吳 爽，張書婉，張濤元，陳 露，曹三成，李 俏

(1.西安市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，西安 710003；2.日照心臟病醫(yī)院，山東日照 276800)

S100蛋白是一種酸性鈣結(jié)合蛋白，體內(nèi)96%的S100蛋白存在于神經(jīng)系統(tǒng)的雪旺氏細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞及少突膠質(zhì)細(xì)胞，具有高度的中樞特異性，因此血清S100蛋白水平升高，能有效預(yù)示顱腦損傷、出血及缺血性腦卒中、黑色素瘤等[1]。血清S100蛋白參考區(qū)間對上述疾病的診斷療效判斷至關(guān)重要。目前國內(nèi)外暫無統(tǒng)一的血清S100蛋白參考區(qū)間標(biāo)準(zhǔn)，且大多數(shù)參考區(qū)間是以成人為研究對象[2]。但由于兒童血腦屏障并未發(fā)育完整，其血清S100蛋白水平較成人有明顯差異[3]，同時(shí)，不同的檢測系統(tǒng)對參考區(qū)間有著較大影響[4]。因此，針對本實(shí)驗(yàn)室的檢測系統(tǒng)，建立西安地區(qū)0～12歲健康兒童的參考區(qū)間，對提高診斷特異度和靈敏度有著重要的作用。本研究根據(jù)《中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WST-402-2012》文件中所規(guī)定的方法，分析、建立并驗(yàn)證本地區(qū)0～12周歲健康兒童的血清S100蛋白參考區(qū)間[5]，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 材料與方法

1.1 研究對象 收集2018年7月1日起，在西安市兒童醫(yī)院兒?？七M(jìn)行常規(guī)體檢的0～12歲健康兒童(男性78例，女性47例)血清，共125例。依據(jù)《中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WST-402-2012》關(guān)于健康者的要求，所有參與者無黃疸、自身免疫性疾病、肝腎功能不全、惡性黑色素瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變、體檢結(jié)果異常、用藥史等。

1.2 試劑與儀器 使用西安金磁納米生物技術(shù)有限公司的磁定量免疫分析儀及其配套的S100蛋白檢測試劑盒、S100蛋白質(zhì)控卡，基于金磁微粒免疫層析法，嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序，測定血清S100蛋白水平。

1.3 方法

1.3.1 檢測系統(tǒng)性能驗(yàn)證：根據(jù)CLSI-EP9-A2文件要求，對分析系統(tǒng)的批內(nèi)精密度、中間精密度、線性范圍、分析靈敏度等進(jìn)行驗(yàn)證，用于評價(jià)分析系統(tǒng)是否滿足臨床檢測要求。

1.3.2 建立參考區(qū)間：①標(biāo)本采集與檢測：按照說明書要求，采集研究對象血清，用上述儀器及試劑進(jìn)行檢測；②離群值的剔除：采取Dixon法，判斷離群值。D為觀測極值與下一觀測值之間的差值，R為包括極值在內(nèi)的所有觀測值的極差，若D大于或等于極差值的1/3，則可判斷為離群值；③分組：將納入對象按照性別及年齡進(jìn)行初步分組，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法比較組間差異，若差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，則在保證每組標(biāo)本數(shù)為120例的條件下，重新計(jì)算參考區(qū)間；若差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，則無需重新計(jì)算參考區(qū)間；④參考區(qū)間的驗(yàn)證：選取并檢測2018年10月在西安市兒童醫(yī)院兒?？企w檢的健康兒童血清標(biāo)本(符合相應(yīng)的排除標(biāo)準(zhǔn))共20例對參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證，20例測試對象的檢測結(jié)果中，不超過2例數(shù)值位于參考區(qū)間之外，則參考區(qū)間適用。

2 結(jié)果

2.1 分析系統(tǒng)的性能驗(yàn)證 根據(jù)CLSI-EP9-A2文件要求，對分析系統(tǒng)的批內(nèi)精密度、中間精密度、線性范圍、檢出限等進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果顯示，其各項(xiàng)指標(biāo)均符合廠家聲明中給出的性能參數(shù)要求。

2.2 離群值的判斷與剔除 125例數(shù)據(jù)中，最大值為590.92 pg/ml，則D為109.3，R/3為146.47，因此剔除509.92 pg/ml這組數(shù)據(jù)。以此類推，共剔除464.55，465.32，480.79和590.92 pg/ml共四組數(shù)據(jù)，剩余121組有效數(shù)據(jù)被納入。

