朱孟玲，田為剛

腸炎沙門氏菌PT4被認(rèn)為是人沙門氏菌感染的主要血清型。在各種腸道腸炎沙門氏菌噬菌體類型中，噬菌體PT4在雞中致病性最強(qiáng)。此外，在同一階段類型的腸型鏈球菌中，有報(bào)道稱其傳染性的毒力發(fā)生變化（Gast和Benson，1995）。目前家禽養(yǎng)殖的模式增加了沙門氏菌感染的可能性，因?yàn)楸Ｗo(hù)性微生物群的發(fā)展相對(duì)緩慢。健康成年家禽口服接種腸道菌群可以保護(hù)幼雛免受沙門氏菌的定植，這種預(yù)防性的方法稱為競(jìng)爭(zhēng)排斥。但競(jìng)爭(zhēng)排斥的一個(gè)主要缺點(diǎn)是其保護(hù)有限，需要改進(jìn)保護(hù)效果。人們對(duì)某些不溶性碳水化合物的特異性和選擇性及其對(duì)人類、家禽和其他動(dòng)物胃腸道中個(gè)別微生物種類的影響也很感興趣。人體以果糖、甘露糖和半乳糖為基礎(chǔ)的低聚糖對(duì)腸道菌群的影響表明，這些不可消化的糖對(duì)腸道具有益處。Hidaka和Hireayama（1990）報(bào)道，果寡糖在腸道內(nèi)提供了一種底物，只有所謂的“有益細(xì)菌”，如雙歧桿菌和乳酸菌可以利用。將果寡糖添加到雞飼料中，并與來自雞盲腸內(nèi)容物培養(yǎng)菌混合使用比單獨(dú)使用更能有效降低沙門氏菌的定植（Bailey等，2016）。人類和雞的胃腸道下部有由許多屬組成的不同的細(xì)菌群落，這些細(xì)菌包括雙歧桿菌、擬桿菌、真細(xì)菌、革蘭陽(yáng)性球菌、梭菌和乳酸菌等小群細(xì)菌。雙歧桿菌和乳酸菌通常被認(rèn)為是有益的微生物，其創(chuàng)造了不利于病原體如沙門氏菌生長(zhǎng)的條件。相反，許多腸桿菌和梭菌被認(rèn)為是有害微生物，它們要么是侵入性的，要么產(chǎn)生有毒代謝物。因此，雙歧桿菌和乳酸桿菌增加，腸桿菌和梭菌減少對(duì)宿主動(dòng)物有益。本研究目的是：（1）通過在肉雞和蛋雞飼料中添加甘露寡糖或棕櫚粕，研究其降低肉雞盲腸腸炎沙門氏菌定植的可能性；（2）確定保護(hù)性微生物區(qū)系的主要菌群，評(píng)估這些微生物可選擇性使用的碳水化合物，以確定有利于種群的條件。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與日糧 以30周齡的產(chǎn)蛋雞作為試驗(yàn)動(dòng)物，沙門氏菌缺乏癥的確診方法是進(jìn)行兩次糞便培養(yǎng)，然后在第2周再進(jìn)行1次。隨后，在第4周也對(duì)沙門氏菌進(jìn)行盲腸內(nèi)容物的培養(yǎng)，并在第4周將其屠宰，收集盲腸內(nèi)容物。試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧見表1，處理組在基礎(chǔ)日糧中分別添加2.5%的甘露寡糖或棕櫚粕。

