廖柳清，唐艷青，鐘榮德，翁藝

(1 廣州市增城區(qū)婦幼保健院，廣州511300；2 廣州市增城區(qū)荔城街社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心)

研究表明，基礎(chǔ)領(lǐng)域的相關(guān)分子改變，能夠在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要的作用。腫瘤相關(guān)分子的波動(dòng)，能夠通過激活癌基因，提高下游信號(hào)通路的激活等途徑，進(jìn)而導(dǎo)致乳腺癌病情的進(jìn)展[1]。神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)表達(dá)上升，能夠通過促進(jìn)生長(zhǎng)因子受體的激活，提高癌細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)因子相關(guān)信號(hào)通路的激活，提高乳腺上皮細(xì)胞核DNA的分裂速度，促進(jìn)癌細(xì)胞的持續(xù)性自我增殖效應(yīng)[2]；金屬硫蛋白1E(MT-1E)是金屬蛋白酶家族成員，其能夠通過乳腺上皮細(xì)胞膜表面巰基酶的激活，進(jìn)而促進(jìn)金屬蛋白酶的磷酸化和巰基化，促進(jìn)癌細(xì)胞侵襲能力和其他生物學(xué)特征的改變[3]。部分研究者探討了NGF表達(dá)與惡性腫瘤的關(guān)系，認(rèn)為NGF表達(dá)上升能夠顯著促進(jìn)惡性腫瘤的發(fā)生和臨床病情的進(jìn)展[4]，但對(duì)于NGF、MT-1E與乳腺癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系的研究不足。2016年7月～2017年12月，我分析了乳腺癌患者血清NGF、MT-1E水平變化及其與病理學(xué)特征的關(guān)系，旨在為乳腺癌患者的診療及預(yù)后評(píng)估提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集同期增城區(qū)婦保院確診的乳腺癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合2015年《中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范》中乳腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；②年齡19～65歲；③經(jīng)乳腺鉬靶、超聲、穿刺活檢或術(shù)后病理檢查確診。排除標(biāo)準(zhǔn)：①已經(jīng)實(shí)施放化療；②免疫功能缺陷；③伴有其他部位惡性腫瘤；④伴有全身感染性疾病。共選取乳腺癌患者90例(乳腺癌組)，另選取同期確診的乳腺良性疾病患者90例(良性組)作為對(duì)照。乳腺癌組均為女性，年齡(50.2±7.6)歲，腫瘤位于左側(cè)乳房42例、右側(cè)乳房48例，腫瘤直徑(3.5±5.2)cm，組織學(xué)分級(jí)：G1級(jí)18例、G2級(jí)36例、G3級(jí)36例，TNM分期：Ⅰ期10例、Ⅱ期38例、Ⅲ期32例，發(fā)生腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移41例。良性組均為女性，年齡(49.4±7.2)歲，其中乳腺纖維瘤44例、乳腺導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀瘤13例、乳腺脂肪瘤15例、乳腺平滑肌瘤12例、其他6例。兩組性別、年齡具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn),受試者均簽署知情同意書。

1.2 血清NGF、MT-1E檢測(cè)方法 采用ELISA法。采集患者入院后24 h內(nèi)的肘部靜脈血4 mL，以1 500 r/min離心15 min，收集上清液；在每個(gè)聚苯乙烯板中加入上述液體0.1 mL，4 ℃過夜孵育；加入磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌3次，每次3 min。在每個(gè)聚苯乙烯板孔中加入NGF、MT-1E抗體(1∶800，南京伯斯金生物公司)，37 ℃孵育30 min；加入PBS洗滌3次，每次3 min；每孔中加入TMB溶液底物0.1 mL,37 ℃反應(yīng)20 min；加入2 mol/L硫酸0.05 mL終止反應(yīng)，采用DG5033A酶標(biāo)儀(南京華東電子科技公司)檢測(cè)OD值，計(jì)算相應(yīng)濃度。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清NGF、MT-1E水平比較 見表1。

表1 兩組血清NGF、MT-1E水平比較

2.2 乳腺癌組不同病理學(xué)特征患者血清NGF、MT-1E水平比較 見表2。

3 討論

不同病理性因素或者遺傳高危因素的攜帶，均能夠促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生。在部分合并有雌激素受體敏感性改變的人群中，乳腺癌的發(fā)病率和病死率均可進(jìn)一步上升。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌患者的無進(jìn)展生存期不足34個(gè)月，治療后乳腺癌患者的病情緩解率不足30%[6]。

