徐夢飛，盧平萍，馬 勛，張艷艷，王煒燁,，孟季蒙，王正榮，薄新文

(1.石河子大學(xué) 動物科技學(xué)院，新疆石河子 832000； 2.新疆農(nóng)墾科學(xué)院 畜牧獸醫(yī)研究所，省部共建綿羊遺傳改良與健康養(yǎng)殖國家重點實驗室，新疆石河子 832000)

包蟲病(Hydatidosis)又稱棘球蚴病，是由(Echinococcusgranulosus)E.granulosus中絳期幼蟲--棘球蚴寄生于宿主肝、肺等器官而引發(fā)的一種地方性、自然疫源性人畜共患囊型寄生蟲病。當(dāng)E.granulosus蟲卵進(jìn)入中間宿主(牛、羊等食草動物和人)體內(nèi)后，六鉤蚴在其腸內(nèi)孵出，鉆入腸壁，經(jīng)血液循環(huán)至肝、肺等器官，隨后發(fā)育成棘球蚴，在中間宿主體內(nèi)長期寄生，對宿主造成機(jī)械性損傷。中國是世界上包蟲病高發(fā)國家之一，包蟲病是中國規(guī)劃防治的五大寄生蟲病之一,分別在2012和2016年被列入 《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃(2012-2020年)》和《全國包蟲病等重點寄生蟲防治規(guī)劃(2016-2020年)》，其主要流行區(qū)在中國西部和北部廣大農(nóng)牧地區(qū)，即新疆、青海、甘肅、寧夏、西藏、內(nèi)蒙古和四川7省區(qū)[1]。包蟲病嚴(yán)重危害動物養(yǎng)殖和人類的健康，給畜牧業(yè)生產(chǎn)帶來巨大損失，嚴(yán)重制約畜牧業(yè)的發(fā)展。

鋅指蛋白指含有通過結(jié)合Zn2+穩(wěn)定的短的可以自我折疊形成“手指”結(jié)構(gòu)的一類蛋白質(zhì)。鋅指結(jié)構(gòu)指在調(diào)節(jié)蛋白的氨基酸序列中，含有若干Cys殘基的依賴鋅的核酸結(jié)合域，并通過結(jié)合鋅離子自我折疊形成短而穩(wěn)定的手指樣結(jié)構(gòu)[2]。根據(jù)鋅指蛋白保守結(jié)構(gòu)域的不同，鋅指蛋白可分為C2H2、C4、C6、C4HC3、C3HC4、C2HC、C3H及聯(lián)合型等多種類型[3]。在真核生物中，鋅指蛋白表達(dá)廣泛，參與多種重要生命過程，具有廣泛的生物學(xué)功能，如DNA識別，RNA包裝、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，蛋白折疊與裝配，脂質(zhì)結(jié)合，并在腫瘤形成和機(jī)體免疫干預(yù)等生命過程中起作用[3-4]。隨研究深入，不斷有新的發(fā)現(xiàn)，通過設(shè)計人工鋅指蛋白研究目的基因的表達(dá)調(diào)控及與核酸、蛋白質(zhì)的相互作用，有望應(yīng)用于基因治療和藥物設(shè)計[5-6]。本研究從前期對細(xì)粒棘球絳蟲原頭蚴轉(zhuǎn)錄組的測序結(jié)果中篩選出Eg-ZFP全長cDNA序列，通過生物信息學(xué)軟件對Eg-ZFP的結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行預(yù)測和分析，并通過qPCR和WISH對其在原頭蚴及成蟲的表達(dá)情況進(jìn)行初步研究，為疫苗篩選、診斷靶標(biāo)和藥物設(shè)計研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 細(xì)粒棘球絳蟲原頭蚴、成蟲 細(xì)粒棘球蚴包囊采自新疆石河子市屠宰場，在無菌條件下，使用一次性注射器刺入包囊進(jìn)行反復(fù)吹打抽取包囊液，待囊液中的原頭蚴自然沉淀后，棄去多余的囊液，使用生理鹽水和PBS對分離的PSC(原頭蟲幼)進(jìn)行3次清洗，獲得PSC。

