盧新翠，馬麗，孫興珍

(南京醫(yī)科大學附屬淮安第一醫(yī)院，江蘇淮安223300)

支氣管哮喘是兒童常見的慢性呼吸系統(tǒng)疾病之一，以反復發(fā)作的喘息、胸悶、咳嗽等為主要臨床表現(xiàn)，嚴重者可出現(xiàn)哮喘持續(xù)狀態(tài)、呼吸困難，甚至引起窒息而危及生命。因此，哮喘病情嚴重影響患兒的生長發(fā)育和正常的學習、生活[1]。由于哮喘的發(fā)病機制比較復雜，已有的研究認為其與遺傳、感染、精神、環(huán)境、運動、藥物等諸多因素有關(guān)，臨床治療也比較棘手[2]。有研究發(fā)現(xiàn)，Th1/Th2 細胞因子失衡是哮喘可能的發(fā)病基礎(chǔ)。白細胞介素12(IL-12)是一種Th1細胞因子，IL-25是Th2細胞因子，其水平的變化與哮喘的發(fā)生有關(guān)[3]。中性粒細胞(PMN)、髓過氧化物酶(MPO)與機體炎癥反應(yīng)程度相關(guān)[4]?？扇苄缘蛲鱿嚓P(guān)因子(sFas)及其配體(sFasL)在免疫細胞上的表達較高，其可介導免疫細胞的凋亡、增殖，在哮喘免疫耐受、調(diào)控異常、Th1/Th2 細胞因子失衡、氣道炎癥、氣道高反應(yīng)、氣道重塑過程中發(fā)揮重要作用[5]。本研究觀察了支氣管哮喘患兒外周血中IL-12 、IL-25、MPO、PMN、sFas、sFasL水平變化，并分析其與哮喘病情的關(guān)系?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2016年1月～2017年9月淮安第一醫(yī)院兒科收治的支氣管哮喘患兒。納入標準：①符合中華醫(yī)學會兒科分會呼吸學組全國兒科哮喘防治協(xié)作組制定的支氣管哮喘診斷標準；②年齡1～6歲；③患兒家長知情同意；④經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準。排除標準：①肺部感染；②支氣管畸形、異物吸入；③近2個月使用糖皮質(zhì)激素等藥物；④伴有其他疾病(免疫系統(tǒng)疾病、內(nèi)分泌疾病等)。共選取哮喘患兒120例(哮喘組)，同期收集健康兒童60例(對照組)。哮喘組男67例、女53例，年齡(3.2±1.2)歲，體質(zhì)量(15.6±3.2)kg；其中急性發(fā)作期72例、癥狀緩解期48例。對照組男32例、女28例，年齡(3.4±1.3)歲，體質(zhì)量(15.8±3.8)kg。兩組的性別、年齡及體質(zhì)量具有可比性。

1.2 外周血IL-12 、IL-25、MPO、PMN、sFas、sFasL檢測方法 采集對照組及哮喘組患兒入院后空腹靜脈血，以3 000 r/min離心分離血清，采用為Thermo Multiskan MK3酶標儀以雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測IL-12、IL-25、MPO、sFas、sFasL，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，嚴格按照試劑盒說明書操作。另取一份血標本，采用邁瑞血細胞分析儀檢測PMN。

2 結(jié)果

2.1 兩組外周血IL-12、IL-25、MPO、PMN、sFas及sFasL水平比較 哮喘組外周血IL-25、PMN、MPO、sFas、sFasL水平均高于對照組(P均<0.05)，而IL-12水平低于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組外周血IL-12、IL-25、MPO、PMN、sFas、sFasL水平比較

2.2 哮喘組急性發(fā)作期、癥狀緩解期患兒外周血IL-12、IL-25、MPO、PMN、sFas、sFasL水平比較 哮喘組急性發(fā)作期患兒外周血IL-25、MPO、PMN、sFas及sFasL水平均高于癥狀緩解期患兒(P均<0.05)，而IL-12水平低于癥狀緩解期患兒(P<0.05)。見表2。

表2 哮喘組急性發(fā)作期、癥狀緩解期患兒外周血IL-12、IL-25、MPO、PMN、sFas、sFasL水平比較

3 討論

支氣管哮喘是嚴重危害兒童健康和生命安全的慢性呼吸系統(tǒng)疾病，近年來其發(fā)病率呈上升趨勢，不僅嚴重影響兒童的身心健康，也給家庭和社會帶來沉重的負擔[6]。目前，臨床對于哮喘的發(fā)病機制尚未完全闡明，已經(jīng)公認的是哮喘屬于變態(tài)反應(yīng)性疾病，氣道炎癥、氣道高反應(yīng)性和氣道重塑是哮喘發(fā)生和發(fā)展的病理學基礎(chǔ)，氣道重塑可能與氣道炎癥相伴發(fā)生，并互相影響、相互促進[7]。

