韓 彬，高燕霞，龐文哲，張軼華

（河北省藥品檢驗(yàn)研究院，河北 石家莊 050011）

卡莫司汀又稱雙氯乙亞硝脲、亞硝基脲氮芥、卡氮芥，是目前使用較廣泛的周期非特異性抗腫瘤藥。人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）規(guī)定了69種組分作為藥品中殘留溶劑的檢測對(duì)象，并規(guī)定了各組分在藥品中的殘留限度［1］。國內(nèi)生產(chǎn)企業(yè)共用到有機(jī)溶劑3種，即甲酸、乙醇和N，N-二甲基甲酰胺（DMF）?？就?2010 年版《中國藥典（二部）》［2］收載，但均未對(duì)殘留溶劑進(jìn)行控制，我國和歐洲藥典［2-3］均采用氣相色譜法測定揮發(fā)性溶劑的殘留量，也有采用氣相色譜（GS）法測定殘留溶劑的［4-5］。本研究中采用 GS法同時(shí)測定3種有機(jī)溶劑殘留量，直接進(jìn)樣方式提高了甲酸和DMF的響應(yīng)值，便于操作，可更好地控制藥品質(zhì)量?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

ThermoTRACE1310型氣相色譜儀（Thermo公司）。

1.2 試藥

甲酸（批號(hào)為 20180912），乙醇（批號(hào)為20180201）和DMF（批號(hào)為20120319）均為色標(biāo)物質(zhì)，均購自天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所；甲醇（色譜純，F(xiàn)isher chemical）；卡莫司汀原料藥由河北某藥廠提供（批號(hào)分別為150901，150902，150903）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：HP-FFAP 柱（30 m ×0.53 mm，1 μm）；檢測器：FID；進(jìn)樣量：1.0 μL；起始溫度：40 ℃ ，維持10 min，以10℃ ／min的速率升溫至200℃，維持3 min；進(jìn)樣口溫度：200℃；檢測器溫度：230℃；載氣：N2；流速：3.0 mL ／min；分流比：5 ∶1。采用直接進(jìn)樣方式，以甲醇作為溶劑，溶劑無干擾，氣相色譜圖見圖1。

圖1 氣相色譜圖

2.2 溶液制備

取甲酸、乙醇和DMF適量，精密稱定，用甲醇定量稀釋成每 1 mL 中約含甲酸 0.5 mg、乙醇 0.5 mg、DMF 0.088 mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。取卡莫司汀原料約1.0 g，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：取甲酸、乙醇和DMF適量，精密稱定，用甲醇定量稀釋成每1 mL中約含甲酸1.0 mg、乙醇 1.0 mg、DMF 0.176 mg的混合溶液，作為對(duì)照品貯備液，由對(duì)照品貯備液逐級(jí)稀釋，分別配制（按乙醇計(jì)）質(zhì)量濃度為 0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.8，1.0 g ／L 的溶液，按擬訂色譜條件分析。以峰面積（A）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（C）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見表1。

表1 3種殘留溶液的回歸方程與線性范圍（n＝7）

精密度試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按擬訂色譜條件測定，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果甲酸、乙醇、DMF峰面積的RSD分別為 0.52%，1.04%和 1.31% （n＝6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取樣品（批號(hào)為 150901）1.0 g，精密稱定，按2.2項(xiàng)下方法平行制備6份，按擬訂色譜條件測定含量。結(jié)果甲酸、乙醇、DMF的平均含量分別為2.74%，0.047%，0.0029%，RSD分別為 0.72%，1.62%和 2.31% （n＝6）。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取對(duì)照品溶液分別于 0，2，4，8，12，24 h時(shí)進(jìn)樣，測定各色譜峰峰面積。結(jié)果甲酸、乙醇、DMF峰面積的RSD分別為 0.81%，1.10%和 1.60% （n＝6），表明對(duì)照品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

檢出限與定量限確定：將對(duì)照品貯備液逐級(jí)稀釋，按信噪比（S／N）＝3計(jì)算，甲酸、乙醇和DMF檢出限分別為 0.02，0.001 6，0.002 4 μg；按S／N＝10 計(jì)算，最低定量限分別為 0.07，0.004 5，0.007 μg。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品（批號(hào)為150901）約 1.5 g，精密稱定，置 10 mL容量瓶中，共 9份，按80%，100%，120%計(jì)算回收率。分別加入對(duì)照品溶液4，5，6 mL，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。按擬訂色譜條件分析，以外標(biāo)法計(jì)算。結(jié)果見表2。

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（%，n＝9）

2.4 樣品含量測定

2010年版《中國藥典》附錄ⅧP中規(guī)定，甲酸限度為 0.5%，乙醇限度為 0.5% ，DMF 限度為 0.088% 。對(duì)3批卡莫司汀原料藥的殘留溶劑進(jìn)行測定。結(jié)果見表3?？梢姡姿釞z出量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過限度值，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)殘留溶劑的質(zhì)量控制。

表3 3批樣品殘留溶劑含量測定結(jié)果（%）

3 討論

3.1 進(jìn)樣方式和進(jìn)樣口溫度選擇

由于DMF的沸點(diǎn)較高（149～156℃），不容易充分氣化，我國藥典中明確建議采用直接進(jìn)樣法測定。文獻(xiàn)［6］報(bào)道用1，3-二甲基咪唑啉酮作為溶劑，采用頂空進(jìn)樣法測定DMF殘留量，但該溶劑昂貴，檢驗(yàn)成本較高?？就∪埸c(diǎn)較低（30～32℃），遇熱不穩(wěn)定，本研究中將進(jìn)樣口溫度分別設(shè)為160℃和200℃進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果證明，2種溫度下產(chǎn)生的熱分解產(chǎn)物均與待測物質(zhì)分離良好。為提高甲酸和DMF的靈敏度，故采用直接進(jìn)樣方式，進(jìn)樣口溫度設(shè)為200℃。

3.2 色譜柱選擇

由于甲酸和DMF極性較強(qiáng)，嘗試采用極性較強(qiáng)的色譜柱。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，使用HP-INNOWAX色譜柱（30 m×0.53 mm，3 μm）時(shí)，初始柱溫分別為 30，35，40 ℃時(shí)，乙醇峰均完全被甲醇峰包裹。使用HP-FFAP色譜柱時(shí)，待測色譜峰間分離良好，且與卡莫司汀熱降解產(chǎn)物也可達(dá)到完全分離。