趙 芬，張愛萍，趙楠楠，欒希英

(1.濱州醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室，山東煙臺(tái) 264003；2.煙臺(tái)市福山區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東煙臺(tái) 265500)

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種病因不明、以關(guān)節(jié)滑膜炎癥為主的自身免疫性疾病，以自身抗體觸發(fā)的慢性炎癥為主要臨床特征[1]，會(huì)引起機(jī)體多種免疫功能的紊亂，若不及時(shí)診斷治療，可破壞關(guān)節(jié)及其周圍組織，導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和功能減退[2]，最終可致殘。準(zhǔn)確及時(shí)地評(píng)估病情能夠最大限度地使患者的病程得到緩解和控制[3]。而目前用于RA病情活動(dòng)性評(píng)估的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)類風(fēng)濕因子(rheumatoid factors，RF)、抗環(huán)瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptide，CCP)抗體、C反應(yīng)蛋白(C-Reactive Protein，CRP)和紅細(xì)胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate，ESR)等對(duì)RA病情活動(dòng)性評(píng)估的靈敏度和特異度都比較低，因此尋找更合適、更多與病情活動(dòng)度相關(guān)的炎性指標(biāo)尤為重要。本研究通過檢測(cè)不同活動(dòng)期RA患者血清IL-27水平及外周血PLR值，分析其與疾病活動(dòng)度的相關(guān)性，繼而探討血清IL-27水平與PLR聯(lián)合在RA病情活動(dòng)度評(píng)估中的價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 活動(dòng)期RA患者96例，為煙臺(tái)市福山區(qū)人民醫(yī)院2017年10月～2018年10月門診和住院患者，均符合2010年ACR/EULAR制定的RA分類標(biāo)準(zhǔn)[4]，排除其他風(fēng)濕病、感染、腫瘤、心腦血管疾病等，其中男性36例，女性60例，年齡26～73歲，平均年齡49.9±11.2歲，依據(jù)28個(gè)關(guān)節(jié)疾病活動(dòng)性評(píng)分[5](DAS28評(píng)分)將RA組分為高度活動(dòng)組(DAS28>5.1)32例、中度活動(dòng)組(3.2

1.2 試劑和儀器 人IL-27 ELISA試劑盒購(gòu)自美國(guó)Abcam公司；RT-6000 酶標(biāo)儀購(gòu)自雷杜公司；XN1000五分類血細(xì)胞分析儀及原裝配套試劑(稀釋液、白細(xì)胞分類溶血素、鞘液、清洗液)購(gòu)自日本希森美康公司；魏氏紅細(xì)胞沉降率架及管購(gòu)自東西儀(北京)科技有限公司；Abbott C16000全自動(dòng)生化分析儀、Abbott i2000全自動(dòng)免疫分析儀及RF，抗CCP抗體、hs-CRP原裝試劑購(gòu)自美國(guó)雅培公司。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集：采集所有受試者靜脈血，2 ml置于EDTA-K2抗凝管用于檢測(cè)血細(xì)胞檢測(cè)；2 ml置于枸櫞酸鈉抗凝管用于檢測(cè)ESR；4 ml置于常規(guī)生化管，3 000 r/min離心15 min，收集血清后-80℃冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 檢測(cè)方法：采用ELISA試劑盒檢測(cè)血清IL-27水平，嚴(yán)格按照說明書操作；Sysmex XN1000血細(xì)胞分析儀進(jìn)行血細(xì)胞檢測(cè)，計(jì)算PLR；魏氏法檢測(cè)ESR；透射免疫比濁法檢測(cè)hs-CRP和RF；化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)抗CCP抗體。

2 結(jié)果

2.1 活動(dòng)期RA患者與對(duì)照組血清IL-27水平、PLR值比較 活動(dòng)期RA患者血清IL-27水平、PLR值(17.74±8.58 pg/ml，165.50±39.26)明顯高于對(duì)照組(5.70±1.43 pg/ml，101.49±18.80)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=10.665，9.802，均P=0.000)。

2.2 活動(dòng)期RA患者活動(dòng)度越高，血清IL-27水平、PLR值越高 見圖1。

A：不同活動(dòng)組IL-27水平；B：不同活動(dòng)組PLR水平。

分析發(fā)現(xiàn)，高度活動(dòng)組血清IL-27水平、PLR值明顯高于中度活動(dòng)組及輕度活動(dòng)組(P<0.05)，中度活動(dòng)組IL-27水平、PLR值明顯高于輕度活動(dòng)組(P<0.05)。

2.3 活動(dòng)期RA患者血清IL-27水平和PLR值的相關(guān)性分析 采用Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，活動(dòng)期RA患者血清IL-27水平與PLR值呈顯著正相關(guān)(r2=0.208 8，P=0.000 1)。

2.4 活動(dòng)期RA患者血清IL-27水平、PLR值與ESR，hs-CRP，RF，CCP相關(guān)性分析 見表1。采用Spearman相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，活動(dòng)期RA患者血清IL-27水平、PLR值均與ESR，hs-CRP顯著正相關(guān)，與RF，CCP無明顯相關(guān)性。

