陶艷華 金福源 陸曉健 徐國(guó)東

1.江蘇省蘇州市吳江區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，江蘇蘇州 215200；2.蘇州上方山森林動(dòng)物世界，江蘇蘇州 215200

黃芪多糖在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的應(yīng)用中具有調(diào)節(jié)免疫 功能的作用，對(duì)提高機(jī)體的特異性和非特異性免疫應(yīng)答能力具有積極的意義，其作用機(jī)理主要是通過(guò)提高機(jī)體內(nèi)淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率以提高機(jī)體對(duì)抗病原的應(yīng)答能力。目前，黃芪多糖已經(jīng)作為一種免疫促進(jìn)劑或免疫調(diào)節(jié)劑在人類的臨床醫(yī)學(xué)中得到了應(yīng)用。隨著近年來(lái)我國(guó)畜牧業(yè)的快速發(fā)展，專業(yè)人士對(duì)豬只免疫功能調(diào)節(jié)的研究也逐漸深入，黃芪多糖在養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用也有了更多的研究，本文主要研究了黃芪多糖的使用對(duì)仔豬免疫力以及生長(zhǎng)性能的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與試劑

試驗(yàn)選用杜×長(zhǎng)×大三元雜交仔豬，黃芪多糖注射液。

1.2 試驗(yàn)方法

選擇體重相近的試驗(yàn)仔豬共40頭，隨機(jī)平均分組，共分為4組，每組10頭，其中1組為對(duì)照組，2、3、4組均為試驗(yàn)組，并對(duì)仔豬進(jìn)行空腹稱重。此批仔豬全部在20日齡時(shí)斷奶，同時(shí)在20日齡時(shí)接種豬瘟疫苗，接種劑量為每頭仔豬4頭份。在仔豬20、35日齡時(shí)進(jìn)行給藥。其中1組仔豬每頭肌肉注射2 mL生理鹽水，2組仔豬每頭注射2 mL黃芪多糖，3組仔豬每頭注射4 mL黃芪多糖，4組仔豬每頭注射6 mL黃芪多糖。分別在仔豬20、35、50日齡時(shí)采集前腔頸動(dòng)脈血，檢測(cè)各項(xiàng)免疫指標(biāo)。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)

1）外周血嗜中性白細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。對(duì)于仔豬外周血嗜中性白細(xì)胞百分?jǐn)?shù)的測(cè)定使用硝基藍(lán)四氮唑還原試驗(yàn)，取仔豬的靜脈血1 mL，并添加抗凝素，取0.1 mL于試管底部，加入等量的硝基藍(lán)四氮唑應(yīng)用液，混合均勻后置于37℃的恒溫箱中25 min，在培育的過(guò)程中搖晃1次，隨后再置于室溫下15 min，取出上液滴于玻片，干燥后用甲醇固定，使用姬姆薩染色5 min，沖洗、干燥并用油鏡觀察樣本。若有10%以上的中性多核白細(xì)胞能還原硝基藍(lán)四氮唑，即檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，反之則為陰性。

2）豬瘟抗體檢測(cè)。將抗凝血離心后取血清，經(jīng)過(guò)56℃水浴滅活30 min，使用間接血凝試驗(yàn)進(jìn)行豬瘟抗體檢測(cè)。

3）淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率采用淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，具體使用方法為形態(tài)學(xué)檢查法。

4）平均日增重。試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)測(cè)試每頭仔豬的空腹體重，計(jì)算平均體重。試驗(yàn)結(jié)束后對(duì)每頭仔豬進(jìn)行空腹稱重，計(jì)算平均日增重。

2 結(jié)果與分析

2.1 仔豬外周血嗜中性白細(xì)胞百分?jǐn)?shù)的變化

從表1可知，在仔豬35日齡時(shí)，所檢測(cè)的外周血嗜中性白細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，3組試驗(yàn)組的結(jié)果均要高于空白對(duì)照。在使用了黃芪多糖的3組試驗(yàn)組中，3組仔豬的外周血嗜中性白細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)高于2組，低于4組；在仔豬50日齡時(shí)，3組試驗(yàn)組的外周血嗜中性白細(xì)胞百分?jǐn)?shù)均高于對(duì)照組，其中4組最為顯著。此外，在仔豬35日齡時(shí)試驗(yàn)組（2組、3組、4組）的嗜中性白細(xì)胞數(shù)量均明顯高于20日齡，但是50日齡時(shí)又呈下降的趨勢(shì)。

表1 黃芪多糖對(duì)仔豬外周血嗜中性白細(xì)胞百分?jǐn)?shù)的影響 %

2.2 仔豬豬瘟抗體水平的變化

由表2可知，在仔豬35日齡和50日齡時(shí)，試驗(yàn)組的豬瘟抗體效價(jià)均高于對(duì)照組，且差異極顯著。其中在仔豬35日齡時(shí)，3組試驗(yàn)組的檢測(cè)結(jié)果差異不顯著；在50日齡時(shí)，4組的豬瘟抗體水平顯著高于2組，與3組仔豬的差異不顯著。

表2 黃芪多糖對(duì)仔豬豬瘟抗體水平的影響 log2

2.3 仔豬淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的變化

由表3可知，在20日齡時(shí)，仔豬外周血淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率各組之間沒(méi)有顯著差異；在仔豬35日齡時(shí)，4組仔豬的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率極顯著高于對(duì)照組，3組的檢測(cè)結(jié)果顯著高于對(duì)照組，其余各組之間的差異均不顯著；在仔豬50日齡時(shí)，3組和4組的檢測(cè)結(jié)果顯著高于對(duì)照組1組。

