周健，楊世穎，靳桂民，張麗，呂揚(yáng)

(北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所晶型藥物研究北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100050)

拉曼光譜法是基于拉曼散射原理[1]的分子振動(dòng)光譜，是研究化合物分子受到光照射后所產(chǎn)生的散射光、入射光的能級(jí)差與化合物振動(dòng)頻率、轉(zhuǎn)動(dòng)頻率相互關(guān)系的分析方法，通過(guò)測(cè)量拉曼散射光中特定譜成分的相對(duì)強(qiáng)弱，可以獲得被測(cè)分子或者體系的相關(guān)信息[2-3]。拉曼光譜技術(shù)以其自身在物質(zhì)定性和定量分析中所顯示出的優(yōu)越性，被廣泛應(yīng)用于藥物、食品、化學(xué)、生物等多個(gè)領(lǐng)域[4-5]。在藥物研究領(lǐng)域，拉曼光譜可用于單一組分的化合物的定性鑒別，也可用于中藥材或藥物制劑等復(fù)雜成分的定性或定量研究[6-10]。拉曼光譜結(jié)合多種化學(xué)計(jì)量法可用于表征未知化合物，確定其成分并獲得有關(guān)其結(jié)構(gòu)的信息，也可實(shí)現(xiàn)定量分析目的[11-13]。此外，拉曼光譜在藥物動(dòng)態(tài)過(guò)程變化的研究中也有較多應(yīng)用，如利用拉曼光譜了解藥物溶出過(guò)程中早期變化[14]；作為過(guò)程分析技術(shù)的研究工具，用于在線(xiàn)測(cè)定藥物活性成分的濃度和聚合物-藥物在藥物熱熔出過(guò)程中的變化[15]。拉曼光譜技術(shù)在藥物逆向工程[16]的研究中也發(fā)揮著重要的作用。

近年來(lái)，隨著科研人員對(duì)拉曼光譜認(rèn)識(shí)的深入以及拉曼光譜儀器發(fā)展的進(jìn)步(分辨率提高等)，拉曼光譜越來(lái)越多地應(yīng)用于藥物不同晶型物質(zhì)間細(xì)微差別的區(qū)分[17]?！稓W洲藥典》[18]、《英國(guó)藥典》[19]、《中華人民共和國(guó)藥典》[20]均已將拉曼光譜技術(shù)列為藥物晶型研究常用的檢測(cè)分析方法。在藥物晶型研究的常用檢測(cè)分析方法中，僅有單晶X射線(xiàn)衍射分析可以提供晶型物質(zhì)全面的定性定量信息，但由于該方法需要得到滿(mǎn)足衍射實(shí)驗(yàn)的單晶體，從而使得其在應(yīng)用上受到一定限制。更多情況下，晶型研究需要采用多種分析方法從不同角度與不同層面共同表征，如粉末X射線(xiàn)衍射方法提供晶型物質(zhì)的分子排列規(guī)律信息，熱分析方法給出不同晶型物質(zhì)的熱力學(xué)差異與含有結(jié)晶水或結(jié)晶溶劑等情況，光譜方法則通過(guò)反映分子基團(tuán)的振動(dòng)差異而在不同晶型物質(zhì)間的分子作用力分析方面具有更多優(yōu)勢(shì)。作為一種光譜學(xué)方法，拉曼光譜技術(shù)在藥物的多晶型研究方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，具體表現(xiàn)在：①拉曼是物質(zhì)的指紋光譜[21]，拉曼光譜技術(shù)以其自身特有的拉曼信號(hào)響應(yīng)，定性角度可以得到物質(zhì)結(jié)構(gòu)、晶型等信息；②雖然拉曼光譜與紅外光譜一樣，反映化合物分子結(jié)構(gòu)中基團(tuán)的振動(dòng)信息，但紅外光譜源于分子偶極距變化，拉曼光譜則由分子極化率變化產(chǎn)生。因此，紅外吸收弱的峰在拉曼光譜中很強(qiáng)，可以與紅外光譜形成有力互補(bǔ)；③拉曼光譜在檢測(cè)低頻振動(dòng)方面具有優(yōu)越性，甚至可檢測(cè)到分子的晶格振動(dòng)；④拉曼光譜譜帶的強(qiáng)度與待測(cè)物濃度的關(guān)系遵守朗伯-比爾定律，可以通過(guò)光譜校正得到濃度的分布，為藥物晶型定量分析提供可行方法；⑤基于拉曼成像技術(shù)的原理，同時(shí)將共聚焦顯微技術(shù)與激光拉曼技術(shù)相結(jié)合，即時(shí)的圖譜結(jié)果可通過(guò)多種數(shù)學(xué)運(yùn)算轉(zhuǎn)換為樣品組分圖像[16]，這一技術(shù)優(yōu)勢(shì)也為運(yùn)用拉曼光譜技術(shù)進(jìn)行多晶型組分定量研究，特別是對(duì)于制劑中晶型問(wèn)題的研究奠定基礎(chǔ)；⑥拉曼光譜技術(shù)無(wú)需樣品制備，屬對(duì)樣品無(wú)損的原位檢測(cè)技術(shù)。鑒于這些獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，拉曼光譜在藥物晶型的研究中日益受到廣泛關(guān)注和應(yīng)用[16，22-24]。筆者在本文聚焦拉曼光譜技術(shù)在藥物晶型研究中的應(yīng)用，對(duì)國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行歸納與總結(jié)，系統(tǒng)綜述拉曼光譜在藥物晶型定性、定量、動(dòng)態(tài)過(guò)程研究中的進(jìn)展，旨在為相關(guān)領(lǐng)域研究人員提供思路與參考。

