◎ 帥 云，萬(wàn)宏偉，王 娟，覃事玉

（湖南省常德市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)中心，湖南 常德 415000）

定期對(duì)檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)開(kāi)展能力驗(yàn)證是資質(zhì)認(rèn)定、機(jī)構(gòu)考核等主管農(nóng)產(chǎn)品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)的特定要求[1]。量值溯源尚難實(shí)現(xiàn)或無(wú)法實(shí)現(xiàn)時(shí)，可以利用能力驗(yàn)證來(lái)檢測(cè)測(cè)量結(jié)果的可信性[2]。

2014—2018年，常德市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)中心參加了湖南省農(nóng)委組織的農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)檢機(jī)構(gòu)檢測(cè)能力驗(yàn)證，均一次通過(guò)。通過(guò)對(duì)2018年能力驗(yàn)證進(jìn)行分析總結(jié)，現(xiàn)對(duì)檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)參加農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測(cè)能力驗(yàn)證提出方法與技巧，以供參考。

1 材料與方法

1.1 考核樣品

此次能力驗(yàn)證分為必考項(xiàng)目（34項(xiàng)）和選考項(xiàng)目（37項(xiàng)），常德市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)中心均報(bào)名參加，必考項(xiàng)目和選考項(xiàng)目有3項(xiàng)相同，共68種農(nóng)藥。本次能力驗(yàn)證發(fā)放的樣品為已破碎芹菜樣品，由湖南省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)中心統(tǒng)一制備，實(shí)驗(yàn)室發(fā)放的樣品在4個(gè)100 mL離心管中，其中1個(gè)空白樣品、3個(gè)平行樣品，每個(gè)樣品均為50 g。

1.2 主要儀器和試劑

氣相色譜儀Agilent 7890A ECD檢測(cè)器，氣相色譜儀Agilent 7890B FPD檢測(cè)器，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（LC/MS/MS）UPLC-XEVO TQD（美國(guó)waters公司）。

乙腈（色譜純）、丙酮（色譜純）、正己烷（色譜純）、甲醇（色譜純）、甲苯（色譜純）、蒸餾水（屈臣氏）。

1.3 檢測(cè)方法

采用NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留檢測(cè)方法》和GB/T 20769-2008《水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 檢測(cè)項(xiàng)目

（1）必考項(xiàng)目。甲胺磷、氧樂(lè)果、甲拌磷、對(duì)硫磷、甲基對(duì)硫磷、甲基異柳磷、水胺硫磷、樂(lè)果、敵敵畏、毒死蜱、乙酰甲胺磷、三唑磷、丙溴磷、殺螟硫磷、二嗪磷、馬拉硫磷、亞胺硫磷、伏殺硫磷、六六六、百菌清、三唑酮、異菌脲、腐霉利、五氯硝基苯、乙烯菌核利、氯氰菊酯、氰戊菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯、溴氰菊酯、氟氰戊菊酯、聯(lián)苯菊酯和氟胺氰菊酯，共34種農(nóng)藥。

（2）選考項(xiàng)目。辛硫磷、涕滅威（涕滅威砜、涕滅威亞砜）、克百威（三羥基克百威）、滅多威、甲萘威、三氯殺螨醇、腐霉利、五氯硝基苯、乙烯菌核利、多菌靈、吡蟲(chóng)啉、氟蟲(chóng)腈、啶蟲(chóng)脒、噠螨靈、苯醚甲環(huán)唑、嘧霉胺、烯酰嗎啉、蟲(chóng)螨腈、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、咪鮮胺、嘧菌酯、二甲戊樂(lè)靈、噻蟲(chóng)嗪、氟啶脲、滅幼脲、阿維菌素、除蟲(chóng)脲、滅蠅胺、甲霜靈、霜霉威、多效唑、氯吡脲、氯蟲(chóng)苯甲酰胺、氯菊酯、醚菊酯、蟲(chóng)酰肼和吡唑醚菌酯，共37種農(nóng)藥。

2 能力驗(yàn)證結(jié)果

2018年農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)能力驗(yàn)證結(jié)果見(jiàn)表1，回收率在70%～130%為合格。由表1可知，所有檢測(cè)結(jié)果均為合格。