試驗所用E.granulosus成蟲由省部共建綿羊遺傳改良與健康養(yǎng)殖國家重點實驗室提供。

1.1.2 主要試劑與儀器 TRIzol、超純RNA提取試劑盒、RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自康為世紀(jì)(CWBIO)生物科技有限公司；pMD19-T載體、T4連接酶、限制性內(nèi)切酶BamHⅠ、XhoⅠ購自大連寶生物工程有限公司；E.coliDH5α，購自北京全式金(TransGen Biotech)生物技術(shù)有限公司；質(zhì)粒抽提試劑盒、瓊脂糖凝膠回收試劑盒購自天根(TIANGEN)生化科技(北京)有限公司；羅氏LightCycler○R96 全自動熒光定量PCR儀及相關(guān)用品購自羅氏(Roche)診斷產(chǎn)品(上海)有限公司。

1.2 方 法

1.2.1 Eg-ZFP基因的克隆 使用Primer Premier 5.0對Eg-ZFP的編碼基因設(shè)計特異性引物，F(xiàn)：5′-ATGCTTCCAAGCAGTAAACAG-3′，R：5′-TTATTGAAGAGGACTGTCCATT-3′，(下劃線分別為BhmⅠ與XhoⅠ的酶切位點)，引物由上海生工生物工程(上海)有限公司合成。

取PSC和成蟲分別置于1.5 mL的EP管中，按超純RNA提取試劑盒步驟操作，提取RNA，按RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書進(jìn)行cDNA第1鏈的合成。

以原頭蚴cDNA為模板進(jìn)行Eg-ZFP編碼基因的擴(kuò)增，并用10 g/L，瓊脂糖凝膠電泳檢測。切膠回收后克隆至pMD19-T，獲得pMD19-ZFP重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化至DH5α，進(jìn)行菌液PCR檢測，提取質(zhì)粒，利用BamHⅠ和XhoⅠ雙酶切鑒定后，送至英濰捷基(invitrogen)測序。測序結(jié)果利用BLAST進(jìn)行序列比對。

1.2.2 生物信息學(xué)分析Eg-ZFP基因序列全長篩選自石河子大學(xué)動物科技學(xué)院寄生蟲學(xué)和寄生蟲病課題組前期PSC轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)。從GenBank(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/)公共數(shù)據(jù)庫中獲取到Eg-ZFP(GenBank ID: CDS15637.1)的氨基酸序列。利用ExPASy系統(tǒng)中的ProtParam數(shù)據(jù)庫(https://web.expasy.org/protparam/)對Eg-ZFP理化性質(zhì)進(jìn)行預(yù)測。使用DNAStar 軟件對該蛋白的親水性、柔性區(qū)域抗原性指數(shù)和表面可及性進(jìn)行預(yù)測。使用在線預(yù)測軟件IEDB(http://tools.immuneepitope.org/bcell/)和ABCpredABCpred 在線軟件(http://www.imtech.res.in/raghava/abcpred /)對Eg-ZFP的B細(xì)胞表位進(jìn)行預(yù)測，為提高預(yù)測準(zhǔn)確性，ABCpred 只保留得分>0.8的結(jié)果，IEDB 軟件預(yù)測結(jié)果中只保留長度>7的結(jié)果[7]。利用在線預(yù)測軟件SYPEITHI(http://www.syfpeithi.de/bin/mhcserver.dll/epitopeprediction.htm)和DNAStar軟件中的Rothbard-Tayloy法對Eg-ZFP的T細(xì)胞表位進(jìn)行預(yù)測。使用ExPASy系統(tǒng)中的SOPMA(https://npsa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/npsa_automat.pl?page=npsa_sopma.html)對Eg-ZFP的二級結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測。通過在線預(yù)測軟件SWISS-MODEL(https://swissmodel.expasy.org/)對Eg-ZFP的三級結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測。使用軟件Euk-mPLoc 2.0(http://www.csbio.sjtu.edu.cn/bioinf/euk-multi-2/)對Eg-ZFP的亞細(xì)胞定位進(jìn)行預(yù)測。由MEGA 7軟件構(gòu)建Neighbor Joining系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.2.3 實時熒光定量PCR檢測 從-80 ℃樣品保存箱中取出在TRIzol中保存的細(xì)粒棘球絳蟲原頭蚴、成蟲，按照RNA提取試劑盒操作說明提取RNA，使用RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA第1鏈。

