蔣香梅

(德陽(yáng)市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川德陽(yáng) 618000)

隨著生活水平的不斷提高以及人們的飲食結(jié)構(gòu)的改變，胃腺癌的發(fā)病率呈逐年攀升的趨勢(shì)，該類(lèi)疾病會(huì)對(duì)患者的飲食、生活方式造成一定的影響，甚至威脅到患者的健康乃至生命[1]。臨床中用于診斷胃腺癌的方式除影像學(xué)及內(nèi)窺鏡檢查外，還包括一系列血清腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)[2]。目前已經(jīng)證實(shí)，幽門(mén)螺桿菌(Hp)是慢性胃炎以及消化性潰瘍等疾病的主要致病因子之一，并參與了胃癌的發(fā)生與發(fā)展過(guò)程。隨著研究的不斷深入，研究人員提出Hp感染可能與其他胃腺癌密切相關(guān)。血清總唾液酸是神經(jīng)氨酸的一種乙酰化衍生物，參與了細(xì)胞癌變的過(guò)程。目前國(guó)內(nèi)外尚未查見(jiàn)關(guān)于Hp抗原聯(lián)合血清總唾液酸檢測(cè)在胃腺癌診斷方面的相關(guān)報(bào)道，所以本研究以消化系統(tǒng)疾病患者為研究對(duì)象，旨在探討二者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)在胃腺癌的早期診斷與消化系統(tǒng)疾病鑒別中的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究選取2016年2月至2017年2月期間本院收治90例胃腺癌患者(惡性腫瘤組)、90例消化系統(tǒng)良性疾病患者(良性疾病組)及同期入院體檢的60例健康人(健康對(duì)照組)為研究對(duì)象。

1.1.1納入標(biāo)準(zhǔn) (1)胃腺癌患者，均經(jīng)病理及影像學(xué)確診；(2)消化系統(tǒng)良性疾病患者；(3)18～75歲，性別不拘；(4)健康對(duì)照組受試者均無(wú)呼吸、消化和生殖等系統(tǒng)疾?。?5)臨床資料完整者。

1.1.2排除標(biāo)準(zhǔn) (1)排除合并其他惡性腫瘤患者；(2)排除嚴(yán)重精神類(lèi)疾病者；(3)排除短期內(nèi)服用過(guò)對(duì)Hp檢查有影響藥物的患者；(4)排除經(jīng)手術(shù)及放化療的惡性腫瘤患者；(5)排除臨床資料不全者。

1.1.3失聯(lián)原因及應(yīng)對(duì)措施 (1)預(yù)計(jì)原因：受試者退出試驗(yàn)；受試者轉(zhuǎn)院治療；(2)應(yīng)對(duì)措施：遵照入選和排除標(biāo)準(zhǔn)按1：1比例補(bǔ)充。

1.1.4醫(yī)學(xué)倫理學(xué)問(wèn)題 (1)受試者及家屬簽署同意參與研究的同意書(shū)；(2)依據(jù)臨床指南的相關(guān)原則充分保障受試者的治療安全。(3)對(duì)患者診療記錄進(jìn)行保密，保護(hù)受試者的隱私權(quán)(倫理學(xué)批準(zhǔn)函編號(hào)：2016-015)。

1.2研究方法

1.2.1酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法檢測(cè)Hp抗原 于晨起后采集全部受試者刷牙前唾液標(biāo)本，并取1 mL唾液治愈試管中送檢。采用ELISA雙抗體夾心法(試劑盒購(gòu)自中美合資北京協(xié)和藥業(yè)有限公司)，向包被抗-Hp多克隆抗體孔內(nèi)加入混勻唾液，每孔100 μL，隨后加入兔抗-Hp多克隆抗體(辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記)，每孔20 μL，置于室溫條件下1 h；采用1倍沖洗液洗板至少5次。每孔加入底物溶液2滴，置于室溫條件下10 min后每孔加入停止液2滴；采用比色儀在450 nm單波長(zhǎng)條件下進(jìn)行比色，檢測(cè)結(jié)果≥0.141判定為Hp抗原陽(yáng)性，<0.141則判定為Hp抗原陰性。

1.2.2酶法測(cè)定血清總唾液酸 采集全部受試者靜脈血3 mL，采用離心機(jī)在3 000 r/ min條件下離心10 min，取上層血清保存于-80 ℃冰箱中待測(cè)，要求于1周內(nèi)完成檢測(cè)。采用酶法于P800全自動(dòng)生化分析儀(羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司)測(cè)定受試者血清總唾液酸含量，測(cè)定試劑盒購(gòu)自浙江東甌診斷產(chǎn)品有限公司，全部步驟均嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。血清總唾液酸正常范圍為456～754 mg/L，檢測(cè)結(jié)果>754 mg/L則判定為血清總唾液酸陽(yáng)性。