表1 2018年芹菜中農(nóng)藥殘留定性定量檢測(cè)結(jié)果表

3 能力驗(yàn)證的具體方法與技巧

3.1 儀器狀態(tài)與條件

儀器在能力驗(yàn)證之前，需要進(jìn)行常規(guī)性的維護(hù)，使儀器的靈敏度、重復(fù)性和精密度符合要求，確保儀器能正常運(yùn)行[3-4]。然后把所有考核項(xiàng)目中的農(nóng)藥上機(jī)進(jìn)行檢測(cè)，確定農(nóng)藥在儀器上的保留時(shí)間和響應(yīng)值，并通過(guò)不斷的調(diào)整儀器參數(shù)，選擇合適的儀器條件，讓結(jié)果更加準(zhǔn)確，確保以最好的狀態(tài)迎接能力驗(yàn)證[5]。

3.2 量具、試劑及標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

在標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液配制及樣品前處理過(guò)程中，所使用的量具會(huì)對(duì)結(jié)果的準(zhǔn)確性造成影響，所以都需要進(jìn)檢定或校準(zhǔn)，包括微量移液器、瓶口分液器、大肚移液管、容量瓶，以確保移取溶液和定容體積的準(zhǔn)確性[6]。移液器和大肚移液管的使用要遵守使用規(guī)范，否則會(huì)使檢測(cè)結(jié)果有誤差。

所用的試劑如乙腈、正己烷、丙酮、甲醇、甲苯要使用色譜純，最好是使用同一廠家生產(chǎn)的試劑，方便排查儀器出現(xiàn)雜質(zhì)峰的問(wèn)題。

農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液要使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液，使用時(shí)注意有效期，最好在能力驗(yàn)證前再打開(kāi)安瓿瓶進(jìn)行配制，現(xiàn)配現(xiàn)用，確保標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液的濃度準(zhǔn)確性。

3.3 樣品前處理

樣品前處理依據(jù)NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留檢測(cè)方法》和GB/T 20769-2008《水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》進(jìn)行，為了提高實(shí)驗(yàn)得到的數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，可以按以下方法進(jìn)行。

NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留檢測(cè)方法》整個(gè)前處理過(guò)程主要是由稱取樣品，根據(jù)樣品質(zhì)量添加提取試劑乙腈，勻漿，加入7 g氯化鈉，振蕩，靜置30 min，再分別移取10 mL到2個(gè)25 mL燒杯中，水浴蒸發(fā)近干。

一個(gè)燒杯做有機(jī)磷類前處理，用1～2 mL丙酮淋洗25 mL燒杯2～3次，轉(zhuǎn)移到5 mL容量瓶，丙酮定容，用0.22 μm有機(jī)濾膜過(guò)濾至樣品瓶中，待測(cè)。

另一個(gè)燒杯做有機(jī)氯和氨基甲酸酯類前處理，先在燒杯中加入2 mL正己烷，然后將弗羅里硅柱用10 mL丙酮+正己烷（10+90）預(yù)淋洗，當(dāng)溶劑液面到達(dá)佛羅里硅柱吸附層表面時(shí)，立即倒入上述待凈化溶液，用25 mL燒杯接收洗脫液，用丙酮+正己烷（10+90）沖洗燒杯后淋洗佛羅里硅柱，少量多次，接收的洗脫液約15 mL左右。再將接收洗脫液的25 mL燒杯放在水浴恒溫振蕩器上加熱，蒸發(fā)至5 mL以下，最好到2～3 mL，然后轉(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中，用1～2 mL正己烷淋洗小燒杯轉(zhuǎn)移至容量瓶中，最后用正己烷定容至5 mL，取1～2 mL移入到2 mL進(jìn)樣瓶中，待測(cè)。