1 拉曼光譜用于藥物晶型定性研究

藥物的不同晶型物質(zhì)之間具有相同的化合物結(jié)構(gòu)，但是不同晶型物質(zhì)中藥物分子具有不同的分子排列規(guī)律、分子構(gòu)型構(gòu)象或不同的結(jié)晶溶劑種類(lèi)與數(shù)量，由此具有不同的分子內(nèi)或分子間作用力，這些晶型間的差異反映在拉曼光譜中，往往體現(xiàn)在圖譜的峰數(shù)量或峰裂分、峰位置以及峰強(qiáng)度或峰形拓?fù)涞确矫妗?/p>

楊梁等[25]在對(duì)鹽酸林可霉素兩種晶型進(jìn)行單晶X衍射分析的基礎(chǔ)上，開(kāi)展該兩種晶型中不同的分子構(gòu)象對(duì)兩種單晶拉曼光譜行為影響的研究。通過(guò)對(duì)比分析可發(fā)現(xiàn)，林可霉素兩種晶型的拉曼光譜圖譜存在的主要區(qū)別在于，晶型Ⅰ在1667 cm-1處有1個(gè)明銳的的散射峰；晶型Ⅱ在相同的位置則分裂為1687 cm-1和1667 cm-1處的2個(gè)毗鄰相連的散射峰；晶型Ⅰ在1151 cm-1和1143 cm-1處頂部分裂為2個(gè)散射峰；晶型Ⅱ在1146 cm-1處的散射峰則為頂部形成平臺(tái)的單峰。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明不同晶型在拉曼圖譜中特征峰的裂分行為也可以作為定性區(qū)分的依據(jù)。同時(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在已知單晶結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，拉曼光譜給出的信息可以更準(zhǔn)確地確定分子結(jié)構(gòu)中相關(guān)特征基團(tuán)及晶體結(jié)構(gòu)中氫鍵的振動(dòng)信息。

拉米夫定(lamivudine) 是臨床上用于治療乙型肝炎和艾滋病的核苷類(lèi)藥物，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，拉米夫定有兩種晶型，晶型Ⅱ流動(dòng)性好，且在水中的溶解度高于晶型Ⅰ，為藥用晶型。葉曉霞等[22]以拉米夫定中的雜質(zhì)晶型——晶型Ⅰ為分析目標(biāo)，探討晶型藥物中雜質(zhì)晶型的定量測(cè)定方法的過(guò)程中，通過(guò)拉曼光譜對(duì)拉米夫定的兩種晶型進(jìn)行有效的區(qū)分。通過(guò)拉曼圖譜的對(duì)比分析，發(fā)現(xiàn)在掃描范圍3500～200 cm-1內(nèi)，晶型Ⅰ在697和312 cm-1有明顯的散射峰，晶型Ⅱ在916和851 cm-1有明顯的散射峰。在利用拉曼光譜對(duì)拉米夫定的兩種晶型進(jìn)行定性區(qū)分的實(shí)驗(yàn)中，兩種晶型特征峰位置的不同成為定性鑒別的主要依據(jù)。