表1 活動(dòng)期RA患者血清IL-27水平、PLR值與ESR，hs-CRP，RF，CCP相關(guān)性分析

3 討論

RA作為一種慢性、破壞性、累及多關(guān)節(jié)滑膜炎癥的自身免疫性疾病，其主要表現(xiàn)為關(guān)節(jié)的病變，以及血管翳的形成、皮下結(jié)節(jié)、神經(jīng)性病變和肢體腫脹僵硬等[6]。RA多見于女性，男女比例約為1∶3，30～50歲為發(fā)病高峰，我國(guó)RA患病率為0.33%左右[7]，是發(fā)病率最高的風(fēng)濕免疫性疾病，若不及時(shí)治療，最終將導(dǎo)致關(guān)節(jié)功能障礙甚至殘疾，因此對(duì)RA的早期診斷和病情評(píng)估尤為重要。目前，常用于RA診斷的檢驗(yàn)指標(biāo)中唯一對(duì)RA靈敏度高的RF特異度卻不高，特異度高的抗CCP抗體對(duì)病情檢測(cè)的靈敏度又偏低，為更好反映病情，2010年美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)(American College of Rheumatology，ACR)和歐洲抗風(fēng)濕聯(lián)盟(European League Against Rheumatism，EULAR)制定的RA新診斷標(biāo)準(zhǔn)中引入了CRP和ESR兩種非特異性炎性指標(biāo)來評(píng)估RA病情活動(dòng)性，但這兩種炎性指標(biāo)不但能在RA患者中檢測(cè)出來，也能在其他自身免疫性疾病患者中檢測(cè)出來，并不能準(zhǔn)確地反映RA患者的病情，因此，尋找更合適的評(píng)估指標(biāo)尤為重要。

IL-27是Pflanz在2002年發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子，屬于IL-12 家族[8]，由p28，EBI3(EB病毒誘導(dǎo)基因3)組成的二聚體，最初主要由抗原遞呈細(xì)胞(antigen presenting cell，APC)：樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞等分泌，與眾多自身免疫病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。近年來IL-27與RA的研究陸續(xù)增多，包括動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)，但關(guān)于IL-27在RA中表達(dá)的報(bào)道結(jié)果不盡統(tǒng)一。在RA的膠原誘導(dǎo)性動(dòng)物模型關(guān)節(jié)炎(CIA)中，局部IL-27的表達(dá)既能降低滑膜厚度又可延緩軟骨的破壞[9]。而臨床實(shí)驗(yàn)表明IL-27可通過介導(dǎo)未成熟的T細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化，產(chǎn)生Th1型反應(yīng)并促進(jìn)IFN-γ的產(chǎn)生從而加重RA炎癥反應(yīng)。賴曉霏等[10]的實(shí)驗(yàn)提示 IL-27可能與RA病情變化有關(guān)。但不同活動(dòng)期RA患者IL-27水平與疾病活動(dòng)度的關(guān)系尚未見報(bào)道。

PLR是一種簡(jiǎn)單易得、又同時(shí)把炎癥、免疫及凝血途徑涵蓋在內(nèi)的綜合指標(biāo)。近年來PLR被認(rèn)為是一種全新的反映全身炎癥的生物標(biāo)志物。目前已有研究報(bào)道PLR可能與RA慢性炎癥狀態(tài)相關(guān)[11]。Wang等[12，13]證實(shí)，PLR作為一種簡(jiǎn)單、全面的炎癥指標(biāo)，可在腫瘤治療前有效預(yù)測(cè)腫瘤化療療效，且能夠反映腫瘤患者或慢性炎癥患者體內(nèi)的炎癥狀態(tài)。Salman等[14]研究表明，PLR與中性粒細(xì)胞/淋巴細(xì)胞比率聯(lián)合可判斷潰瘍性結(jié)腸炎病情活動(dòng)度。

本研究檢測(cè)了不同活動(dòng)期RA患者血清IL-27水平、PLR值，發(fā)現(xiàn)和對(duì)照組相比，活動(dòng)期RA患者血清IL-27水平、PLR值均顯著升高，表明IL-27，PLR可能與RA活動(dòng)度相關(guān)。分析不同活動(dòng)期RA患者IL-27水平、PLR值發(fā)現(xiàn)，活動(dòng)度越高，血清IL-27水平、PLR值越高，提示IL-27，PLR可能在RA病情加重過程中起作用。該研究進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)活動(dòng)期RA患者血清IL-27水平與PLR呈顯著正相關(guān)，且血清IL-27水平、PLR均與疾病活動(dòng)度指標(biāo)ESR，hs-CRP呈顯著正相關(guān)，這可提示二者聯(lián)合對(duì)RA病情活動(dòng)性評(píng)估具有潛在價(jià)值。

舒銘等[15]報(bào)道抗CCP抗體與RA的病情嚴(yán)重程度具有明顯相關(guān)性，但本研究中RA血清IL-27水平、PLR與抗CCP抗體均無明顯相關(guān)性，考慮可能與本研究納入的患者例數(shù)較少，研究的樣本量偏少，造成了誤差，需要加大標(biāo)本量進(jìn)一步證實(shí)。

綜上所述，本研究分析了活動(dòng)期RA患者血清IL-27水平、PLR與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疾病活動(dòng)度指標(biāo)的關(guān)系，證明有顯著相關(guān)性，初步提示二者檢測(cè)聯(lián)合可能會(huì)成為評(píng)估RA病情活動(dòng)度的更合適指標(biāo)。但由于本研究標(biāo)本量偏少，存在一些局限性，故有待更多的臨床試驗(yàn)進(jìn)一步探究。