宋翠豪 王睿 陳雙景 鄭力強(qiáng) 趙梓綱 楊京潤 李承新

1解放軍總醫(yī)院皮膚科，北京 100853；2軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院輻射醫(yī)學(xué)研究所放射生物學(xué)研究室，北京 100850

二甲雙胍作為一種胰島素增敏劑，廣泛應(yīng)用于2型糖尿病的治療。近年來的研究表明，二甲雙胍能抑制乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌等多種腫瘤細(xì)胞的生長，其機(jī)制可能與抑制腫瘤細(xì)胞的過度增殖和促進(jìn)細(xì)胞凋亡有關(guān)［1-2］。銀屑病和惡性腫瘤都具有特征性的細(xì)胞過度增殖。角質(zhì)形成細(xì)胞的過度增殖、分化不全、炎性細(xì)胞的浸潤是銀屑病的重要特征［3］。本文主要研究二甲雙胍對角質(zhì)形成細(xì)胞增殖、分化、炎癥因子分泌等的影響，并探討其機(jī)制，為二甲雙胍應(yīng)用于銀屑病的治療提供依據(jù)。

材料與方法

一、細(xì)胞來源及主要試劑

HaCaT細(xì)胞系（上海復(fù)祥生物科技有限公司）。二甲雙胍（美國Sigma公司），Dulbecco改良Eagle高糖培養(yǎng)基（DMEM，美國Gibco公司），胎牛血清（美國Excel公司），膜聯(lián)蛋白（Annexin）Ⅴ-FITC/碘化丙錠（PI）凋亡試劑盒（北京嘉美生物技術(shù)公司），細(xì)胞周期檢測試劑盒（北京索萊寶科技有限公司）；人白細(xì)胞介素8（IL-8）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測試劑盒、人腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA檢測試劑盒、人白細(xì)胞介素23（IL-23）ELISA檢測試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）；鼠抗人GAPDH單克隆抗體（天津三箭生物技術(shù)有限公司）；兔抗人角蛋白1多克隆抗體、兔抗人內(nèi)披蛋白單克隆抗體、兔抗人角蛋白16單克隆抗體、兔抗人Bcl-2單克隆抗體（美國Abcam公司）；兔抗人角蛋白17單克隆抗體、兔抗人信號傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子3（STAT3）分子單克隆抗體、兔抗人蛋白激酶B（AKT）分子單克隆抗體、兔抗人哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）分子單克隆抗體、兔抗人Bax單克隆抗體、兔抗人磷酸化信號傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子3（p-STAT3）分子單克隆抗體、兔抗人磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）分子單克隆抗體、兔抗人磷酸化哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）分子單克隆抗體、辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔二抗、辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗鼠二抗（美國CST公司）；BCA蛋白定量試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司），CCK8試劑盒（日本同仁化學(xué)試劑公司）。

二、方法

1.細(xì)胞培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)觀察：采用含10%胎牛血清、1%青霉素及鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)HaCaT細(xì)胞，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中。二甲雙胍以磷酸鹽緩沖液（PBS）配置成1 mol/L儲(chǔ)存液，于-20℃保存。含10%胎牛血清、1%青霉素及鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基分別將二甲雙胍稀釋至0.5、1、2、5、10、20、25、50、100 mmol/L。細(xì)胞以1×106個(gè)/ml接種于6孔板，待細(xì)胞生長至6孔板底70%時(shí)，加入0、25、50、100 mmol/L二甲雙胍培養(yǎng)液培養(yǎng)48 h，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。

2.CCK8法檢測HaCaT細(xì)胞存活率：細(xì)胞以1×103個(gè)/ml接種于96孔板，分別加入含1、2、5、10、20、50 mmol/L二甲雙胍培養(yǎng)液，同時(shí)設(shè)對照組（不加二甲雙胍，僅加入含10%胎牛血清、1%青霉素及鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基），空白組（不加二甲雙胍及細(xì)胞，僅加入含10%胎牛血清、1%青霉素及鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基），每孔設(shè)5個(gè)復(fù)孔。分別培養(yǎng)至24、48、72 h后，每孔加入CCK8試劑10μl，于培養(yǎng)箱中孵育2 h。酶標(biāo)儀測定450 nm波長處各孔吸光度（A值），實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取均值。細(xì)胞存活率（%）=（實(shí)驗(yàn)孔A值-空白孔A值）/（對照孔A值-空白孔A值）×100%。