尼莫地平是臨床應(yīng)用廣泛的鈣通道阻滯劑類(lèi)降壓藥。焦凌泰等[26]通過(guò)快速去溶劑法制備尼莫地平A、B兩種晶型。對(duì)兩種晶型的樣品進(jìn)行拉曼光譜分析。對(duì)得到的拉曼圖譜進(jìn)行分析比較，發(fā)現(xiàn)兩種晶型樣品在4000～200 cm-1內(nèi)，主要區(qū)別在于2種晶型在部分峰強(qiáng)度上存在差異，其中在1352 cm-1處主強(qiáng)峰和1645 cm-1處的次強(qiáng)峰的峰強(qiáng)度之比，晶A型兩個(gè)強(qiáng)峰強(qiáng)度之比為10 192：10 174，晶B型的強(qiáng)峰比次強(qiáng)峰峰強(qiáng)度之比為8274：6411。根據(jù)峰強(qiáng)度不同，可有效鑒別尼莫地平兩種晶型。

拉曼光譜技術(shù)除了對(duì)原料藥的不同晶型實(shí)現(xiàn)定性研究，也可用于對(duì)片劑中藥物活性成分的不同晶型進(jìn)行定性研究。西尼地平是一種新型二氫吡啶(dihydropyridine，DHP)類(lèi)鈣通道拮抗藥，具有長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)擴(kuò)張血管的作用。石云峰等[27]對(duì)制得的西尼地平α和β兩種晶型進(jìn)行拉曼光譜檢測(cè)，通過(guò)觀(guān)察圖譜可發(fā)現(xiàn)西尼地平α晶型和β晶型的拉曼峰有差異。此外，通過(guò)隨機(jī)取點(diǎn)進(jìn)行面和深度掃描，對(duì)三家企業(yè)的市售西尼地平片和原研企業(yè)的西尼地平片進(jìn)行拉曼光譜檢測(cè)，初步判定四種片劑中西尼地平存在的晶型狀態(tài)。

楊偉峰等[28]通過(guò)拉曼光譜技術(shù)對(duì)硫酸氫氯吡格雷原料藥和對(duì)照品進(jìn)行表征，并得到兩種晶型的拉曼對(duì)照?qǐng)D譜。隨后通過(guò)拉曼光譜對(duì)來(lái)自11個(gè)廠(chǎng)家的硫酸氫氯吡格雷片進(jìn)行表征，用OPUS軟件聚類(lèi)分析法判別出國(guó)內(nèi)外不同廠(chǎng)家硫酸氫氯吡格雷片的晶型，再通過(guò)建立定性鑒別模型鑒別未知樣品。聚類(lèi)分析結(jié)果表明8批硫酸氫氯吡格雷片均屬于晶型Ⅰ，3批硫酸氫氯吡格雷片均屬于晶型Ⅱ，采用一階導(dǎo)數(shù)法和矢量歸一化法處理圖譜，用因子分析法計(jì)算，選擇500～743、900～1000、1400～1650 cm-1譜段建立定性模型，經(jīng)驗(yàn)證，該模型的靈敏度、專(zhuān)屬性、陰性預(yù)報(bào)性和檢出效率均良好。石云峰等[29]采用相似的方法對(duì)卡馬西平4種晶型，進(jìn)行拉曼光譜表征，并建立定性鑒別模型，對(duì)4批卡馬西平片劑中晶型種類(lèi)實(shí)現(xiàn)的檢測(cè)。

除了上述利用拉曼光譜技術(shù)對(duì)片劑中藥物活性成分的不同晶型進(jìn)行定性研究，拉曼光譜也可以用來(lái)對(duì)藥物中API的晶態(tài)和無(wú)定形實(shí)現(xiàn)定性檢測(cè)。NAKAMOTO等[30]選用乙琥胺(ESM)被選作模型制劑的API。固態(tài)乙琥胺通過(guò)加熱熔化和吸附在水合二氧化硅上來(lái)實(shí)現(xiàn)從晶態(tài)到無(wú)定形的轉(zhuǎn)變。將這一過(guò)程作為模型，通過(guò)拉曼微光譜的對(duì)樣品中晶態(tài)和無(wú)定形的分布完成檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，拉曼光譜特征峰值的差異可用來(lái)確認(rèn)兩種形式的乙琥胺，同時(shí)還證實(shí)拉曼微光譜可用于在固體制劑表面表征晶態(tài)和無(wú)定形。

2 拉曼光譜用于藥物晶型定量研究

近年來(lái)，隨著拉曼光譜技術(shù)的探索不斷深入，拉曼光譜在藥物晶型中的應(yīng)用也從定性鑒別逐步擴(kuò)大到多元晶型混合物定量研究。利用拉曼光譜對(duì)多元晶型混合物進(jìn)行定量，主要通過(guò)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)方法進(jìn)行。