選擇細(xì)粒棘球絳蟲甘油醛-3-磷酸脫氫酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)(NM_017008.4)作為內(nèi)參基因，使用Primer Premier 6設(shè)計qPCR引物，見表1。反應(yīng)體系為20 μL，其中SYBR GREEN MIX為10 μL，上、下游引物各0.2 μL，DNA模板1 μL，用無DNA酶水補(bǔ)至20 μL。每個樣品設(shè)計 3 個生物學(xué)重復(fù)。反應(yīng)條件： 95 ℃預(yù)變性600 s；95 ℃變性 30 s，58 ℃復(fù)性 30 s，72 ℃延伸 30 s，共45個循環(huán)；以4.4 ℃/s的速度進(jìn)行熔解曲線分析，2-ΔΔCT法計算目的基因mRNA相對表達(dá)量。

表1 熒光定量PCR引物序列Table 1 Fluorescent quantitative PCR primer sequences

1.2.4 熒光原位雜交檢測Eg-ZFPmRNA探針試劑盒購自廣州外顯子生物技術(shù)有限公司。取原頭蚴和成蟲進(jìn)行WISH。按照王正榮等[8]優(yōu)化后的WISH步驟對樣品進(jìn)行檢測。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理 使用SPSS 24.0對熒光定量PCR數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計量資料均采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，組間差異比較采用方差分析，樣本的兩兩比較采用SNK法進(jìn)行檢驗。使用 GranphPad 6進(jìn)行作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 Eg-ZFP基因克隆

PCR產(chǎn)物經(jīng) 10 g/L 瓊脂糖凝膠電泳檢測可見約 852 bp處有 1 條特異性條帶(圖1-A)，將 PCR 產(chǎn)物回收后與 pMD-19T連接，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至 DH5α，搖菌，進(jìn)行菌液 PCR，可見大小約為 852 bp 的目的條帶(圖1-B)，對重組質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切，得到852 bp 的目的條帶和2 800 bp的載體片段(圖1-C)，與預(yù)期大小一致。

A.Eg-ZFP基因PCR擴(kuò)增結(jié)果 PCR amplification of Eg-ZFP gene; B.Eg-ZFP重組菌液PCR擴(kuò)增 Amplification of Eg-ZFP recombinant bacteria; C.pMD-ZFP重組質(zhì)粒酶切鑒定 Identification of digestion of recombinant plasmid pMD-ZFP

2.2 Eg-ZFP序列分析

2.2.1 蛋白質(zhì)的理化性質(zhì) 通過ExPASy的ProtParam數(shù)據(jù)庫對該蛋白的理化性質(zhì)進(jìn)行預(yù)測，推測該蛋白的分子質(zhì)量為31.6 ku，等電點(pI)為 8.89。該蛋白在液體中的不穩(wěn)定系數(shù)為 48.35(>40)，為不穩(wěn)定蛋白。

使用 DNAStar 軟件中的 Kyte-Doolittle、Karplus-Schulz、Jameson-Wolf 和 Plot-Emini分別對該蛋白的親水性、柔性區(qū)域、抗原性指數(shù)和表面可及性進(jìn)行預(yù)測(圖 2)。其中 Kyte-Doolittle 法預(yù)測該蛋白的親水性得分較高的區(qū)域為：12～20、29～51和 93～104；Karplus-Schulz 對該蛋白的柔性區(qū)域進(jìn)行分析，Eg-ZFP可塑性較強(qiáng)的區(qū)域為：47～71、75～90、104～114、119～133、181～188、256～268 和 273～280；利用 Jameson-Wolf 對 Eg-ZFP 的抗原性指數(shù)進(jìn)行預(yù)測，其中得分較高的表位區(qū)域為：2～9、19～26、55～71、80～92、120～131、181～189、209～216、227～333和 248～282；Plot-Emini 分析 Eg-ZFP 的表面可及性，得分較高的區(qū)域有：56～71、119～130、181～188、209～213 和 254～265。綜合以上參數(shù)可知，Eg-ZFP總體呈親水性，可塑性較強(qiáng)，抗原性指數(shù)高，表面可及性較好，利于該蛋白重組表達(dá)。