3.流式細(xì)胞儀檢測：分別加入0、0.5、1、2、5、10 mmol/L二甲雙胍工作液培養(yǎng)HaCaT細(xì)胞48 h，收集細(xì)胞，①細(xì)胞周期檢測：加入含10%胎牛血清的PBS溶液300μl，將細(xì)胞沉淀制成單細(xì)胞懸液后，加700μl無水乙醇，-20℃固定24 h，離心，PBS洗滌細(xì)胞，染色，上機(jī)檢測各組細(xì)胞周期分布；②細(xì)胞凋亡檢測：加入1×結(jié)合緩沖液300μl懸浮細(xì)胞，再加入Annexin V-FITC 5μl混勻，避光，室溫孵育15 min，上機(jī)前5 min加入PI染液5μl，分析各組細(xì)胞凋亡率。

4.ELISA檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-8、TNF-α、IL-23含量：分別加入0、0.5、1、2、5、10 mmol/L二甲雙胍工作液培養(yǎng)HaCaT細(xì)胞48 h后，收集細(xì)胞上清液，按ELISA試劑盒說明檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-8、TNF-α、IL-23蛋白含量。

5.Western印跡法檢測細(xì)胞增殖分化和凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)：分別加入0、0.5、1、2、5、10 mmol/L二甲雙胍工作液培養(yǎng)HaCaT細(xì)胞48 h后，收集細(xì)胞，加入含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的裂解液提取總蛋白，用BCA法檢測蛋白濃度，上樣量為30μg，電泳，轉(zhuǎn)膜，封閉，孵育一抗，置于4℃冰箱過夜。洗膜，孵育二抗，洗膜，顯影。采用ImageJ 6.0圖像分析軟件分析條帶灰度值，細(xì)胞增殖分化相關(guān)蛋白角蛋白16、角蛋白17、角蛋白1、內(nèi)披蛋白和細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、AKT、mTOR、STAT3、p-AKT、p-mTOR、p-STAT3的目的蛋白條帶與相應(yīng)的內(nèi)參照GAPDH條帶的灰度值比值作為其蛋白表達(dá)的半定量指標(biāo)。

6.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS19.0軟件，計(jì)量資料以±s表示，不同濃度組間觀察指標(biāo)的變化采用單因素方差分析，不同時(shí)間和濃度組間比較采用重復(fù)測量的方差分析，兩兩多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

結(jié) 果

一、常規(guī)細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變和細(xì)胞活力分析

正常培養(yǎng)的HaCaT細(xì)胞生長至48 h時(shí)，形態(tài)規(guī)則，大小均勻，透亮度好，邊界清楚，細(xì)胞之間排列較為緊密。而25、50、100 mol/L二甲雙胍干預(yù)培養(yǎng)HaCaT細(xì)胞48 h時(shí)，細(xì)胞形態(tài)變得不規(guī)則，細(xì)胞間連接不緊密，細(xì)胞數(shù)量減少，培養(yǎng)液中細(xì)胞碎片增多，且隨藥物濃度增加細(xì)胞形態(tài)改變更加明顯。見圖1。

圖1 倒置顯微鏡下觀察不同濃度二甲雙胍干預(yù)48 h對HaCaT細(xì)胞形態(tài)的影響（圖中標(biāo)尺=50μm）二甲雙胍干預(yù)后，細(xì)胞形態(tài)變得不規(guī)則，細(xì)胞間粘附性變差，連接不緊密，細(xì)胞數(shù)量減少，培養(yǎng)液中細(xì)胞碎片增多，細(xì)胞形態(tài)改變隨藥物濃度增加更加明顯