墨玉欣[31]通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)建立的方法，利用在線(xiàn)拉曼光譜技術(shù)對(duì)L-谷氨酸水溶液及兩種混合晶型的懸濁液實(shí)現(xiàn)定量分析。將兩種晶型物質(zhì)采用等量倍增法混勻，制成分別含晶型Ⅰ 0%，5%，10%，30%，50%，75%，90%和100%的線(xiàn)性混合物。分別測(cè)定線(xiàn)性混合物的拉曼光譜，以強(qiáng)度比值為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得線(xiàn)性方程。

拉曼光譜結(jié)合多種化學(xué)計(jì)量學(xué)的方法可以對(duì)研究對(duì)象實(shí)現(xiàn)較好的定量研究，常用的方法包括主成分分析(PCA)，聚類(lèi)分析，直接經(jīng)典最小二乘法(DCLS)和多變量分析曲線(xiàn)分辨率(MCR)等[32-34]。在對(duì)多元晶型混合物的定量中，偏最小二乘法(PLS)和主成分回歸(PCR)分析法的應(yīng)用最為廣泛。STRACHAN等[35]和MARCO等[36]均以卡馬西平為例，對(duì)其多晶型混合物進(jìn)行定量分析。前者利用拉曼光譜結(jié)合PLS和PCR對(duì)卡馬西平多晶型混合物進(jìn)行定量分析，研究結(jié)果表明，拉曼光譜數(shù)據(jù)的PLS和PCR為多晶型的定量分析提供一種靈敏的方法，LD通常<1%。后者則利用拉曼光譜結(jié)合PLS完成了對(duì)卡馬西平三元晶型混合物的定量檢測(cè)，使用平均光譜來(lái)建立校準(zhǔn)模型，并使用額外的樣品組來(lái)評(píng)估模型，PLS模型給出預(yù)測(cè)的均方根誤差為6.2%。LI等[37]對(duì)磺胺甲嘧啶(SMZ)二元多晶型混合物中的雜質(zhì)晶型進(jìn)行定量測(cè)定，運(yùn)用PLS回歸來(lái)對(duì)收集到的SMZ兩種晶型混合物的拉曼光譜建立標(biāo)準(zhǔn)校正模型。HU等[38]通過(guò)使用拉曼光譜聯(lián)合衰減全反射-紅外光譜(ATR-IR)和近紅外光譜(NIR)，并結(jié)合PLS完成了對(duì)磺胺噻唑3種晶型混合物的定量分析。KACHRIMANIS等[39]通過(guò)拉曼光譜結(jié)合PLS回歸分析方法對(duì)撲熱息痛的多晶型混合物實(shí)現(xiàn)了定量，特別要提到的是，該實(shí)驗(yàn)采用3種不同的預(yù)處理算法，即正交信號(hào)校正(OSC)，標(biāo)準(zhǔn)正常變量變換(SNV)和乘法散射校正(MSC)以消除由樣品制備和樣品不均勻性引起的影響。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)經(jīng)過(guò)OSC算法預(yù)處理后得到的光譜，可以得到具有出色預(yù)測(cè)性能且更為簡(jiǎn)單的PLS模型。NéMET等[40]利用拉曼光譜技術(shù)結(jié)合經(jīng)典最小二乘(CLS)，主成分回歸(PCR)和PLS法在不同光譜范圍下，通過(guò)不同路徑長(zhǎng)度類(lèi)型和光譜預(yù)處理步驟對(duì)法莫替丁的多晶型混合物進(jìn)行了測(cè)試，同時(shí)還對(duì)比在該項(xiàng)檢測(cè)中拉曼光譜技術(shù)相較PXRD所表現(xiàn)出來(lái)的優(yōu)勢(shì)。

利用拉曼光譜結(jié)合化學(xué)計(jì)量法作為研究手段，LIPIAINEN等[41]采用吡羅昔康作為研究對(duì)象，對(duì)比低頻和中頻拉曼光譜在藥物晶型定量中的檢測(cè)能力。吡羅昔康多晶型和水合物在低頻和中頻區(qū)域中都顯示出明顯的光譜差異。在低頻和中頻拉曼光譜中，兩個(gè)特征區(qū)域都提供了適合結(jié)合PLS來(lái)預(yù)測(cè)混合物組成的定量模型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，低頻數(shù)據(jù)給出更好的定量模型，低頻拉曼分析的更好性能歸因于固態(tài)形式之間較大的光譜差異和較高的信噪比。

