馬文飚

(青海省人民醫(yī)院，西寧810007)

流行病學(xué)研究表明，甲狀腺癌的發(fā)病率接近241～627/10萬(wàn)人[1]，特別是在接觸放射線或者具有相關(guān)家族史的人群中，甲狀腺癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)更高[2]。在研究影響甲狀腺癌細(xì)胞發(fā)生相關(guān)機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞生物學(xué)因子能夠顯著影響甲狀腺上皮細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等過(guò)程，提高甲狀腺上皮細(xì)胞異常增殖的風(fēng)險(xiǎn)，從而促進(jìn)癌細(xì)胞的發(fā)生。免疫負(fù)調(diào)控分子腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白8樣蛋白2(TIPE2)能夠通過(guò)調(diào)控癌細(xì)胞的分化成熟，抑制癌細(xì)胞的過(guò)度增殖，穩(wěn)定癌細(xì)胞的細(xì)胞周期，從而降低惡性腫瘤的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[3]；微小染色體維持蛋白7(MCM7)能夠影響染色體DNA的轉(zhuǎn)錄活性，導(dǎo)致癌細(xì)胞的增殖速度提升，并可顯著提高癌細(xì)胞的黏附和轉(zhuǎn)移能力[4]。2015年1月～2018年1月，我們觀察了甲狀腺癌組織中TIPE2、MCM7蛋白的表達(dá)變化，并分析二者表達(dá)的相關(guān)性，旨在為臨床上甲狀腺癌的診療提供理論基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集同期青海省人民醫(yī)院收治的甲狀腺癌、甲狀腺良性腫瘤患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①甲狀腺癌、甲狀腺良性腫瘤符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②甲狀腺癌、甲狀腺良性腫瘤均經(jīng)過(guò)甲狀腺超聲、穿刺活檢證實(shí)；③年齡<60歲；④甲狀腺癌患者術(shù)前未接受放化療、免疫治療；⑤術(shù)中留取病灶組織標(biāo)本；⑥患者均簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①臨床資料不完整；②伴有其他部位惡性腫瘤。共選取甲狀腺癌組織80例(甲狀腺癌組)、甲狀腺良性腫瘤組織40例(良性組)。甲狀腺癌組男17例、女63例，年齡(44.5±9.8)歲，TNM分期：Ⅰ期18例、Ⅱ期24例、Ⅲ期30例、Ⅳ期8例，病理類型：乳頭狀癌33例、濾泡狀癌21例、未分化癌14例、髓樣癌12例，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移40例。良性組男9例、女31例，年齡(45.2±10.2)歲，其中甲狀腺腺瘤28例、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫12例。本研究獲得醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，兩組性別、年齡具有可比性。

1.2 TIPE2、MCM7蛋白檢測(cè)方法 采用免疫組化SP染色法。將石蠟切片脫蠟至水，3%H2O2封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶；PBS沖洗5 min，滴加正常山羊或兔血清37 ℃封閉處理15 min。用濾紙吸去血清，不洗，直接滴加第一抗體37 ℃孵育2 h；滴加生物素化的二抗，37 ℃孵育40 min；PBS沖洗5 min，DAB顯色；蘇木素復(fù)染，中性樹(shù)膠封片。TIPE2蛋白陽(yáng)性著色表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核、MCM7蛋白陽(yáng)性著色表達(dá)于細(xì)胞核，均呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá)。顯微鏡下觀察5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)細(xì)胞200個(gè)，根據(jù)著色強(qiáng)度、陽(yáng)性細(xì)胞比例判斷陽(yáng)性表達(dá)情況。著色強(qiáng)度：0分為無(wú)色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色或黑色，陽(yáng)性細(xì)胞比例：≤10%為1分、11%～50%為2分、51%～75%為3分、﹥75%為4分，兩項(xiàng)積分相乘<3為陰性、≥3為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料以例表示，數(shù)據(jù)比較行χ2檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)，相關(guān)關(guān)系采用Spearman相關(guān)性分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組TIPE2、MCM7蛋白表達(dá)情況比較 甲狀腺癌組中TIPE2、MCM7蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為36.25%(29/80)、76.25%(61/80)，良性組分別為70.00%(28/40)、10.00%(4/40)，兩組TIPE2、MCM7蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2分別為12.180、47.144，P均<0.05)。

2.2 不同病理學(xué)特征的甲狀腺癌組織中TIPE2、MCM7蛋白表達(dá)情況比較 見(jiàn)表1。

表1 不同病理學(xué)特征的甲狀腺癌組織中TIPE2、MCM7蛋白表達(dá)情況比較(例)

2.3 甲狀腺癌組織中TIPE2、MCM7蛋白表達(dá)的關(guān)系 相關(guān)性分析顯示，甲狀腺癌組織中TIPE2、MCM7蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.582,P<0.05)。