圖2 DNAStar軟件預(yù)測Eg-ZFP的親水性、柔性區(qū)域、抗原性指數(shù)和表面可及性參數(shù)Fig.2 The parameters of hydrophilicity,flexible areas,antigenic index,surface probability of Eg-ZFP using DNAStar analysis

2.2.2 B細(xì)胞表位預(yù)測 抗原表位又稱為抗原決定簇，是抗原分子表面具有特殊結(jié)構(gòu)和免疫活性的化學(xué)基團(tuán)，可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體或致敏淋巴細(xì)胞[9]。通過在線預(yù)測軟件ABCpred，得到可能形成B細(xì)胞線性表位的氨基酸序列區(qū)域為34～49、49～64、63～78、78～93、101～116、169～184、217～232、249～264、258～273和266～281；使用IEDB對Eg-ZFP的B細(xì)胞表位進(jìn)行預(yù)測，預(yù)測的區(qū)域為1～7、25～28、50～93、99～134、139～140、184～187、209～210、226～231和239～244。綜合兩者的預(yù)測區(qū)域，兩者重疊區(qū)域可能形成B細(xì)胞線性表位的氨基酸序列為63～78、78～93、101～116和217～232。

2.2.3 T細(xì)胞表位預(yù)測 使用AMPHI進(jìn)行T細(xì)胞表位預(yù)測，可能形成T細(xì)胞表位的區(qū)域有9～19、55～61、79～82、94～98、125～129、130～140、146～154、155～162、168～170、189～191、218～221、239～147和153～260；Rothbard-Taylor預(yù)測可能形成T淋巴細(xì)胞抗原表位的區(qū)域為8～19、53～57、90～54、96～99、120～124、142～147、163～167、180～184、190～194、208～212、214～218、220～224、243～247、270～273。兩者重疊區(qū)即可能的優(yōu)勢性T細(xì)胞表位區(qū)域為9～19、55～57、96～98、146～147和190～191。

2.2.4 二、三級結(jié)構(gòu) 使用在線預(yù)測軟件SOPMA對Eg-ZFP的二級結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析(圖3)，得出該蛋白二級結(jié)構(gòu)中α-螺旋占28.27%，β-折疊占16.96%，β轉(zhuǎn)角占8.48%，無規(guī)則卷曲占46.29%。

圖3 SOPMA預(yù)測Eg-ZFP二級結(jié)構(gòu)Fig.3 Secondary structure of Eg-ZFP predicted by SOPMA

通過SWISS-MODEL在線軟件對Eg-ZFP的三級結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測，可見 2 個Zn2+結(jié)合位點(圖4)。

2.2.5 亞細(xì)胞定位 通過在線預(yù)測軟件Euk-mPLoc 2.0對Eg-ZFP的亞細(xì)胞定位進(jìn)行預(yù)測，Eg-ZFP可能在細(xì)胞核中發(fā)揮作用。

2.2.6 Eg-ZFP氨基酸序列的多重分析 由表 2 可知，將Eg-ZFP同其他物種的ZFP進(jìn)行序列比對，結(jié)果顯示Eg-ZFP氨基酸序列與多房棘球絳蟲具有很高的同源性(99%)，與人和犬同源程 度較低(30% 左右)(牛、羊的鋅指蛋白氨基酸序列不完整，未參與比對)。

圖4 SWISS-MODEL預(yù)測Eg-ZFP三級結(jié)構(gòu)Fig.4 Tertiary structure of Eg-ZFP predicted by SWISS-MODEL

使用MEGA軟件構(gòu)建Neighbor Joining系統(tǒng)進(jìn)化樹(圖5)。從圖中可以看出，Eg-ZFP和多房棘球絳蟲親緣關(guān)系最近，與其他扁形動物門寄生蟲屬于同一分支，人和犬屬于其他分支。

表2 細(xì)粒棘球絳蟲與其他物種間鋅指蛋白氨基酸序列同源性分析Table 2 Homologous of amino acid ofEg-ZFP with other species