表1 試驗(yàn)日糧配方g/kg

1.2 沙門氏菌感染及盲腸內(nèi)容物制備 腸炎沙門氏菌在37℃的腦心灌注肉湯中培養(yǎng)過夜，用蛋白胨生理鹽水稀釋肉湯培養(yǎng)物，其濃度約為5×104CFU/mL。將30只無致病菌的成熟蛋雞隨機(jī)分為3組，每組10只，單雞單籠飼養(yǎng)，共飼養(yǎng)4周。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)1：將在-70℃保存的含盲腸內(nèi)容物的粉料、甘露寡糖+盲腸內(nèi)容物、棕櫚粕+盲腸內(nèi)容物粉料在厭氧箱內(nèi)解凍。在無菌試管中使用預(yù)還原腦心灌注肉湯連續(xù)稀釋10倍。試驗(yàn)2：在兩個(gè)獨(dú)立的試驗(yàn)（1-1和1-2）中評(píng)估了盲腸內(nèi)容物對(duì)腸炎沙門氏菌定植的影響。每個(gè)試驗(yàn)選擇20只1日齡的雛雞，隨機(jī)分為4組，每組5只，放在不同的紙箱中。同一天每只雞口服0.2 mL 3種未稀釋的盲腸內(nèi)容物飼料制劑。第4組以肉湯作為對(duì)照。禁食3 h后，給所有的雛雞飼喂對(duì)應(yīng)飼料。24 h后，雛雞口服懸在蛋白胨生理鹽水中濃度約為5×104CFU/mL的腸炎沙門氏菌。參考Cowan和Steel（2003）的研究方法進(jìn)行后續(xù)菌群分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 采用單因素方差分析和Tukey兩兩配對(duì)檢驗(yàn)日糧中細(xì)菌計(jì)數(shù)的差異。在試驗(yàn)1中，由于試驗(yàn)準(zhǔn)備的不均勻，方差分析不合適。采用Fisher精確檢驗(yàn)法對(duì)沙門氏菌陽(yáng)性/陰性禽類的百分率進(jìn)行評(píng)估。所有分析均采用Minitab統(tǒng)計(jì)分析軟件，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 盲腸內(nèi)容物微生物比較 由表2可知，盲腸內(nèi)容物一式3份，結(jié)果共檢測(cè)到13種微生物，其中6種需氧菌、7種厭氧菌。對(duì)照組、甘露寡糖組和棕櫚粕組對(duì)總厭氧菌數(shù)量無顯著影響（P＞0.05），但棕櫚粕組較對(duì)照組和甘露寡糖組顯著提高了雙歧桿菌數(shù)量（P＜0.05）。甘露寡糖和棕櫚粕組真桿菌數(shù)量較對(duì)照組高，但無顯著差異（P＞0.05）。對(duì)照組較其他兩組有提高擬桿菌數(shù)量的趨勢(shì)（P=0.07）。甘露寡糖組較其他兩組顯著提高了腸球菌數(shù)量（P＜0.05）。

表2 盲腸內(nèi)容物微生物比較lgCFu/mL

2.2 盲腸微生物 由表3可知，兩個(gè)試驗(yàn)結(jié)果顯示分離到的腸炎沙門氏菌數(shù)量很低（lg 0.2 CFU/mL）。但在試驗(yàn)1-2中，甘露寡糖+盲腸內(nèi)容物組腸炎沙門氏菌最低。在試驗(yàn)1-1和1-2中，對(duì)照組腸炎沙門氏菌均值為lg 2.5和lg 7.7 CFU/mL。與對(duì)照組相比，兩個(gè)試驗(yàn)中添加了盲腸內(nèi)容物均顯著提高了厭氧菌數(shù)量（P＜0.05），同時(shí)顯著降低腸炎沙門氏菌數(shù)量（P＜0.05）。此外，試驗(yàn)1-1和1-2中甘露寡糖+內(nèi)容物、棕櫚粕+內(nèi)容物均顯著降低了兼性厭氧菌和大腸桿菌數(shù)量（P＜0.05）。兩個(gè)試驗(yàn)中只有棕櫚粕+內(nèi)容物組較其他組顯著降低了腸球菌數(shù)量（P＜0.05）。

