徐錦龍 段寶忠 馬衛(wèi)成

作者單位：1浙江省寧波市鄞州第二醫(yī)院藥劑科（寧波315100）；2大理大學(xué)藥學(xué)院（大理 671000）

苦參堿（matrine）是從中藥苦參或山豆根中分離得到的一種生物堿，具有抑制乙肝病毒復(fù)制，改善病理性肝炎癥狀和體征的作用，近年研究表明其還具有抗腫瘤等作用。苦參具有“小毒”，經(jīng)研究苦參堿是其主要毒性成分之一，主要表現(xiàn)為神經(jīng)毒性和肝臟毒性[1-2]。目前臨床上苦參堿也被用來護(hù)肝保肝，但也有患者發(fā)生了肝功能異常[3-5]?；诖?，苦參堿對(duì)肝臟既有保護(hù)又有一定損害的雙向作用。為確保臨床使用苦參堿的安全有效，查詢了苦參堿對(duì)肝毒性（hepatotoxicity）的文獻(xiàn)，基于數(shù)據(jù)進(jìn)行分析總結(jié)，以期獲得其對(duì)肝臟的利弊關(guān)系，供參考。

1 資料來源

采用主題詞“苦參堿”、“肝毒性”、“肝損傷”、“matrine”、“hepatotoxicity”檢索 Pubmed、Embase、中國(guó)知網(wǎng)（CNKI）、萬方醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)庫（Wanfang）、維普數(shù)據(jù)庫（VIP）、中國(guó)生物醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)庫（CBM）等數(shù)據(jù)庫，均從建庫至2017年12月16日，共查到文獻(xiàn)408篇。經(jīng)過排重，閱讀文獻(xiàn)后，排除苦參堿治療肝損傷的文章，獲得研究苦參堿導(dǎo)致肝毒性的相關(guān)文獻(xiàn)8篇，其中動(dòng)物試驗(yàn)3篇，細(xì)胞試驗(yàn)5篇（排除對(duì)腫瘤細(xì)胞的毒性作用）[6-13]。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)胞試驗(yàn)結(jié)果分析 倪曉珺等[8]利用SD大鼠進(jìn)行原代肝細(xì)胞的培養(yǎng)，采用苦參堿0.0124、0.124、1.24g/L三個(gè)濃度組進(jìn)行細(xì)胞毒性的研究，作用24h后，均未發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞活力顯著性的下降，表明當(dāng)苦參堿濃度在1.24g/L以下時(shí)，對(duì)SD大鼠原代肝細(xì)胞無明顯毒性。張茜等[9-10]采用HL7702細(xì)胞進(jìn)行研究，苦參堿濃度分別為 0.625、1.25、2.5、5g/L，共同孵育24h后，1.25、2.5、5g/L三個(gè)濃度組對(duì)細(xì)胞活力有不同程度的影響并呈線性相關(guān)，其中2.5、5g/L兩組與對(duì)照組比較，對(duì)細(xì)胞活力有顯著性的影響（圖1）。5g/L的苦參堿能明顯升高細(xì)胞上清液中的天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、乳酸脫氫酶（LDH）水平。細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察也發(fā)現(xiàn)，給予HL7702細(xì)胞苦參堿24h后細(xì)胞出現(xiàn)皺縮，變圓，體積變小，倒置顯微鏡下的亮度增加，且呈劑量相關(guān)性，2.5g/L和5g/L組中，皺縮的細(xì)胞百分率分別達(dá)到80%和100%。

圖1 苦參堿對(duì)HL7702細(xì)胞活力的影響

張茜等[9-10]的研究可從圖1細(xì)胞活力情況得出：1.25g/L以下時(shí)，HL7702細(xì)胞未發(fā)現(xiàn)明顯肝毒性；1.25g/L以上時(shí)，對(duì)肝臟的毒性呈劑量相關(guān)性。除此之外，我們也發(fā)現(xiàn)，當(dāng)藥物濃度在0.625g/L反而細(xì)胞活力有所上升。為了證實(shí)這一有現(xiàn)象，石鵬等[7]研究了不同濃度苦參堿對(duì)QSG7701細(xì)胞的抑制作用，苦參堿濃度分別為 0.125、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0g/L，分別作用24、48、72h后的抑制率（轉(zhuǎn)化為細(xì)胞活力），雖然在48h時(shí)表現(xiàn)為普遍表現(xiàn)為活力下降，但在24h和72h時(shí)低濃度的苦參堿表現(xiàn)為活力增加，尤其是72h時(shí)活力上升明顯。見圖2-4。