CCK8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，二甲雙胍對HaCaT細(xì)胞增殖有抑制作用。重復(fù)測量的方差分析顯示，1、2、5、10、20、50 mmol/L二甲雙胍對HaCaT細(xì)胞存活率均有抑制作用（F濃度=116.87，P＜0.05），濃度越高，抑制作用越強(qiáng)；各組HaCaT細(xì)胞存活率有隨時(shí)間變化的趨勢（F時(shí)間=9.01，P＜0.05），48和72 h細(xì)胞存活率均低于24 h（P＜0.05），而48與72 h差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；藥物濃度與時(shí)間有交互作用（F=8.12，P＜0.05），各組HaCaT細(xì)胞存活率隨時(shí)間變化的趨勢不同。見圖2。

圖2 不同濃度二甲雙胍對HaCaT細(xì)胞存活率的影響隨著二甲雙胍濃度增加，細(xì)胞存活率逐漸降低

二、流式細(xì)胞儀檢測二甲雙胍干預(yù)后細(xì)胞周期的變化

0、0.5、1、2、5、10 mmol/L二甲雙胍干預(yù)HaCaT細(xì)胞48 h后，G2/M期比例分別為（5.55±1.03）%、（6.37±0.93）%、（8.57±1.18）%、（10.05±0.60）%、（10.76±0.87）%、（13.63±1.41）%，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=24.98，P＜0.05）；兩兩多重比較顯示，1、2、5、10 mmol/L二甲雙胍組G2/M期比例均顯著高于對照組（均P＜0.05）；0.5 mmol/L組與對照組、1與2 mmol/L組、2與5 mmol/L組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，余各濃度組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖3。

圖3 不同濃度二甲雙胍干預(yù)HaCaT細(xì)胞48 h對其細(xì)胞周期的影響隨著二甲雙胍濃度增加，G2/M期細(xì)胞比例升高

0、0.5、1、2、5、10 mmol/L二甲雙胍組早期細(xì)胞凋亡率分別為（0.78±0.71）%、（19.18±1.41）%、（25.67±1.34）%、（28.45±0.92）%、（34.97±2.12）%、（40.41±1.49）%，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=296.08，P＜0.05）。兩兩多重比較顯示，各濃度組細(xì)胞早期凋亡率均顯著高于對照組（均P＜0.05），各濃度組間差異亦均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見圖4。

圖4 不同濃度二甲雙胍干預(yù)48 h對HaCaT細(xì)胞凋亡的影響隨著二甲雙胍濃度增加，早期細(xì)胞凋亡率升高

三、二甲雙胍對HaCaT細(xì)胞內(nèi)披蛋白、角蛋白1、角蛋白16、角蛋白17、Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)的影響

Western印跡顯示，二甲雙胍干預(yù)HaCaT細(xì)胞48 h后，隨二甲雙胍濃度的增加，角蛋白1、Bax蛋白表達(dá)呈上升趨勢（均P＜0.05），角蛋白16、角蛋白17、Bcl-2蛋白表達(dá)呈下降趨勢（均P＜0.05），但內(nèi)披蛋白的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與對照組相比，2、5、10 mmol/L組角蛋白1、Bax蛋白表達(dá)明顯增加，角蛋白16、Bcl-2蛋白表達(dá)明顯降低（均P＜0.05）。5、10 mmol/L組角蛋白16表達(dá)顯著低于2 mmol組（P＜0.05）。隨二甲雙胍濃度增加，角蛋白17表達(dá)也呈一定的下降趨勢，但僅10 mmol/L組顯著低于對照組（P＜0.05），其余各組與對照組相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見圖5、表1。

圖5 不同濃度二甲雙胍干預(yù)HaCaT細(xì)胞48 h對內(nèi)披蛋白、角蛋白1、角蛋白16、角蛋白17、Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)的影響1：對照組；2～6：分別為0.5、1、2、5、10 mmol/L二甲雙胍組。隨二甲雙胍濃度增加，角蛋白1、Bax蛋白表達(dá)逐漸增加，角蛋白16、角蛋白17、Bcl-2蛋白表達(dá)逐漸降低，但各組內(nèi)披蛋白的表達(dá)無明顯差異

表1 二甲雙胍作用HaCaT細(xì)胞48 h內(nèi)披蛋白、角蛋白1、角蛋白16、角蛋白17、Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)水平（與GAPDH條帶灰度值的比值）比較（±s）

