申賀

摘 要：在物質(zhì)鑒定技術(shù)體系當中。凝膠色譜法一直以來都是一種非常常用的技術(shù)，尤其在頭孢菌素藥物的高分子雜志測定當中的應(yīng)用尤其廣泛。和其他成分測定技術(shù)相比起來，該技術(shù)分離效果出色，同時操作簡單，易于使用，設(shè)備操作也并不復雜，所以在長期實踐當中得到了人們的喜愛。本文對于凝膠色譜法測定頭孢菌素類藥物當中高分子雜質(zhì)的一些應(yīng)用要點進行了總結(jié)和分析，希望可以給相關(guān)工作的開展提供一些參考。

關(guān)鍵詞：頭孢菌素類藥物；凝膠色譜技術(shù)；高分子雜質(zhì)

由于藥物藥理以及具體的制備工藝的原因，很多抗生素藥物當中有很多高分子雜質(zhì)的存在，其對于抗生素藥物效果的正常發(fā)揮而言起到了很大的影響，在嚴重時，甚至會產(chǎn)生一些副作用，所以不難看出高分子雜質(zhì)測定的重要性，在其投入市場開始大規(guī)模銷售之前，首先需要保證高分子雜質(zhì)數(shù)量符合于相關(guān)規(guī)定?，F(xiàn)在在頭孢菌素類藥物的高分子雜質(zhì)測定當中，凝膠色譜法的應(yīng)用較為廣泛，本文針對其中的測定要點進行了分析。

1 儀器準備和實驗準備

對于這種物質(zhì)分析類的醫(yī)學實驗而言，準備工作是非常重要的，頭孢菌素類的藥物高分子雜質(zhì)測定實驗也是如此?？偨Y(jié)起來，作為實驗人員來說，首先需要做好各項準備工作，保證各項參數(shù)完全符合說明書的要求，讓實驗可以取得一個更好的結(jié)果。

1.1 儀器準備

對于儀器準備而言，實驗人員首先需要將輸液設(shè)備、檢測設(shè)備以及數(shù)據(jù)處理設(shè)施準備好，對于輸液設(shè)備而言，首先需要保證設(shè)別在運行過程中輸液流動速度的均勻性，讓其符合相關(guān)標準的規(guī)范，同時監(jiān)測設(shè)備準備工作也要著重考慮紫外檢測能力，確保該項能力達到飾演的需要。設(shè)備準備過程中，工作人員也要及時和色譜工作站的人員取得聯(lián)絡(luò)，保證數(shù)據(jù)記錄的準確無誤，同時工作人員也可以將數(shù)據(jù)發(fā)送到積分記錄儀器當中。儀器準備工作最關(guān)鍵的一個環(huán)節(jié)就是設(shè)置合理的檢測標準，及時檢測自行配置的儀器設(shè)備。實驗人員為了可以保證試驗的重現(xiàn)性，在工作中也要隨時對設(shè)備進行復檢。

1.2 凝膠色譜柱的準備

在本實驗當中凝膠色譜柱起到的作用是非常關(guān)鍵的，工作人員你首先需要足夠了解儀器設(shè)備，尤其是要明確儀器的最大容量，這樣實驗人員才能夠依據(jù)藥品的溶解能力來進行實驗，以此保證實驗成功。一般而言，凝膠色譜柱體積不能超過柱床體積，由于此類藥物中存在的高分子雜質(zhì)比較特殊，尤其是柱床體積更為特別，所以在準備過程中可以直接確定柱床體積在50ml左右，在此基礎(chǔ)上就可以確定凝膠色譜柱體積。

1.3 分段玻璃柱管以及提取凝膠介質(zhì)

對于玻璃柱管而言，首先需要檢視其外觀，如果出現(xiàn)開口，則應(yīng)采用玻璃棉和開口橡膠塞來封端，也可以使用可調(diào)節(jié)玻璃柱管來開展實驗。對抗生素藥物而言，高分子測定過程中需要采用葡聚糖凝膠來充當試驗介質(zhì)，在實驗開始之前也要加水，保證溶脹度，結(jié)合實驗器材的相關(guān)需要來進行測算。其中的浸泡介質(zhì)如果是蒸餾水，則需要首先將其置于4℃的環(huán)境中40小時，或者將水煮沸，將氣泡排除到水外，在條件允許時，也可以采用真空脫氣的方法來溶脹，這樣可以起到更好的實驗效果。