除了可以開(kāi)展對(duì)混晶物質(zhì)的晶型定量研究外，拉曼光譜技術(shù)也可以用于對(duì)制劑中藥物活性成分的晶型定量。阿托伐他汀鈣(atorvastatin calcium，ATC)是最暢銷(xiāo)的降脂制劑Lipitor?的活性藥物成分(active pharmaceutical ingredient，API)。據(jù)報(bào)道ATC現(xiàn)存在12種晶型。SKORDA等[42]利用拉曼光譜技術(shù)對(duì)ATC片劑中晶型Ⅷ進(jìn)行定量，選擇1602 cm-1作為合適片劑ATC峰值，對(duì)于賦形劑使用359 cm-1。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與紅外光譜和X射線(xiàn)粉末衍射定量相比，拉曼光譜表現(xiàn)出更低的檢測(cè)限，并構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)模型。HENNIGAN等[43]通過(guò)拉曼光譜技術(shù)結(jié)合化學(xué)計(jì)量法，并通過(guò)了MSC和Savitzky-Golay二階導(dǎo)數(shù)組合的方法對(duì)光譜圖進(jìn)行預(yù)處理，最后成功對(duì)吡拉西坦片劑中雜質(zhì)晶型的含量實(shí)現(xiàn)測(cè)定。PRATIWI等[44]將拉曼光譜的主成分分析方法(PCA)應(yīng)用于兩種多晶型物質(zhì)所組成的二元混合物的定量檢測(cè)中。實(shí)驗(yàn)以鹽酸雷尼替丁的晶型Ⅰ和晶型Ⅱ?yàn)檠芯繉?duì)象，通過(guò)將一種晶型添加到另一種晶型的粉末片劑中而制備二元混合物。再通過(guò)多元線(xiàn)性回歸預(yù)測(cè)二元混合物中兩種晶型的定量限和檢測(cè)限來(lái)建立定量校準(zhǔn)模型。研究表明拉曼光譜數(shù)據(jù)的PCA分析為定量分析商品片劑中藥物多晶型雜質(zhì)，提供一種靈敏的方法。

3 拉曼光譜用于藥物晶型動(dòng)態(tài)過(guò)程分析

在藥物晶型問(wèn)題的研究中，拉曼光譜除了可對(duì)藥物晶型進(jìn)行定性與定量分析，利用其分析藥物晶型的動(dòng)態(tài)過(guò)程問(wèn)題也成為時(shí)下研究的一大熱點(diǎn)。一方面拉曼光譜是研究晶型動(dòng)態(tài)轉(zhuǎn)化的有力手段，另一方面在過(guò)程控制中該項(xiàng)技術(shù)有應(yīng)用優(yōu)勢(shì)。在科研與生產(chǎn)中常用到的藥物晶型動(dòng)態(tài)過(guò)程分析的方法主要有[45]：在線(xiàn)紅外技術(shù)、在線(xiàn)太赫茲技術(shù)、在線(xiàn)粉末X射線(xiàn)衍射技術(shù)以及熱臺(tái)偏光顯微鏡等。而拉曼光譜技術(shù)在其中受到大家廣泛關(guān)注，主要在于大多數(shù)有機(jī)物都具備很好的拉曼吸收光譜，拉曼光譜適用于水溶液體系，分辨率更高。但是應(yīng)用拉曼光譜技術(shù)在對(duì)藥物晶型動(dòng)態(tài)過(guò)程進(jìn)行研究的時(shí)候，會(huì)出現(xiàn)由于溶劑的拉曼散射很強(qiáng)，很難從光譜數(shù)據(jù)中得出原料藥的拉曼光譜等問(wèn)題。這也提示在研究過(guò)程中應(yīng)注意對(duì)方法進(jìn)行合理的調(diào)整[45]。