1.2.3采用免疫組織化學(xué)SP方法測(cè)定胃黏膜中Survivi的陽(yáng)性率 利用兔抗人Survivi當(dāng)多克隆抗體(南京碧云天公司)進(jìn)行免疫組化染色；光鏡下細(xì)胞漿、膜中出現(xiàn)粗細(xì)一致的棕黃色顆粒和細(xì)胞核呈棕黃色為陽(yáng)性顯色(Survivin 主要在細(xì)胞核表達(dá))。利用光鏡(×400)隨機(jī)觀察 5個(gè)視野，利用二次計(jì)分法：(1)染色強(qiáng)度計(jì)分：無(wú)顯色計(jì)為0分，顯淡黃色計(jì)為1分，顯棕黃色計(jì)為2分，顯棕褐色計(jì)為3分；(2)陽(yáng)性細(xì)胞百分比計(jì)分：陰性為0分，陽(yáng)性細(xì)胞比例<10% 為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。計(jì)算兩者得分乘積，如果積分≤2分為陰性，如果>2分為則為陽(yáng)性。

2 結(jié) 果

2.13組受試者一般資料比較 調(diào)查結(jié)果顯示，3組受試者性別、年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，故可排除上述因素對(duì)研究結(jié)果造成的影響，數(shù)據(jù)具有可比性，見(jiàn)表1。

表1 兩組受試者一般資料及病理信息比較

2.23組受試者Hp抗原陽(yáng)性檢出率比較 惡性腫瘤組受試者Hp抗原陽(yáng)性檢出率為78.89%，明顯高于良性疾病組及健康對(duì)照組，良性疾病組受試者Hp抗原陽(yáng)性檢出率明顯高于健康對(duì)照組(5.56%vs. 1.67%)，3組受試者間Hp抗原陽(yáng)性檢出率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 3組受試者Hp抗原陽(yáng)性檢出率比較

2.33組受試者血清總唾液酸陽(yáng)性檢出率比較 惡性腫瘤組受試者血清總唾液酸陽(yáng)性檢出率為56.67%，明顯高于良性疾病組及健康對(duì)照組，良性疾病組受試者血清總唾液酸陽(yáng)性檢出率明顯高于健康對(duì)照組(8.89%vs.3.33%)，3組受試者間血清總唾液酸陽(yáng)性檢出率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 3組受試者血清總唾液酸陽(yáng)性檢出率比較

2.43組受試者血清總唾液酸平均含量比較 惡性腫瘤組受試者血清總唾液酸平均含量為(845.17±72.38)mg/L，明顯高于良性疾病組及健康對(duì)照組，良性疾病組受試者血清總唾液酸平均含量明顯高于健康對(duì)照組(690.25±53.19)mg/Lvs.(587.26±36.12)mg/L，3組受試者間血清總唾液酸平均含量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表4。

表4 3組受試者血清總唾液酸平均含量比較

2.53組受試者胃黏膜Survivin的表達(dá) 在受試者胃黏膜檢測(cè)到Survivin的表達(dá)即認(rèn)為該檢測(cè)項(xiàng)目為陽(yáng)性結(jié)果，3組受試者胃黏膜Survivin的表達(dá)陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表4。

2.6單獨(dú)檢測(cè)Hp抗原、血清總唾液酸及二者聯(lián)合診斷胃腺癌的靈敏度與特異度的比較 單獨(dú)檢測(cè)Hp抗原診斷胃腺癌的靈敏度與特異度分別為47.9%、90.4%；單獨(dú)檢測(cè)血清總唾液酸診斷胃腺癌的靈敏度與特異度分別為52.3%、82.7%；二者聯(lián)合診斷胃腺癌的靈敏度與特異度分別為80.1%、80.9%，見(jiàn)表5。

表4 3組受試者胃黏膜Survivin的表達(dá)

表5 單獨(dú)檢測(cè)Hp抗原、血清總唾液酸及二者聯(lián)合診斷胃腺癌的靈敏度與特異度(%)

2.7Hp抗原、血清總唾液酸單獨(dú)以及聯(lián)合檢測(cè)與胃黏膜Survivin檢測(cè)的相關(guān)性分析 線性相關(guān)分析表明，Hp抗原、血清總唾液酸聯(lián)合檢測(cè)與胃黏膜Survivin檢測(cè)的結(jié)果呈正相關(guān)(r=0.94，P<0.05)。