2.3 血清中S100蛋白水平的數(shù)據(jù)分布分析 對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，其偏度g1為0.700，Sg1為0.220，峰度g2為0.301，Sg2為0.437，U檢驗(yàn)顯示U1>2.58，U2<1.96(P<0.01，P>0.05)，說明血清S100蛋白濃度偏離正態(tài)分布。

2.4 S100蛋白水平在不同性別分組間的數(shù)據(jù)分析 121例健康兒童的血清S100蛋白水平見表1。通過Wilcoxon秩和檢驗(yàn)顯示，不同性別之間，血清S100蛋白水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1 不同性別健康兒童血清S100蛋白水平統(tǒng)計(jì)學(xué)描述(pg/ml)

項(xiàng)目女性(n=45)男性(n=76)全人群(n=121)均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差最小值第25百分位數(shù)中位數(shù)第75百分位數(shù)最大值172.986 043.022 58104.24139.700 0167.070 0203.625 0270.46170.810 546.171 71100.00133.645 0164.505 0197.720 0326.59171.619 644.857 39100.00135.490 0164.700 0200.995 0326.59

2.5 S100蛋白水平在不同年齡分組間的數(shù)據(jù)分析 見表2。將121例健康兒童數(shù)據(jù)按年齡分為三組，Keuskal-WallisH檢驗(yàn)顯示，不同年齡組間數(shù)據(jù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 不同年齡段健康兒童血清S100蛋白水平統(tǒng)計(jì)學(xué)描述(pg/ml)

項(xiàng)目≤1歲(n=32)1歲～3歲(n=31)≥3歲(n=58)均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差最小值第25百分位數(shù)中位數(shù)第75百分位數(shù)最大值170.991 237.045 24111.77145.745 0161.395 0194.987 5326.59183.265 540.468 43111.21154.610 0182.110 0205.400 0270.46165.741 750.186 96100.00120.592 5154.535 0203.522 5285.21

2.6 參考區(qū)間的確立 以非參數(shù)95%百分位數(shù)法計(jì)算血清S100蛋白的參考區(qū)間，0～12歲兒童磁定量免疫層析法檢測血清S100蛋白參考區(qū)間為S100≤270.375 5 pg/ml。

2.7 參考區(qū)間的驗(yàn)證 收集2018年10月在西安市兒童醫(yī)院兒?？企w檢的健康兒童血清共20例，檢測其血清S100蛋白水平，結(jié)果顯示，19例檢測值均在此參考區(qū)間范圍內(nèi)，因此，本研究建立的參考區(qū)間適用于本地區(qū)兒童。

3 討論

S100蛋白主要分布于神經(jīng)系統(tǒng)的雪旺氏細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞、黑色素瘤細(xì)胞及脂肪細(xì)胞中[6，7]。作為一種近年來新興的腦特異性蛋白損傷標(biāo)志物，S100蛋白具有以下特征：①腦組織特異性高；②健康人群血清含量低且穩(wěn)定；③S100蛋白在腦損傷后具有良好的動態(tài)變化規(guī)律；④尿液、血清、腦脊液及羊膜液等均可用于檢測，且性質(zhì)穩(wěn)定，不易降解[8]。因此，血清S100蛋白檢測被廣泛應(yīng)用于腦外傷、缺血性腦卒中、腦出血性疾病及中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的診斷中[9]，同時(shí)S100的動態(tài)變化，對監(jiān)測腦損傷的時(shí)間、范圍和預(yù)后起到了較為重要的作用[10]?；诖耍錝100蛋白參考區(qū)間的確定顯得尤為重要。

目前有研究顯示，血清S100蛋白水平與年齡相關(guān)，是否與性別相關(guān)尚不確定，同時(shí)，其正常范圍尚無統(tǒng)一數(shù)據(jù)[11]。STUDAHL等[12]研究發(fā)現(xiàn)，0～3歲正常嬰幼兒血清S100蛋白濃度與年齡呈負(fù)相關(guān)，新生兒期最高，0～2歲逐漸下降，2～3歲趨于穩(wěn)定，但并未發(fā)現(xiàn)與性別相關(guān)。Portela等[13]研究顯示，新生兒血清S100濃度最高，隨年齡增加而下降，20歲后趨于穩(wěn)定。這些研究均與本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果基本相符。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，西安地區(qū)0～12歲兒童S100蛋白水平為270.375 5 pg/ml，明顯高于本實(shí)驗(yàn)所用的S100蛋白檢測試劑盒說明書提供的成人參考區(qū)間(S100>100 pg/ml)，大大降低了兒童顱腦損傷的誤診率，填補(bǔ)了本地區(qū)血清S100蛋白參考區(qū)間的空缺。但由于難以獲取健康新生兒血液標(biāo)本，因此本實(shí)驗(yàn)并未將新生兒納入研究對象。