3 討論

流行病學(xué)顯示，在合并有甲狀腺功能亢進(jìn)、甲狀腺結(jié)節(jié)等的人群中，甲狀腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)較高，病死率或者無(wú)瘤生存時(shí)間等預(yù)后指標(biāo)較差[5,6]。現(xiàn)階段臨床上通過(guò)手術(shù)或綜合放化療措施，能夠提高甲狀腺癌的總體治療水平[7,8]。但長(zhǎng)期的隨訪研究證實(shí)，甲狀腺癌治療后生存轉(zhuǎn)歸的改善仍然不明顯，治療后遠(yuǎn)期器官轉(zhuǎn)移的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)仍然較高[9]。

臨床上，甲狀腺癌的發(fā)生機(jī)制仍不清楚。一般認(rèn)為，甲狀腺癌具有遺傳易感基因的攜帶、放射性物質(zhì)的接觸史等，均能增加甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞異常增殖的風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄水平改變。TIPE2蛋白的表達(dá)能夠穩(wěn)定癌細(xì)胞的細(xì)胞周期，降低G1/S期細(xì)胞比例，提高上皮細(xì)胞的分化成熟能力，降低上皮細(xì)胞的調(diào)控異常導(dǎo)致的DNA持續(xù)性擴(kuò)增。基礎(chǔ)領(lǐng)域的研究也表明，TIPE2蛋白的表達(dá)能夠穩(wěn)定腫瘤壞死因子家族成員，降低炎癥反應(yīng)在早期惡性腫瘤細(xì)胞增殖過(guò)程中的促進(jìn)作用[10]；MCM7蛋白是重要的染色體結(jié)構(gòu)調(diào)節(jié)蛋白，MCM7蛋白的表達(dá)能夠提高染色體DNA的擴(kuò)增速度，并能夠通過(guò)甲基化或者磷酸化的修飾功能，提高癌細(xì)胞的浸潤(rùn)和黏附能力[11,12]。部分研究探討了MCM7蛋白在消化系統(tǒng)惡性腫瘤發(fā)生過(guò)程中的作用，認(rèn)為MCM7蛋白陽(yáng)性表達(dá)是促進(jìn)腫瘤患者臨床分期進(jìn)展、癌細(xì)胞浸潤(rùn)深度增加的重要因素，但對(duì)于TIPE2蛋白的表達(dá)分析研究不足。

本研究發(fā)現(xiàn)，TIPE2、MCM7蛋白在甲狀腺癌病灶組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯變化，其中TIPE2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明下降，而MCM7蛋白陽(yáng)性表達(dá)率上升，且二者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示了不同的生物學(xué)蛋白均影響到了甲狀腺癌的病情進(jìn)展過(guò)程。薈萃國(guó)內(nèi)外相關(guān)基礎(chǔ)方面的研究，筆者認(rèn)為T(mén)IPE2、MCM7蛋白異常表達(dá)促進(jìn)甲狀腺癌的發(fā)生主要與下列因素相關(guān)：①TIPE2蛋白表達(dá)下降，影響到了甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞的基因錯(cuò)配修復(fù)能力，導(dǎo)致上皮細(xì)胞的DNA突變風(fēng)險(xiǎn)增加，影響到了癌基因的轉(zhuǎn)錄活性；②MCM7蛋白表達(dá)水平的改變，能夠提高甲狀腺上分化障礙的風(fēng)險(xiǎn)，誘導(dǎo)下游AKT或者M(jìn)APK信號(hào)通路蛋白的激活，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)。李義等[13]通過(guò)分析62例甲狀腺癌患者的免疫組化資料發(fā)現(xiàn)，MCM7蛋白表達(dá)水平可平均上升18%以上，同時(shí)在癌細(xì)胞分化程度較差或者細(xì)胞異質(zhì)性較為明顯的甲狀腺癌患者中，MCM7蛋白表達(dá)水平可進(jìn)一步上升。本研究發(fā)現(xiàn)，TNM分期Ⅰ期+Ⅱ期、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺癌組織中TIPE2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于臨床分期較晚、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，提示TIPE2蛋白能夠影響甲狀腺癌的進(jìn)展。這主要由于TIPE2蛋白表達(dá)下降，失去了其對(duì)于癌細(xì)胞的浸潤(rùn)能力、突破基底膜能力或者淋巴結(jié)黏附能力的調(diào)控有關(guān)。而在臨床分期較晚或者發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺癌組織中，MCM7蛋白陽(yáng)性表達(dá)率上升。這提示MCM7蛋白陽(yáng)性表達(dá)能夠顯著促進(jìn)甲狀腺癌的病情進(jìn)展，提高癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)。由上可見(jiàn)，甲狀腺癌組織中TIPE2蛋白表達(dá)下調(diào)、MCM7蛋白表達(dá)上調(diào)，并且與腫瘤的分期密切相關(guān)，二者在甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。