表1 二甲雙胍作用HaCaT細(xì)胞48 h內(nèi)披蛋白、角蛋白1、角蛋白16、角蛋白17、Bax、Bcl-2蛋白表達(dá)水平（與GAPDH條帶灰度值的比值）比較（±s）

注：n=3。a與2 mmol/L組相比，P＜0.05；b與5 mmol/L組相比，P＜0.05；c與對照組比，P＜0.05；d與0.5 mmol/L組相比，P＜0.05；e與1 mmol/L組相比，P＜0.05

二甲雙胍濃度0（對照組）0.5 mmol/L 1 mmol/L 2 mmol/L 5 mmol/L 10 mmol/L F值P值內(nèi)披蛋白0.82±0.25 0.71±0.17 0.71±0.27 0.61±0.14 0.55±0.01 0.61±0.09 0.57 0.72角蛋白1 0.09±0.08a b 0.30±0.12a b 0.44±0.18b 0.73±0.27c d 0.87±0.32c d e 0.97±0.12c d e 8.86＜0.01角蛋白16 1.16±0.08a b 0.99±0.33b 0.97±0.08b 0.80±0.14c 0.63±0.18a c d e 0.51±0.06a c d e 8.02＜0.01角蛋白17 0.61±0.17 0.57±0.14 0.63±0.15 0.60±0.14 0.55±0.13d 0.16±0.12a b c d e 4.82 0.01 Bax 0.18±0.05a b 0.19±0.04a b 0.38±0.11 0.47±0.15c d 0.58±0.16c d 0.57±0.08c d 5.38 0.03 Bcl-2 0.67±0.14a b 0.56±0.07a b 0.56±0.06a 0.31±0.03c d e 0.16±0.14c d e 0.11±0.18c d e 12.10＜0.01

四、二甲雙胍對HaCaT細(xì)胞炎癥因子分泌影響

與對照組相比，不同濃度二甲雙胍干預(yù)HaCaT細(xì)胞48 h能顯著降低IL-8、TNF-α的分泌（F=33.89、14.99，均P＜0.05），但對IL-23的抑制作用不明顯，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2.12，P＞0.05）。

兩兩多重比較顯示，除0.5 mmol/L二甲雙胍組，各濃度二甲雙胍組IL-8表達(dá)水平均顯著低于對照組（均P＜0.05），1與2 mmol/L組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），余各濃度組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

與對照組相比，各濃度組TNF-α表達(dá)水平明顯下降（均P＜0.05），但各濃度組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。見圖6。

圖6 不同濃度二甲雙胍干預(yù)48 h后對HaCaT細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素8（IL-8）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）、IL-23水平的影響a：P＜0.05；b：P＞0.05

五、二甲雙胍抑制HaCaT細(xì)胞AKT、mTOR、STAT3蛋白磷酸化

Western印跡顯示，二甲雙胍干預(yù)HaCaT細(xì)胞48 h后，與對照組相比，隨二甲雙胍濃度增加，p-AKT、p-mTOR、p-STAT3表達(dá)水平呈下降趨勢（F=11.38、0.35、4.38，均P＜0.05），而各濃度組間AKT、mTOR、STAT3蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=0.66、0.35、4.24，均P＞0.05）。兩兩多重比較顯示，2、5、10 mmol/L二甲雙胍組p-AKT、p-mTOR、p-STAT3表達(dá)水平明顯低于對照組（均P＜0.05），而2、5、10 mmol/L各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。0.5、1 mmol/L組與對照組間p-AKT、pmTOR、p-STAT3表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2、圖7。

表2 二甲雙胍作用HaCaT細(xì)胞48 h后p-AKT、AKT、p-STAT3、STAT3、p-mTOR、mTOR蛋白相對表達(dá)水平（±s）

表2 二甲雙胍作用HaCaT細(xì)胞48 h后p-AKT、AKT、p-STAT3、STAT3、p-mTOR、mTOR蛋白相對表達(dá)水平（±s）

注：n=3。a與2 mmol/L組相比，P＜0.05；b與5 mmol/L組相比，P＜0.05；c與對照組相比，P＜0.05；d與0.5 mmol/L組相比，P＜0.05；e與1 mmol/L組相比，P＜0.05