1.4 裝柱

將溶脹好的凝膠介質(zhì)用蒸餾水懸浮靜置后，每次傾去上層液，以去除凝膠碎屑和雜質(zhì)。按照這種方法進行多次洗滌，直到上層的精置液澄清為止。實踐中可將凝膠介質(zhì)用水制成懸漿，然后一次性的倒入垂直放置的玻璃柱管中，待凝膠顆粒沉降完畢后即完成裝柱。也可在垂直放置的玻璃柱管和漏斗上放開柱管下口，保持液流順暢，用滴灌逐管從漏斗中加入凝膠懸漿，讓凝膠顆粒在蒸餾水中緩慢沉降，注意讓漏斗中隨時保持一定的凝膠懸漿。

1.5 維護以及恢復凝膠柱

對于凝膠柱而言，維護要點主要在于保證柱床的平衡性和連續(xù)性，如果凝膠出現(xiàn)了收縮問題或者氣泡變形問題，都需要將凝膠導出，重新進行裝柱。如果僅僅柱頭部位出現(xiàn)了污損，則可以直接將該部分去除，之后加水，用玻璃棒攪拌，靜置之后，凝膠顆粒重新沉降，之后將柱頭重新封閉。如果色譜柱出現(xiàn)嚴重的非特異性吸附問題，那么在后續(xù)使用當中就很可能改變凝膠色譜柱分離機制，在嚴重時，直接由于堵塞從而升高柱壓，在這種情況下則需要回復凝膠，進行相關(guān)處理。

2 系統(tǒng)適用性實驗

系統(tǒng)適用性試驗對溶液的制備更加注重方便性和可操作性，系統(tǒng)適用性試驗用溶液的配制方法為用主成分對照品與雜質(zhì)對照品混合配制，但還是會使得有些雜質(zhì)對照品不能得到，如性質(zhì)不穩(wěn)定或分離提取技術(shù)要求太高等，但這些雜質(zhì)峰恰恰又是與主成分峰最難分離的色譜峰。系統(tǒng)適用性試驗?zāi)壳鞍ê芏鄡?nèi)容，主要考察對照品測定系統(tǒng)與高分子雜質(zhì)測定系統(tǒng)中藍色葡聚糖2000溶液峰的保留時間的比值，以及理論板數(shù)和拖尾因子，以此來控制對照品測定與高分子雜質(zhì)測定時儀器狀態(tài)的同一性。在以藍色葡聚糖2000的保留時間來表示高分子雜質(zhì)的保留特征時，對照品色譜峰及高分子雜質(zhì)色譜峰與藍色葡聚糖2000溶液色譜峰保留時間的比值都應(yīng)控制在一定的限度內(nèi)，由此才能實現(xiàn)對色譜柱狀態(tài)的正常控制。

3 操作方法上的注意事項

3.1 樣品溶液及對照溶液的制備

具體操作中必須要按規(guī)定的標準來配制樣品溶液，由于某些高濃度抗生素溶液具有一定的不穩(wěn)定性，所以通常對樣品溶液采取即溶即進的形式。對照溶液的制備上，要注意頭孢菌高分子雜質(zhì)的含量測定，通常以樣品自身在SDS水溶液或純水中的締合物作為對照進行定量。在制備締合物時特別要注意對濃度及水的純度的控制，以此來保證締合完全。

3.2 進樣及進樣方式

由于頭孢菌素高分子雜質(zhì)的含量測定，需要對照溶液分別在不同流動相狀態(tài)下進樣，所以更換流動相后凝膠色譜柱應(yīng)充分平衡后才能進樣。進樣方式可以采用色譜儀自動進樣，也可以選取手動的方式，但是兩種進樣方式都必須要做到色譜柱端沒有死體積，這樣才能避免樣品的擴散造成峰展寬甚至影響分離。在自動進樣操作時可以參照有關(guān)液相色譜操作規(guī)程進行，手動進樣方式主要用于開口柱。

4 結(jié)束語

經(jīng)過前文總結(jié)，我們已經(jīng)知道，在臨床當中，頭孢菌素是一種較為常用的抗生素，而高分子雜質(zhì)含量直覺決定其自身的質(zhì)量，所以需要我們及時對其中的高分子雜質(zhì)含量進行測定，讓其可以發(fā)揮預期的藥效，避免產(chǎn)生副作用。在長時間貯存的過程當中，頭孢菌素類藥物會導致各種雜質(zhì)的產(chǎn)生，以聚合物為主，對于該高分子雜質(zhì)而言，凝膠色譜法有著很好的分離效果，應(yīng)用較為廣泛，本文針對其使用要點進行簡要分析。

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