(dǎo)形成有免疫調(diào)節(jié)功能的T 淋巴細(xì)胞。研究顯示［17］，調(diào)節(jié)性T 淋巴細(xì)胞可抑制CD4+、CD8+亞群的增殖反應(yīng)，負(fù)向調(diào)控自然殺傷（NK）細(xì)胞的免疫效應(yīng)，并使腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸而促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞的發(fā)生和發(fā)展。

T 淋巴細(xì)胞亞群中CD4+、CD8+及CD4+/CD8+的比例與細(xì)胞免疫反應(yīng)密切相關(guān)，正常生理狀態(tài)下兩大亞群比例在一定范圍內(nèi)波動(dòng)，維持機(jī)體的免疫系統(tǒng)平衡，一旦機(jī)體出現(xiàn)免疫功能紊亂，其比例呈異常改變；CD4+CD25+CD127-主要反映調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞在機(jī)體的免疫抑制功能，其水平升高可抑制T 淋巴細(xì)胞亞群的效應(yīng)［12,18］。本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，病例組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平顯著降低，CD8+水平升高，提示宮頸病變患者細(xì)胞免疫功能紊亂，T 淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)異常，可能是由于宮頸病變破壞機(jī)體的免疫功能，減少T 淋巴細(xì)胞總?cè)汉蛠喨旱谋壤?，與王金生等［11］的研究結(jié)果相似。此外，病例組CD4+CD25+CD127-水平高于對(duì)照組，可能是因?yàn)檎{(diào)節(jié)性T 細(xì)胞可分泌促炎因子如白細(xì)胞介素（IL）-10、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）發(fā)揮免疫抑制效應(yīng)，同時(shí)還能直接抑制T 細(xì)胞活化，發(fā)揮負(fù)向免疫調(diào)控功能。本結(jié)果還顯示，隨著宮頸病變程度的加重，外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平趨于下降，CD8+水平趨于升高，提示隨著病情不斷進(jìn)展，患者免疫功能失衡程度加重，直至引發(fā)宮頸癌。同時(shí)，隨著宮頸病變程度加劇，CD4+CD25+CD127-水平逐漸升高，提示免疫抑制效應(yīng)增強(qiáng)，免疫功能降低，促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展。上述結(jié)果說明，T 淋巴細(xì)胞亞群和調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞亞群相互作用，形成免疫逃逸現(xiàn)象，進(jìn)一步促進(jìn)惡性腫瘤形成［19］。

HPV 感染是導(dǎo)致宮頸癌的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，本研究結(jié)果顯示，HPV 高危亞組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平比HPV 低危亞組更低，CD8+、CD4+CD25+CD127-水平相對(duì)升高，提示HPV 感染高?；颊吒状嬖诿庖吖δ芪蓙y現(xiàn)象。有研究顯示［20］，免疫功能正常的女性HPV感染可在一段時(shí)期內(nèi)痊愈，而免疫功能低下的HPV感染女性極易發(fā)生宮頸病變，增加宮頸癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。故針對(duì)HPV 感染者，尤其需要關(guān)注免疫功能情況，通過評(píng)估免疫功能在臨床采取相應(yīng)的干預(yù)手段，減少宮頸病變的持續(xù)惡變及預(yù)防宮頸癌發(fā)生。本研究有14 例患者未檢出HPV，可能是因?yàn)镠PV 已被機(jī)體清除，或者該部分患者惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展與其他病原體感染有關(guān)，或是其他罕見的宮頸病變［21］，將在下一步研究這類特殊群體。經(jīng)Pearson 積矩相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，宮頸病變的嚴(yán)重程度與T 淋巴細(xì)胞亞群、調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞密切相關(guān)，提示早期檢測細(xì)胞免疫功能相關(guān)指標(biāo)可輔助臨床評(píng)估宮頸病變的嚴(yán)重程度。T 淋巴細(xì)胞亞群失衡越嚴(yán)重，免疫功能紊亂越顯著，調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞分泌的抑制性細(xì)胞因子分泌增加，兩者共同作用加重宮頸病變。

綜上所述，T 淋巴細(xì)胞亞群和調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞表達(dá)異常參與了宮頸病變的發(fā)病過程，并且與病變嚴(yán)重程度密切相關(guān)，早期檢測可輔助臨床評(píng)估宮頸病變的情況。本研究選取樣本量相對(duì)較小，且為單中心回顧性研究，建議下一步開展多中心前瞻性隊(duì)列研究，深入探討T 淋巴細(xì)胞亞群和調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞表達(dá)水平在宮頸癌發(fā)病過程中的作用。