二甲雙胍濃度0（對照組）0.5 mmol/L 1 mmol/L 2 mmol/L 5 mmol/L 10 mmol/L F值P值p-AKT 1.04±0.28a b 0.91±0.16a b 0.79±0.12a b 0.46±0.03c d e 0.43±0.02c d e 0.41±0.03c d e 11.38＜0.01 AKT 1.11±0.14 0.97±0.23 0.77±0.01 0.70±0.09 0.87±0.47 1.00±0.37 0.66 0.67 p-STAT3 0.82±0.14a b 0.74±0.02a b 0.63±0.03 0.45±0.05c d 0.39±0.04c d 0.24±0.22c d e 8.41 0.01 STAT3 1.12±0.16 1.03±0.01 0.91±0.08 0.87±0.01 0.81±0.06 0.87±0.07 4.24 0.05 p-mTOR 1.61±0.24a b 1.58±0.20a b 1.29±0.34 1.09±0.29c d 0.99±0.12c d 0.98±0.14c d 4.38 0.02 mTOR 0.96±0.20 0.87±0.05 0.82±0.08 0.84±0.11 0.81±0.14 0.81±0.18 0.35 0.86

圖7 不同濃度二甲雙胍干預(yù)48 h后對HaCaT細(xì)胞p-AKT、AKT、p-STAT3、STAT3、p-mTOR、mTOR蛋白的影響1：對照組；2～6：分別為0.5、1、2、5、10 mmol/L二甲雙胍組；隨二甲雙胍濃度增加，p-AKT、p-mTOR、p-STAT3蛋白表達(dá)逐漸降低

討 論

近年來，有關(guān)二甲雙胍對銀屑病治療作用的研究日益增多。Brauchli等［4］調(diào)查了英國36 702例銀屑病患者及Wu等［5］對中國臺(tái)灣地區(qū)1 165 972例糖尿病患者使用抗糖尿病藥物與患銀屑病風(fēng)險(xiǎn)的研究均發(fā)現(xiàn)，長期服用二甲雙胍的糖尿病患者發(fā)生銀屑病的風(fēng)險(xiǎn)降低。Singh和Bhansali［6］將83例伴代謝綜合征的銀屑病患者在局部外用藥治療的基礎(chǔ)上隨機(jī)分為安慰劑組，吡格列酮和二甲雙胍治療組，12周后，服用二甲雙胍和吡格列酮的患者銀屑病面積和嚴(yán)重程度指數(shù)（PASI）、紅斑、鱗屑、浸潤評分（ESI）、醫(yī)師綜合評價(jià)（PGA）評分均有顯著改善。

角蛋白16、17是角質(zhì)形成細(xì)胞增殖的標(biāo)志，角蛋白1、內(nèi)披蛋白是角質(zhì)形成細(xì)胞分化的標(biāo)志。角蛋白16、17在正常皮膚中不表達(dá)或少量表達(dá)，但在銀屑病活動(dòng)早期皮損處高表達(dá)［7-8］。角質(zhì)形成細(xì)胞分化的第一步是角蛋白1和10的異源二聚體形成細(xì)胞骨架絲，銀屑病皮損中細(xì)胞分化不良，角蛋白1的表達(dá)減少［8-9］。內(nèi)披蛋白是交聯(lián)包膜的蛋白前體，為細(xì)胞終末分化的標(biāo)記，銀屑病患者的表皮中內(nèi)披蛋白表達(dá)量明顯增加［10］。Liu等［11］發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍能抑制體外培養(yǎng)的HaCaT細(xì)胞增殖和凋亡。江萌等報(bào)道［12］，二甲雙胍能顯著抑制HaCaT細(xì)胞的增殖，其抑制率呈明顯的濃度依賴性。我們研究發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍對HaCaT細(xì)胞增殖有抑制作用，且隨著二甲雙胍濃度的增加，細(xì)胞存活率逐漸降低，二甲雙胍還能阻滯細(xì)胞在G2/M期，并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。我們還發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍可抑制角蛋白16、17的表達(dá)，促進(jìn)角蛋白1的表達(dá)，促進(jìn)促凋亡蛋白Bax的表達(dá)，并抑制凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，提示二甲雙胍可以抑制角質(zhì)形成細(xì)胞增殖，促進(jìn)其分化。但二甲雙胍對終末分化標(biāo)記內(nèi)披蛋白的表達(dá)無明顯影響，我們推測二甲雙胍可能對角質(zhì)形成細(xì)胞分化的不同階段有不同影響。本研究提示，二甲雙胍可能對角質(zhì)形成細(xì)胞分化早期具有部分調(diào)控作用，但其具體機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