表3 盲腸內(nèi)容物對(duì)肉雞盲腸微生物的影響lgCFu/mL

表4 甘露寡糖對(duì)盲腸腸炎沙門氏菌定植的影響

由表4可知，對(duì)照組降低了整個(gè)4周試驗(yàn)期雞只感染數(shù)量，但甘露寡糖組僅在第4周降低了感染雞只數(shù)量。在第4周時(shí)，甘露寡糖組有2/5（40%）雞只發(fā)生感染（P＞0.05），但棕櫚粕組無雞只感染（P＜0.05）。

由表5可知，棕櫚粕組在第4周時(shí)盲腸厭氧菌、雙歧桿菌、乳酸菌和兼性厭氧菌數(shù)量顯著高于第2周（P＜0.05），但顯著降低擬桿菌數(shù)量（P＜0.05）。對(duì)照組和棕櫚粕組在第4周時(shí)均未檢測(cè)出腸炎沙門氏菌，同時(shí)對(duì)照組在第2和4周微生物數(shù)量無顯著差異（P＞0.05）。

3 討論

以果糖為基礎(chǔ)的低聚糖可以減少沙門氏菌定植，但與對(duì)照組相比，1和3周齡雛雞盲腸中的雙歧桿菌、擬桿菌、乳酸菌和大腸桿菌的數(shù)量影響很?。‵ukata等，2015）。同樣的，Bailey等（2016）觀察到，在雞飼料中添加果寡糖可以刺激雙歧桿菌在盲腸中的生長(zhǎng)，同時(shí)減少鼠傷寒沙門氏菌計(jì)數(shù)。本研究結(jié)果顯示，日糧添加棕櫚粕刺激了肉雞兼性厭氧菌的生長(zhǎng)，尤其是雙歧桿菌和乳酸菌。在第4周同時(shí)降低了擬桿菌數(shù)量。Oyarzabal和Connor（1995）體外研究表明，沙門氏菌似乎無法代謝果寡糖等寡糖，而體內(nèi)研究報(bào)告稱，日糧中的果寡糖對(duì)肉雞沙門氏菌定植的敏感性影響很小。

表5 棕櫚粕對(duì)第2和4周肉雞盲腸微生物的影響lgCFu/mL

本試驗(yàn)研究也發(fā)現(xiàn)，日糧添加甘露寡糖或棕櫚粕刺激了厭氧菌的生長(zhǎng)，尤其是雙歧桿菌和真桿菌。當(dāng)雛雞服用含有盲腸內(nèi)容物+甘露寡糖或棕櫚粕的飼料時(shí)厭氧菌數(shù)量增加，同時(shí)兼性厭氧菌（包括腸炎沙門氏菌和大腸桿菌）數(shù)量減少。但本研究表明，飼料添加盲腸內(nèi)容物可減少雞腸炎沙門氏菌的定植，但添加甘露寡糖或棕櫚粕后更有效，這與Fernandez等（2000）的研究結(jié)果一致。許多雙歧桿菌菌株分泌殺菌或抑菌物質(zhì)，影響沙門氏菌、彎曲桿菌和志賀氏桿菌微生物的生長(zhǎng)，這說明產(chǎn)酸并不是雙歧桿菌唯一的抑制機(jī)制，這些抗菌物質(zhì)也參與本試驗(yàn)觀察到的變化。低聚糖在雛雞腸道下段有效時(shí)對(duì)沙門氏菌的抑制作用可能是因?yàn)榈途厶窃诮Y(jié)腸和盲腸中的發(fā)酵，通過產(chǎn)生低氧化還原電位，清除氧和產(chǎn)生有機(jī)酸抑制致病菌來調(diào)節(jié)腸道菌群。

4 結(jié)論

綜上所述，本研究證明添加甘露寡糖或棕櫚粕和盲腸內(nèi)容物的兩種飼料對(duì)雞盲腸菌定植的有益影響，同時(shí)具有增加盲腸雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量，降低擬桿菌和腸桿菌數(shù)量的潛力。