表2 乳腺癌組不同病理學(xué)特征患者血清NGF、MT-1E水平比較

臨床上對(duì)于乳腺癌患者病情評(píng)估缺乏血清學(xué)方面的指標(biāo)，而通過對(duì)乳腺癌患者血清NGF、MT-1E水平的分析研究，能夠在揭示乳腺癌病情進(jìn)展機(jī)制的同時(shí)，還能夠?yàn)榕R床上乳腺癌患者的遠(yuǎn)期預(yù)后評(píng)估或者早期血清學(xué)篩查提供參考。

NGF是生長(zhǎng)因子家族成員，其能夠通過提高下游生長(zhǎng)因子受體的活性，促進(jìn)癌細(xì)胞內(nèi)多種信號(hào)通路的上調(diào)，提高AKT、MAPK的激活程度，進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄和增殖過程的異常。NGF能夠通過激活癌細(xì)胞DNA的上游轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子，提高癌細(xì)胞DNA的輔助和擴(kuò)增速度，進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌的病情進(jìn)展?；A(chǔ)方面的研究還認(rèn)為，NGF能夠提高癌細(xì)胞的浸潤(rùn)和黏附能力，進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)[7]；MT-1E是金屬巰基蛋白酶家族成員，其蛋白結(jié)構(gòu)上包括了多個(gè)巰基化的結(jié)構(gòu)，能夠通過激活含巰基蛋白酶，進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞間質(zhì)成分的分解，為上皮耐藥性惡性腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提供前提[8]。相關(guān)的研究還表明，MT-1E能夠促進(jìn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)換過程，利于癌細(xì)胞對(duì)于基底膜組織的突破，進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌的病情進(jìn)展[9]。部分研究探討了NGF的表達(dá)與乳腺癌的關(guān)系，認(rèn)為NGF表達(dá)上升與乳腺癌的早期發(fā)生密切相關(guān)[10]，但對(duì)于MT-1E的研究較少。

本研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組血清NGF、MT-1E水平均上升，均高于良性組，提示NGF、MT-1E高水平均能夠參與乳腺癌的病情進(jìn)展。通過分析其基礎(chǔ)方面的原因，考慮可能與NGF、MT-1E的下列幾個(gè)方面的病理特性作用有關(guān)[11, 12]：①NGF水平上升，不僅能夠提高癌細(xì)胞的增殖效應(yīng)，同時(shí)還能夠促進(jìn)細(xì)胞的凋亡抑制，導(dǎo)致癌細(xì)胞凋亡比例明顯減少，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展；②MT-1E能夠通過提高其對(duì)于巰基蛋白酶的調(diào)控，進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞膜表面跨膜受體蛋白的激活，促進(jìn)癌細(xì)胞內(nèi)第二信使的上調(diào)，進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞的異常分化過程。劉宇等[13]研究得出與本研究相似的結(jié)論，其發(fā)現(xiàn)在乳腺癌患者中NGF表達(dá)水平和陽性率均可平均上升約40%，同時(shí)在合并有明顯的腫瘤惡病質(zhì)或高腫瘤負(fù)荷患者中NGF表達(dá)水平可進(jìn)一步上升。本研究在探討血清NGF、MT-1E水平與乳腺癌患者病理學(xué)特征關(guān)系的過程中，發(fā)現(xiàn)血清NGF水平與乳腺癌患者的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分型等并無明顯的關(guān)系，推測(cè)NGF可能在促進(jìn)乳腺癌的病情進(jìn)展方面并無顯著作用；但也考慮可能與本研究納入的樣本較為局限，或由于NGF蛋白的檢測(cè)靈敏度較低有關(guān)。在組織學(xué)分級(jí)G3級(jí)、TNM分期Ⅲ期、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中，血清MT-1E水平可明顯上升，提示MT-1E水平與乳腺癌患者的病理學(xué)特征有關(guān)。這主要由于MT-1E水平上升能夠促進(jìn)乳腺腫瘤細(xì)胞對(duì)于淋巴結(jié)組織的黏附能力，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的分化成熟障礙等，進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌臨床病理特征的進(jìn)展[14, 15]。

綜上所述，乳腺癌患者血清NGF、MT-1E水平明顯升高，其中MT-1E水平上升與乳腺癌患者的病理學(xué)特征密切相關(guān)。本研究并未探討NGF、MT-1E的內(nèi)在關(guān)系，同時(shí)缺乏對(duì)于血清NGF、MT-1E水平與乳腺癌患者臨床轉(zhuǎn)歸關(guān)系的研究，今后將完善上述不足之處。