表3 黃芪多糖對(duì)仔豬淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響 %

2.4 仔豬日增重

由表4可知，添加了黃芪多糖的3組和4組仔豬相比較對(duì)照組，平均日增重增加了13.1%、10.6%，2組仔豬相比較對(duì)照組，平均日增重增加了2.8%。

表4 黃芪多糖對(duì)仔豬日增重的影響 kg

3 討論

3.1 黃芪多糖對(duì)仔豬特異性與非特異性免疫功能的影響

嗜中性白細(xì)胞是一種免疫細(xì)胞，能夠吞噬侵入機(jī)體的細(xì)菌、真菌等，參與機(jī)體的非特異性免疫，清除病原體，增強(qiáng)機(jī)體的免疫力。嗜中性白細(xì)胞能夠還原硝基藍(lán)四氮唑，且其還原能力隨著吞噬能力的提升而提高。所以使用硝基藍(lán)四氮唑還原試驗(yàn)?zāi)軌驒z測(cè)嗜中性白細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)越高說(shuō)明嗜中性白細(xì)胞的免疫活性越高[1]。在開(kāi)始試驗(yàn)時(shí)，4組仔豬的外周血嗜中性白細(xì)胞百分?jǐn)?shù)沒(méi)有明顯的差別，在仔豬35日齡時(shí)，添加了黃芪多糖的試驗(yàn)組仔豬外周血嗜中性白細(xì)胞百分?jǐn)?shù)高于對(duì)照組；對(duì)于3組添加了黃芪多糖的試驗(yàn)組，仔豬外周血嗜中性白細(xì)胞百分?jǐn)?shù)隨黃芪多糖應(yīng)用劑量的增加而增加。由此試驗(yàn)結(jié)果可知，黃芪多糖能夠增加仔豬機(jī)體內(nèi)嗜中性白細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。此外，嗜中性白細(xì)胞能夠在有IgG抗體參與的情況下發(fā)揮ADcc作用，激發(fā)機(jī)體的特異性免疫并清除抗原異物，這也說(shuō)明了黃芪多糖不僅能夠促進(jìn)仔豬機(jī)體的非特異性免疫，還對(duì)特異性免疫有一定的促進(jìn)作用。在仔豬35日齡時(shí)試驗(yàn)組（2組、3組、4組）的嗜中性白細(xì)胞數(shù)量均明顯高于20日齡，但是50日齡時(shí)又呈下降的趨勢(shì)，可能的原因是隨著仔豬的生長(zhǎng)，血液中的嗜中性白細(xì)胞通過(guò)血液循環(huán)進(jìn)入到機(jī)體的各個(gè)組織中，導(dǎo)致外周血中的嗜中性白細(xì)胞數(shù)量有了一定程度的下降。

3.2 黃芪多糖對(duì)仔豬體液免疫功能的影響

通過(guò)間接血凝試劑盒對(duì)仔豬豬瘟抗體水平的檢測(cè)能夠分析黃芪多糖對(duì)仔豬體液免疫功能的影響。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果可知，在試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，各組仔豬的豬瘟抗體水平差異不顯著，在35日齡和50日齡時(shí)，添加了黃芪多糖的試驗(yàn)組仔豬豬瘟抗體水平顯著高于對(duì)照組，并且豬瘟抗體水平隨著黃芪多糖添加量的增加而上升，說(shuō)明黃芪多糖能夠促進(jìn)仔豬的體液免疫功能。

3.3 黃芪多糖對(duì)細(xì)胞免疫功能的影響

通過(guò)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)可以研究黃芪多糖對(duì)仔豬細(xì)胞免疫功能的影響，T淋巴細(xì)胞在機(jī)體細(xì)胞免疫中起著關(guān)鍵性作用。當(dāng)其受到PHA（植物血凝素）等因素刺激，能夠被激活，轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，當(dāng)機(jī)體被病原侵襲時(shí)，淋巴母細(xì)胞能夠轉(zhuǎn)化為致敏T淋巴細(xì)胞，參與到機(jī)體的細(xì)胞免疫中，因此，淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率越高說(shuō)明仔豬的免疫功能越強(qiáng)[2]。通過(guò)本試驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)，在試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，各組仔豬的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率差異不顯著，在仔豬35日齡和50日齡時(shí)，添加了黃芪多糖的試驗(yàn)組3組和4組的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率顯著高于空白對(duì)照組，但是2組仔豬的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率與對(duì)照組之間差異不顯著；說(shuō)明黃芪多糖在一定的應(yīng)用劑量范圍內(nèi)，能夠提高仔豬淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率，進(jìn)而增強(qiáng)仔豬的細(xì)胞免疫功能，提高免疫力。

3.4 黃芪多糖對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響

黃芪多糖對(duì)促進(jìn)仔豬營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收有積極的作用，能夠有效提高日增重，提高飼料利用率。主要是因?yàn)辄S芪多糖能夠提高仔豬回腸消化率，進(jìn)而達(dá)到促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育的目的。由本次試驗(yàn)可知，在試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，各組仔豬的平均體重沒(méi)有顯著差異，在試驗(yàn)結(jié)束后，3組仔豬和4組仔豬的日增重相比較1組和2組仔豬顯著提高。說(shuō)明一定應(yīng)用量的黃芪多糖能夠提高仔豬的日增重[3]。