圖5 MEGA7軟件構(gòu)建Eg-ZFP的分子進(jìn)化樹Fig.5 Molecular evolution tree of the Eg-ZFP using MEGA7 analysis

2.3 Eg-ZFP在不同階段的表達(dá)

采用相對定量法進(jìn)行熒光定量 PCR(圖 6)，結(jié)果顯示，溶解曲線出現(xiàn)單一的尖而窄的主峰，說明無非特異性擴(kuò)增。通過 2-ΔΔCT對原頭蚴與成蟲的Eg-ZFP表達(dá)量進(jìn)行計算發(fā)現(xiàn)，隨著E.granulosus的發(fā)育，Eg-ZFP在蟲體組織中的表達(dá)量上升，成蟲組是原頭蚴組的 2.4 倍(P<0.01)。

2.4 Eg-ZFP mRNA在蟲體的組織定位

WISH結(jié)果表明，Eg-ZFPmRNA在原頭蚴及成蟲組織中均有分布。在原頭蚴中，分布在內(nèi)部及頂突鉤上(圖 7)；在成蟲中，Eg-ZFPmRNA廣泛分布在蟲體內(nèi)部，在孕節(jié)及成節(jié)中生殖系統(tǒng)豐度較高(圖 8)。

3 討論與結(jié)論

鋅指蛋白在1983年由諾貝爾獎獲得者Klug及其同事第一次在非洲爪蟾的卵母細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子TFⅢA中被發(fā)現(xiàn)，此后，大量含有鋅指結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)被發(fā)現(xiàn)，統(tǒng)稱為鋅指蛋白[10]。鋅指蛋白參與動植物的多種生理生化過程，并起重要作用，在奶牛、水稻、秀麗隱桿線蟲、旋毛蟲等多種生物中陸續(xù)有報道[11-14]，但E.granulosus鮮見報道。E.granulosus是重要的人畜共患病之一，給人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展帶來巨大的損害，特別是包蟲病的治療仍然比較困難，因此，運用新的方法開發(fā) 新的防治措施，有助于消除包蟲病對人類健康的危害，鋅指蛋白的研究可能用于包蟲病防治。本研究成功地對Eg-ZFP基因進(jìn)行克隆鑒定，使用生物信息學(xué)技術(shù)對Eg-ZFP的理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)、功能進(jìn)行預(yù)測和分析，并在不同發(fā)育階段通過qPCR及WISH對Eg-ZFP基因進(jìn)行分析。

圖6 E.granulosus不同發(fā)育階段 Eg-ZFP mRNA的相對表達(dá)量Fig.6 The relative expression of Eg-ZFP mRNA in different stages of E.granulosus

A.Merge通道 Merge channel; B.PI通道 PI channel; C.FITC通道 FITC channel; a.實質(zhì) Parenchyma; b.排泄溝 Excretory canal; c.頂突鉤 Rostellum hook

A.Merge通道 Merge channel; B.PI通道 PI channel; C.FITC通道 FITC channel; a.頭節(jié) Scolex; b.幼節(jié) Taenia larvae; c.成節(jié) Mature proglottid; d.孕節(jié) Gravid proglottid