3 討 論

近年來(lái)，我國(guó)消化系統(tǒng)惡性腫瘤發(fā)病率較高，且呈現(xiàn)每年遞增的趨勢(shì)，嚴(yán)重危害患者及其家庭，早期診斷對(duì)于消化系統(tǒng)惡性腫瘤的治療意義重大[3-5]。目前越來(lái)越多的腫瘤標(biāo)志物應(yīng)用于臨床上惡性腫瘤的早期診斷中，并取得較好的輔助效果。然而值得注意的是，腫瘤標(biāo)志物在惡性腫瘤的診斷中尚存缺陷，為此，本研究將Hp抗原與血清總唾液酸兩種指標(biāo)相結(jié)合，旨在提升消化系統(tǒng)惡性腫瘤早期診斷的準(zhǔn)確性。故本研究進(jìn)一步分析Hp抗原、血清總唾液酸聯(lián)合檢測(cè)與胃黏膜Survivin檢測(cè)的相關(guān)性分析，以為臨床診治提供更為詳實(shí)的理論依據(jù)。

本研究將唾液中Hp抗原與血清總唾液酸含量進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)，將消化系惡性腫瘤患者診斷的靈敏度提升至80.1%，并得出結(jié)論，二者聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度明顯高于單獨(dú)檢測(cè)其中一種指標(biāo)，二者聯(lián)合檢測(cè)在臨床中胃腺癌的早期診斷與鑒別中具有一定的輔助價(jià)值。尤其重要的是，本研究利用線性相關(guān)分析表明，Hp抗原、血清總唾液酸聯(lián)合檢測(cè)與胃黏膜Survivin檢測(cè)的結(jié)果呈正相關(guān)(r=0.94，P<0.05)。直接檢測(cè)胃黏膜Survivin需要活檢取得患者的胃黏膜，該操作屬于有創(chuàng)操作，患者在活檢過(guò)程中比較痛苦，其診治費(fèi)用亦較高。而Hp抗原、血清總唾液酸聯(lián)合檢測(cè)創(chuàng)傷小、速度快捷。

筆者分析其機(jī)理發(fā)現(xiàn)，Survivin是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白家族(IAP)成員之一，具有不同于IAP家族其他成員的獨(dú)特結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，其表達(dá)于腫瘤和未分化的胚胎組織，在正常組織中不表達(dá)，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究利用線性相關(guān)分析表明，Hp抗原、血清總唾液酸聯(lián)合檢測(cè)與胃黏膜Survivin檢測(cè)的結(jié)果呈正相關(guān)關(guān)系，其相關(guān)度較高。這是因?yàn)镾urvivin還作為微血管動(dòng)力穩(wěn)定因子，調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂，保護(hù)細(xì)胞的完整性，在血管內(nèi)皮細(xì)胞生成和血管生成中起關(guān)鍵作用。胃炎類(lèi)型、環(huán)境因素以及細(xì)菌類(lèi)型等因素參與了胃癌的發(fā)生與發(fā)展，并認(rèn)為Hp的存在使得胃癌的發(fā)病率明顯提高[6-8]。本研究中消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者唾液Hp抗原的陽(yáng)性檢出率明顯高于消化系統(tǒng)良性疾病患者與健康人，良性疾病患者高于健康人，且3組受試者間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，再次證實(shí)了Hp與消化系統(tǒng)疾病及腫瘤的發(fā)生發(fā)展顯著相關(guān)。血清總唾液酸作為細(xì)胞膜糖蛋白的主要組成部分，血清總唾液酸含量隨著細(xì)胞惡變、癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)、失去接觸性抑制而變化[9]。

4 結(jié) 論

本文研究結(jié)果顯示，消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者與良性疾病患者血清總唾液酸含量明顯升高，且惡性腫瘤患者明顯高于良性疾病患者，這是由于正常條件下人體內(nèi)血清總唾液酸含量保持穩(wěn)定，而當(dāng)發(fā)生腫瘤惡變、炎性反應(yīng)或其他疾病時(shí)，細(xì)胞膜上糖脂合成上升且細(xì)胞膜上糖脂轉(zhuǎn)化出現(xiàn)異常，導(dǎo)致脫落或分泌入血，最終引起患者血清總唾液酸含量上升[10-12]。故而，Hp抗原、血清總唾液酸聯(lián)合檢測(cè)與胃黏膜Survivin檢測(cè)的結(jié)果呈正相關(guān)關(guān)系，其相關(guān)度較高，其可以代替胃黏膜Survivin檢測(cè)作為胃腺癌診斷的敏感指標(biāo)。