在利用拉曼光譜對(duì)晶型轉(zhuǎn)變過(guò)程的動(dòng)態(tài)研究的實(shí)踐中，張慧麗等[46]利用拉曼光譜技術(shù)完成了對(duì)拉米夫定水合晶型在加熱過(guò)程中因失水而導(dǎo)致晶型轉(zhuǎn)變的動(dòng)態(tài)特性研究，選取在(91±1)℃下對(duì)拉米夫定水合晶型的加熱脫水過(guò)程進(jìn)行研究。對(duì)得到的拉曼光譜圖進(jìn)行分析，得到特征峰面積隨時(shí)間變化的關(guān)系，結(jié)果表明在加熱過(guò)程中水合晶型的消失與無(wú)水晶型的形成的速率保持一致。TIAN等[47]利用拉曼光譜技術(shù)，對(duì)水性環(huán)境下卡馬西平3種晶型和晶Ⅰ、晶Ⅲ型混合物轉(zhuǎn)化為二水合物過(guò)程中的轉(zhuǎn)化動(dòng)力學(xué)進(jìn)行表征。樣品在(23±1)℃下分散在水中，并在10～210 min于不同時(shí)間點(diǎn)下進(jìn)行回收。利用拉曼光譜結(jié)合定量模型得到的結(jié)果表明，水性環(huán)境下卡馬西平多晶型向二水合物的轉(zhuǎn)化。上述兩例均為應(yīng)用拉曼光譜技術(shù)研究藥物晶型轉(zhuǎn)變的過(guò)程動(dòng)力學(xué)問(wèn)題提供參考依據(jù)。

拉曼光譜技術(shù)較多應(yīng)用于在線(xiàn)過(guò)程分析。結(jié)晶工藝是藥物分離與精制的關(guān)鍵技術(shù)[45]，過(guò)程分析技術(shù)對(duì)于藥物結(jié)晶過(guò)程的分析與控制提供了巨大的幫助。利用在線(xiàn)拉曼技術(shù)對(duì)藥物的結(jié)晶進(jìn)行過(guò)程控制，也以其自身的優(yōu)勢(shì)受到日益廣泛的應(yīng)用。由于水分的紅外吸收強(qiáng)，而拉曼吸收弱，因此拉曼光譜適用于檢測(cè)溶液結(jié)晶的過(guò)程。HU等[48]利用在線(xiàn)拉曼技術(shù)對(duì)氟滅酸多晶型的轉(zhuǎn)晶溫度進(jìn)行測(cè)定。

4 結(jié)束語(yǔ)

值得注意的是，拉曼光譜技術(shù)在藥物晶型研究中，除了上述優(yōu)點(diǎn)和適用性，也存在一些固有的缺點(diǎn)。①對(duì)于不同的晶型藥物品種，拉曼光譜并非全部特征有效，即便不同晶型物質(zhì)間的拉曼光譜存在差異，這種差異也有可能十分微小。如曹俊姿等[49]在對(duì)左炔諾孕酮進(jìn)行優(yōu)勢(shì)藥用晶型研究的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)左炔諾孕酮3種晶型的拉曼光譜圖譜基本相似，無(wú)法對(duì)其進(jìn)行明顯區(qū)分；張倩芝[50]在對(duì)治療十二指腸潰瘍藥物艾普拉唑的兩種晶型進(jìn)行拉曼測(cè)試后，發(fā)現(xiàn)兩者拉曼光譜圖差異較小，建議應(yīng)結(jié)合紅外光譜對(duì)兩種晶型進(jìn)行鑒別。當(dāng)藥物不同晶型的拉曼光譜差異較小時(shí)，嘗試可以達(dá)到更高分辨率的儀器或測(cè)試條件是行之有效的方法。②熒光效應(yīng)的產(chǎn)生是利用拉曼光譜對(duì)藥物晶型進(jìn)行研究時(shí)一個(gè)重要的干擾因素，對(duì)于棉酚等容易產(chǎn)生強(qiáng)烈熒光背底的物質(zhì)，需要合理選擇激光波長(zhǎng)進(jìn)行晶型行分析[18]。因此，當(dāng)采用拉曼光譜對(duì)藥物晶型進(jìn)行定性研究，品種的特異性、儀器的分辨率以及測(cè)試條件的選擇往往是決定拉曼光譜是否能夠?qū)崿F(xiàn)有效檢測(cè)的重要因素。

雖然拉曼光譜技術(shù)仍然具有一定的局限性，但在藥物晶型問(wèn)題的研究上還是表現(xiàn)出巨大的潛力，為藥物晶型問(wèn)題的研究提供更為廣闊的思路和角度。特別是隨著人們對(duì)于拉曼技術(shù)認(rèn)識(shí)的加深，多種類(lèi)型拉曼光譜儀的問(wèn)世，在線(xiàn)拉曼光譜技術(shù)的逐步成熟，相信拉曼光譜技術(shù)會(huì)在該領(lǐng)域發(fā)揮出越來(lái)越重要的作用。