GB/T 20769-2008《水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》整個(gè)前處理過(guò)程主要是由稱取試樣，加入提取試劑乙腈，勻漿提取，加入氯化鈉，再勻漿提取1 min，振蕩，靜置30 min。然后將氨基柱放入固定架上，加樣前先用4 mL乙腈-甲苯（3+1）預(yù)洗Sep-Pak氨基柱，用雞心瓶接取濾液，當(dāng)液面到達(dá)氨基柱填充物頂部時(shí)，用移液器加入2 mL提取液，再每次用2 mL乙腈-甲苯（3+1）洗滌氨基柱3次。收集所有濾液，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，40 ℃水浴旋轉(zhuǎn)濃縮近干，加入2 mL甲醇定容，用PTFE濾膜過(guò)濾至15 mL離心管中，然后用移液器移取0.2 mL樣品溶液于進(jìn)樣瓶中，再加入0.8 mL蒸餾水，混勻，用于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC/MS/MS）的測(cè)定[7]。

整個(gè)前處理過(guò)程由一個(gè)經(jīng)驗(yàn)豐富的實(shí)驗(yàn)人員完成，另外一人進(jìn)行輔助，最大限度的減少隨機(jī)誤差。其中有幾個(gè)細(xì)節(jié)需要注意：①在吸取液體或定容時(shí)，盡量用同一方法進(jìn)行保證準(zhǔn)確，如移取10 mL提取液時(shí)，統(tǒng)一都用大肚移液管或者微量移液器，不要一個(gè)樣品用大肚移液管，另外一個(gè)又用微量移液器。②進(jìn)行有機(jī)氯測(cè)定前處理和液質(zhì)前處理時(shí)，淋洗活化固相萃取柱盡可能保證淋洗液的體積一致。③液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的前處理，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)時(shí)，雞心瓶中的濾液保留一滴不干，用雞心瓶的余熱蒸干，避免出現(xiàn)農(nóng)藥損失，影響回收率[8-9]。

3.4 定性定量方法

能力驗(yàn)證要求領(lǐng)樣后3 d之內(nèi)做出結(jié)果并上報(bào)，時(shí)間比較緊張，為保證能力驗(yàn)證順利通過(guò)，采取以下幾個(gè)措施。

（1）樣品完成前處理之后，先將空白樣品和1號(hào)樣品上機(jī)檢測(cè)，確定農(nóng)藥種類和大致濃度，再用空白基質(zhì)提取溶液配成基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，添加濃度與能力驗(yàn)證樣品濃度盡量接近，提高準(zhǔn)確度[10]。

（2）液質(zhì)進(jìn)行定量計(jì)算時(shí)，是用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液校準(zhǔn)曲線進(jìn)行計(jì)算，樣品上機(jī)濃度需要落在校準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，提高數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確度。

（3）由于此次樣品為50 g，提取溶劑為50 mL，計(jì)算結(jié)果時(shí)，需要用原始計(jì)算公式進(jìn)行計(jì)算，不能用簡(jiǎn)化公式，防止出現(xiàn)計(jì)算錯(cuò)誤。湖南省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)中心在此次能力驗(yàn)證中規(guī)定計(jì)算結(jié)果保留3位有效數(shù)字。

式（1）中，ρ-標(biāo)準(zhǔn)溶液中農(nóng)藥的質(zhì)量濃度，單位為mg·L-1；A-樣品溶液中被測(cè)農(nóng)藥峰面積；As-農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測(cè)農(nóng)藥的峰面積；V1-提取溶劑總體積，單位為mL；V2-吸取出用于檢測(cè)的提取溶液的體積，單位為mL；V3-樣品溶液定容體積，單位為mL；m-試樣的質(zhì)量，單位為g。

（4）在條件允許的情況下，可以進(jìn)行添加回收率實(shí)驗(yàn)和重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步提高數(shù)據(jù)和結(jié)果的準(zhǔn)確性。

（5）數(shù)據(jù)處理時(shí)，處理方法要保持一致，比如積分時(shí)，同一農(nóng)藥品種采用同樣的積分方法，提高結(jié)果準(zhǔn)確性[11]。避免因?yàn)樘幚矸椒ú灰恢拢瑢?duì)結(jié)果產(chǎn)生影響。

4 小結(jié)

只有熟悉整個(gè)能力驗(yàn)證流程，把控好整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程，精益求精，才能順利通過(guò)能力驗(yàn)證。