3.1 Eg-ZFP基因克隆及序列分析

本研究結(jié)果表明，編碼該蛋白的基因全長為852 bp，該蛋白的氨基酸序列全長為283 aa，蛋白分子質(zhì)量理論預(yù)測值為31.6 ku，等電點為8.89。該蛋白總體呈親水性，亞細(xì)胞定位于細(xì)胞核，這將有助于采用合理的方法對其進(jìn)行克隆和表達(dá)，獲得活性重組蛋白。預(yù)測發(fā)現(xiàn)該蛋白沒有信號肽和跨膜區(qū)。二級結(jié)構(gòu)預(yù)測表明，該蛋白氨基酸序列中包含有10個優(yōu)勢性抗原表位，表明該蛋白具有較好的抗原性，符合寄生蟲免疫學(xué)診斷和免疫防治候選基因的特點，推測該蛋白可作為免疫候選分子，且該蛋白中β-轉(zhuǎn)角和無規(guī)則卷曲占54.77%，兩者的結(jié)構(gòu)常盤旋、扭曲并在蛋白表面展示，可促進(jìn)抗體結(jié)合和B細(xì)胞抗原表位的形成[14]。三級結(jié)構(gòu)預(yù)測顯示，該蛋白含有2個鋅離子結(jié)合位點，含有“手指”結(jié)構(gòu)，說明該蛋白為鋅指蛋白，并且通過分析與鋅離子結(jié)合的保守性氨基酸殘基的組合可以發(fā)現(xiàn)，該蛋白屬于C2H2型的鋅指蛋白，即經(jīng)典型鋅指，該型鋅指蛋白在與核酸發(fā)生相互作用時多以單體形式，是目前研究最多最廣泛的一類鋅指，小鼠轉(zhuǎn)錄因子Zif268和人類轉(zhuǎn)錄因子SP1都屬于這類蛋白，其中SP1主要通過調(diào)控富含GC啟動子的基因表達(dá)，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞功能，如細(xì)胞復(fù)制、凋亡、分化及腫瘤形成[5,15-18]；在植物中，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)多種與植物脅迫耐受相關(guān)的植物C2H2型鋅指蛋白，在擬南芥中的STZ基因，矮牽牛中的ZPT2-3基因，水稻中的RZF71基因、RZF5基因等，這類基因能夠提高植物對脅迫的耐受能力，此類研究對利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)提高植物對逆境的耐受能力提供依據(jù)[19-20]；在寄生蟲領(lǐng)域，在水稻干尖線蟲鋅指蛋白的研究中，鋅指蛋白在生殖代謝路徑中起重要作用[21]，在旋毛蟲中發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)YVE鋅指結(jié)構(gòu)域在多種蛋白中被發(fā)現(xiàn)，如具有信號傳導(dǎo)、脂質(zhì)小泡轉(zhuǎn)運節(jié)細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)等功能的蛋白[22-23]。

3.2 Eg-ZFP氨基酸序列比對分析

本研究通過對Eg-ZFP氨基酸序列進(jìn)行比對發(fā)現(xiàn)，Eg-ZFP基因和多房棘球絳蟲親緣性最近，達(dá)到99%，其次是曼氏血吸蟲，為60% 相似性，而與人和犬的同源性相距較遠(yuǎn)；進(jìn)化樹分析同樣表明，人和犬與E.granulosus處于不同的分支，進(jìn)化關(guān)系較遠(yuǎn)，推測Eg-ZFP可作為診斷的候選分子。

3.3 Eg-ZFP mRNA不同發(fā)育階段檢測

qPCR結(jié)果表明，Eg-ZFP基因在細(xì)粒棘球絳蟲的原頭蚴和成蟲階段都有表達(dá)，并且成蟲的表達(dá)量是原頭蚴的2.4倍，說明Eg-ZFP在細(xì)粒棘球絳蟲生長發(fā)育過程中起重要作用。WISH結(jié)果表明，在原頭蚴中Eg-ZFPmRNA主要在頂突處分布較集中，在成蟲中主要在孕節(jié)中的生殖系統(tǒng)中分布較集中，再次表明Eg-ZFP可能在E.granulosus生殖和發(fā)育過程中發(fā)揮作用，與劉曉晗等[20]在水稻干尖線蟲中的鋅指蛋白功能相似，為針對以鋅指蛋白為靶點設(shè)計相應(yīng)的藥物控制或抑制E.granulosus的生殖與發(fā)育提供新的思路，結(jié)合Eg-ZFP生物信息學(xué)分析的結(jié)果，提示將Eg-ZFP作為疫苗和診斷候選分子，可能在中間宿主及終末宿主進(jìn)行免疫及診斷中均能發(fā)揮作用。

本研究對Eg-ZFP基因進(jìn)行克隆及序列分析，運用qPCR及WISH分別對Eg-ZFP在mRNA水平的轉(zhuǎn)錄情況進(jìn)行檢測，結(jié)果表明，Eg-ZFP有望成為疫苗及診斷候選分子，并且Eg-ZFP在E.granulosus的生長發(fā)育中起重要作用，以此設(shè)計藥物抑制Eg-ZFP基因的表達(dá)，將對E.granulosus的生殖和發(fā)育產(chǎn)生影響，從而達(dá)到防治的作用。