IL-8、TNF-α是重要的促炎細(xì)胞因子，IL-8具有趨化白細(xì)胞、直接刺激角質(zhì)形成細(xì)胞的增生、促進(jìn)病變皮膚組織中大量微血管形成等作用，TNF-α可以誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞間黏附分子1，促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞增生、炎癥細(xì)胞的黏附，還可刺激角質(zhì)形成細(xì)胞分泌IL-8。二者可能相互誘導(dǎo)或協(xié)同參與銀屑病的炎癥性免疫病理過程［13］。有研究發(fā)現(xiàn)［11］，二甲雙胍能抑制體外培養(yǎng)的HaCaT細(xì)胞炎癥因子IL-6、TNF-α和血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)水平。我們發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍可以抑制HaCaT細(xì)胞分泌IL-8、TNF-α，進(jìn)一步證明了二甲雙胍的抗炎作用。近年研究表明［14］，角質(zhì)形成細(xì)胞也可表達(dá)IL-23的兩個(gè)亞單位p19和p40，過表達(dá)IL-23可能對銀屑病的炎性過程起一定作用。但I(xiàn)L-23在銀屑病病理生理過程及其與銀屑病先天性和獲得性免疫系統(tǒng)中其他相關(guān)細(xì)胞和分子通路之間的相互作用等還有待進(jìn)一步研究。我們的研究未發(fā)現(xiàn)二甲雙胍對IL-23的抑制作用，提示二甲雙胍是對部分炎癥因子具有抑制作用，具體機(jī)制尚不明確。

除了角質(zhì)形成細(xì)胞的過度增殖，角質(zhì)形成細(xì)胞分化不全也是銀屑病的重要特征。目前，尚無二甲雙胍對角質(zhì)形成細(xì)胞分化影響的相關(guān)報(bào)道。我們研究發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍可以誘導(dǎo)分化相關(guān)蛋白角蛋白1的表達(dá)，并能抑制AKT、mTOR、STAT3蛋白的磷酸化，推測二甲雙胍對角質(zhì)形成細(xì)胞作用的機(jī)制可能與AKT/mTOR/STAT3信號通路有關(guān)?；罨腁KT、mTOR、STAT3可參與促進(jìn)細(xì)胞生長和增殖、抑制細(xì)胞凋亡、調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝等多種細(xì)胞功能和效應(yīng)的調(diào)節(jié)。相關(guān)研究表明［15-16］，銀屑病皮損中AKT、mTOR、STAT3表達(dá)顯著高于正常皮膚組織，提示該通路的表達(dá)增加和活化在銀屑病發(fā)病機(jī)制中可能起重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍可以抑制AKT、mTOR、STAT3的 磷 酸 化，但 對AKT、mTOR、STAT3蛋白表達(dá)無影響，推測二甲雙胍可以通過抑制AKT、mTOR、STAT3的磷酸化調(diào)控角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖、凋亡、分化及炎癥因子分泌。

本研究顯示，二甲雙胍可以抑制HaCaT細(xì)胞的增殖，使細(xì)胞發(fā)生G2/M期阻滯并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞分化，抑制炎癥因子分泌，其機(jī)制可能與抑制AKT/mTOR/STAT3信號通路有關(guān)。但本研究仍缺乏二甲雙胍對細(xì)胞增殖、凋亡、分化等相關(guān)分子機(jī)制的深入研究，二甲雙胍是否主要通過AKT/mTOR/STAT3信號通路作用于HaCaT細(xì)胞，除此通路外是否還有其他機(jī)制參與其中有待進(jìn)一步研究。同時(shí)本研究結(jié)果只能初步為二甲雙胍治療銀屑病提供部分實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)，但其是否能成為該病治療的一種新型藥物尚需進(jìn)一步研究。