才興蔓

（遼寧省葫蘆島市龍港區(qū)雙樹動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，遼寧葫蘆島 125101）

1 雞白痢沙門氏菌的病原學(xué)

1.1 分類及形態(tài)

病原為雞白痢沙門氏桿菌，為革蘭氏陰性短桿菌，有時(shí)呈多形性。無鞭毛。不能運(yùn)動(dòng)。不形成莢膜和芽胞。

1.2 生化特性

本細(xì)菌能利用葡萄糖、甘露醇、蔗糖，不能利用乳糖、衛(wèi)矛醇、麥芽糖，不分解尿素，硫化氫試驗(yàn)陰性，產(chǎn)生鳥氨酸脫羧酶和賴氨酸脫羧酶。吲哚試驗(yàn)和V-P試驗(yàn)陰性，甲基紅試驗(yàn)和枸櫞酸鹽試驗(yàn)陽性。

1.3 抵抗力

對(duì)熱的抵抗力不強(qiáng)，加熱70℃20min死亡；0.005%高錳酸鉀、0.3%來蘇兒、0.1%升汞、0.2%福爾馬林和%石碳酸溶液經(jīng)15～20min可以殺死。對(duì)低溫的抵抗力很強(qiáng)，-10℃經(jīng)4個(gè)月不死，在尸體中可存活3個(gè)月以上，在干燥的糞便及分泌物中可以存活4年之久。

2 雞白痢沙門氏菌的分離與鑒定實(shí)驗(yàn)

2.1 材料和方法

2.1.1 材料

（1）藥品與器材

SS瓊脂 普通瓊脂 革蘭氏染色液 三糖鐵瓊脂 1%蛋白胨水GN增菌液 葡萄糖發(fā)酵管 乳糖發(fā)酵管 麥芽糖發(fā)酵管 甘露醇發(fā)酵管 蔗糖發(fā)酵管 枸櫞酸鹽培養(yǎng)基 平皿 酒精燈 釣菌環(huán) 注射器 試管。

（2）病料

某雞場(chǎng)的疑似雞白痢的病、死雞若干只，已死亡的雞只時(shí)間不超過12h。

2.1.2 細(xì)菌的分離與培養(yǎng)

無菌采集病死雞的肝臟，心血等組織，并接種在普通瓊脂平板中，37℃培養(yǎng)24h，抹片，革蘭氏染色后鏡檢。之后挑取可疑菌落接種SS瓊脂培養(yǎng)基，與37℃培養(yǎng)24h。

2.1.3 細(xì)菌形態(tài)學(xué)觀察

取在SS瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)的單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)菌的形態(tài)及染色特點(diǎn)。

2.1.4 生化試驗(yàn)

將分離到的菌株按常規(guī)方法進(jìn)行三糖鐵試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、MR試驗(yàn)和VP試驗(yàn)以及多種糖發(fā)酵試驗(yàn)、枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)、尿素酶試驗(yàn)。

2.1.5 動(dòng)物試驗(yàn)

將試驗(yàn)動(dòng)物雞接種菌液，并設(shè)置對(duì)照組，四天后觀察試驗(yàn)動(dòng)物的情況。

2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 菌落形態(tài)

病原的分離及染色鏡檢病料接種于普通瓊脂平板，形成均一、無色、半透明、表面光滑、隆起、邊緣整齊的針尖大小的菌落。在SS瓊脂平板上形成的菌落與普通瓊脂平板上的相似，只是生長的更豐盛。

2.2.2 染色鏡檢

可見粉紅色、中等、大小的桿菌、單在、無芽孢和莢膜，為革蘭氏陰性菌。

2.2.3 生化試驗(yàn)

生化試驗(yàn)各菌進(jìn)行生化試驗(yàn)，結(jié)果顯示IMViC- + - +，能發(fā)酵葡萄糖、果糖、山梨醇、鼠李糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不能利用乳糖、蔗糖、麥芽糖、側(cè)金盞花醇。尿素酶試驗(yàn)陰性。細(xì)菌在三糖鐵培養(yǎng)基中生長，斜面紅色，底層黃黑色。以上結(jié)果符合雞白痢沙門氏菌的生化特點(diǎn)。

2.3 實(shí)驗(yàn)小結(jié)與討論

由于這些疑似雞白痢的病雞具有典型的臨床病狀和剖癥狀，并通過一系列的實(shí)驗(yàn)室檢查與診斷，初步認(rèn)定為雞白痢沙門氏菌。

3 藥物敏感試驗(yàn)

3.1 試驗(yàn)的材料與步驟 藥物紙片瓊脂擴(kuò)散法﹙紙片法﹚

3.1.1 藥品與器材

卡那霉素 慶大霉素 新霉素 氟哌酸 強(qiáng)力霉素 恩諾沙星 阿莫西林土霉素﹙以上八種藥物均購自河北綠欣康動(dòng)物藥業(yè)有限公司﹚ 標(biāo)準(zhǔn)濾紙 直徑為6mm的打孔器 消毒棉簽 酒精燈 游標(biāo)卡尺

3.1.2 試驗(yàn)準(zhǔn)備工作

（1）藥敏片的制備

取標(biāo)準(zhǔn)濾紙，用打孔器打成6mm直徑的圓形小紙片。各取圓紙片10片放入八個(gè)清潔干燥的青霉素空瓶中，瓶口以單層牛皮紙包扎。經(jīng)121℃15～20min高壓消毒后，放在37℃恒溫箱中數(shù)天。使完全干燥[9]。

（2）藥液的制備﹙用于商品藥的試驗(yàn)﹚

按商品藥的使用治療量的比例配制藥液，如新霉素的治療量為70mg/L，用100ml的蒸餾水稀釋7mg的新霉素，備用。﹙其他藥物同﹚

（3）抗菌藥敏片制備

在上訴含有紙片的青霉素瓶內(nèi)分別加入卡那霉素藥液、慶大霉素藥液、新霉素藥液、氟哌酸藥液、強(qiáng)力霉素藥液、恩諾沙星藥液、阿莫西林藥液和土霉素藥液各1ml，并翻動(dòng)紙片，使所有紙片充分浸透藥液，同時(shí)在瓶口上記錄藥物名稱，放在37℃恒溫箱內(nèi)過夜，干燥后密封，備用。

3.1.3 試驗(yàn)操作方法

（1）在無菌操作臺(tái)中，用接種環(huán)鉤取1～2環(huán)純培養(yǎng)的沙門氏菌置到1ml滅菌生理鹽水中充分混合，用滅菌吸管吸取2～3滴菌液，均勻涂滿麥康凱培養(yǎng)基的整個(gè)表面，分別放置阿莫西林、卡那霉素、慶大霉素、土霉素、氟哌酸、新霉素、強(qiáng)力霉素、恩諾沙星藥敏紙片。

（2）將鑷子于酒精燈火焰滅菌后略涼，取藥敏片貼到平皿培養(yǎng)基表面。在培養(yǎng)基背面用記號(hào)筆標(biāo)記藥物名稱。

（3）將培養(yǎng)基置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)24h后，觀察結(jié)果。用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈的直徑，若抑菌圈直徑15～20mm為高度敏感，10～15mm為中度敏感，10mm以下為低度敏感。

3.2 試驗(yàn)小結(jié)與討論

此次試驗(yàn)結(jié)果表明該雞場(chǎng)的雞白痢沙門氏菌對(duì)對(duì)卡那霉素、慶大霉素、新霉素為高度敏感，對(duì)氟哌酸、強(qiáng)力霉素、恩諾沙星為中度敏感，對(duì)阿莫西林、土霉素產(chǎn)生了耐藥性。