哮喘患兒的氣道炎癥由多種細胞因子、炎性介質(zhì)參與，以T淋巴細胞、嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、肥大細胞浸潤為主[8]。近年來隨著分子生物學的發(fā)展，Th1/Th2 細胞因子失衡在兒童哮喘發(fā)病中的作用已得到重視[9，10]。有研究發(fā)現(xiàn)，Th1細胞因子對哮喘產(chǎn)生負調(diào)節(jié)作用，Th2細胞因子對哮喘具有正調(diào)節(jié)作用[11]。IL-12是經(jīng)典的Th1細胞因子，參與細胞免疫應(yīng)答過程，調(diào)節(jié)NK細胞、巨噬細胞非特異性免疫，可通過信號轉(zhuǎn)導、轉(zhuǎn)錄激活因子誘導Th0細胞向Th1分化，同時通過誘導T細胞、NK細胞產(chǎn)生IFN-γ而抑制Th0細胞向Th2分化[12]。IL-25是新近發(fā)現(xiàn)的Th2細胞因子，可引起Th2細胞因子在氣道中產(chǎn)生增多、嗜酸性粒細胞浸潤、上皮細胞增生，進而引起黏液分泌增多、氣道高反應(yīng)性[13]。本研究結(jié)果顯示，哮喘組外周血IL-25水平高于對照組，而IL-12水平低于對照組；哮喘組急性發(fā)作期患兒外周血IL-25水平高于癥狀緩解期患兒，而IL-12水平顯著的低于癥狀緩解期患兒。這一結(jié)果提示，哮喘患兒機體Th2細胞增生、亢進導致正調(diào)節(jié)因子IL-25分泌增加，Th1細胞抑制導致負調(diào)節(jié)因子IL-12分泌減少，哮喘病情得到控制后Th1/Th2 細胞因子失衡狀態(tài)得以改善。

既往認為，嗜酸性粒細胞在哮喘的發(fā)病過程中起主導作用。但近年來有研究發(fā)現(xiàn)，PMN是哮喘發(fā)病中的主要效應(yīng)細胞。MPO是存在于PMN嗜天青顆粒上的一種酶，反映PMN浸潤數(shù)目和活性，是評價炎癥反應(yīng)程度的常用指標。本研究結(jié)果顯示，哮喘組外周血PMN、MPO水平均高于對照組，哮喘組急性發(fā)作期患兒外周血PMN、MPO水平均高于癥狀緩解期患兒。這一結(jié)果提示，哮喘患兒機體炎癥反應(yīng)程度較重，病情得到控制后PMN、MPO水平隨之下降。

細胞凋亡是由多基因調(diào)控、多種酶參與的程序性過程。細胞可通過膜受體與特異性配體傳遞凋亡信號，再通過特定的信號傳導途徑調(diào)控細胞凋亡過程[14]。FasL是目前研究較多的誘導凋亡途徑的胞外配體。Fas抗原主要表達于CD4+、CD8+T細胞，F(xiàn)asL主要表達于激活的T淋巴細胞和B淋巴細胞。Th1細胞受到抗原刺激時迅速發(fā)生凋亡，Th1細胞的凋亡、極化主要是由Fas/FasL介導。Th2細胞對Fas具有抗性，F(xiàn)as介導的凋亡途徑參與哮喘Th1/Th2失衡[15]。本研究結(jié)果顯示，哮喘組外周血sFas及sFasL水平均高于對照組，哮喘組急性發(fā)作期患兒外周血sFas及sFasL水平均高于癥狀緩解期患兒。這一結(jié)果提示，哮喘患兒誘導凋亡途徑的胞外配體水平較高，對Th1細胞的凋亡、極化產(chǎn)生了較大的影響，病情得到控制后sFas及sFasL水平隨之下降。

綜上所述，相對于正常兒童，支氣管哮喘患兒外周血IL-25、MPO、PMN、sFas及sFasL水平升高而IL-12水平降低，并且在患兒急性加重期時變化更加明顯。對這些指標進行檢測，將有助于對支氣管哮喘患兒的診斷及病情判斷，從而指導臨床治療。