從以上研究得出苦參堿在0.5g/L以下時(shí)具有明顯的促進(jìn)肝細(xì)胞增值作用。該研究也發(fā)現(xiàn)，對(duì)BEL-7404細(xì)胞在任何濃度下對(duì)細(xì)胞均產(chǎn)生抑制作用，研究結(jié)論為0.75g/L為最佳抗腫瘤濃度，且對(duì)正常肝細(xì)胞毒性較小。

田雄英等[6]采用苦參堿 0.125、0.25、0.5g/L 三個(gè)濃度對(duì)HL7702細(xì)胞進(jìn)行研究，表明其促細(xì)胞生長(zhǎng)作用未隨濃度增加而增加，但其對(duì)rHSC99細(xì)胞呈明顯抑制作用。見圖5。

圖2 苦參堿對(duì)QSG7701細(xì)胞活力的影響（24h）

圖3 苦參堿對(duì)QSG7701細(xì)胞活力的影響（48h）

圖4 苦參堿對(duì)QSG7701細(xì)胞活力的影響（72h）

圖5 苦參堿對(duì)HL7702細(xì)胞活力的影響

綜上所述，苦參堿在低濃度（0.5g/L以下）時(shí)具有明顯的促進(jìn)肝細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，但隨著濃度的上升，尤其是1.25g/L以上時(shí)可能有肝細(xì)胞毒性。

2.2 動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果分析 趙清梅等[11]進(jìn)行苦參堿對(duì)小鼠的亞急性毒性試驗(yàn)，劑量分別為24.7、4.9、2.47mg/kg，連續(xù)灌胃給藥30天，結(jié)果顯示：24.7mg/kg組肝臟系數(shù)顯著升高，病理剖檢發(fā)現(xiàn)也有不同程度腫大；4.9，2.47mg/kg組肝臟系數(shù)未見明顯升高，病理剖檢與對(duì)照組比較，肝臟血管周圍實(shí)質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)較完整，可見明顯的肝細(xì)胞索，距血管較遠(yuǎn)的部分肝細(xì)胞腫脹、擁擠、有空泡變化，細(xì)胞核溶解、消失，肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝細(xì)胞索紊亂、竇狀隙不明顯，有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。

梁培等[12]研究苦參堿對(duì)肝臟的影響。結(jié)果顯示，10、40mg/kg兩組連續(xù)灌胃60天，發(fā)現(xiàn)肝臟系數(shù)、AST、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、ALP和肝臟脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物（MDA）明顯升高，對(duì)肝臟超氧化物歧化酶（SOD）無明顯影響。

郭秋萍等[13]研究了200mg/kg的苦參堿連續(xù)灌胃14天，小鼠死亡率達(dá)80%。死亡小鼠的AST、ALT和ALP明顯升高，肝組織SOD和谷胱甘肽（GSH）明顯降低。肝組織HE染色發(fā)現(xiàn)死亡小鼠肝細(xì)胞發(fā)生變性、灶性壞死，而存活小鼠未見明顯異常。TUNEL法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)死亡小鼠有很多細(xì)胞核被深染為棕黃色的凋亡細(xì)胞，可見細(xì)胞縮小，間隙增大，存活小鼠可見少量細(xì)胞的細(xì)胞核被染為棕黃色。

動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果顯示，4.9mg/kg以下的灌胃給藥劑量未發(fā)現(xiàn)明顯肝毒性，而24.7mg/kg及以上肝毒性明顯。

3 討論

苦參堿是苦參的主要毒性成分之一。根據(jù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果，小鼠在4.9mg/kg以下的灌胃給藥劑量未發(fā)現(xiàn)明顯肝毒性，而24.7mg/kg及以上肝毒性明顯，毒性劑量按體表面積折算為2.47mg/kg（小鼠∶正常人＝10∶1)。而鄭瑞雯等[14]報(bào)道人體試驗(yàn)單次服用苦參堿膠丸100～400mg耐受性良好，按人體60kg計(jì)算，則為6.67mg/kg。可見，小鼠對(duì)于苦參堿肝毒性的敏感性要大于人類。

根據(jù)細(xì)胞試驗(yàn)研究，當(dāng)苦參堿濃度1.25g/L以下時(shí)，苦參堿在低濃度（0.5g/L以下）時(shí)具有明顯的促進(jìn)肝細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，但隨著濃度的上升，尤其是1.25g/L以上時(shí)呈現(xiàn)明顯的肝細(xì)胞毒性。李晏等[15]對(duì)雜種犬多次給予苦參堿緩釋片150mg得到穩(wěn)態(tài)峰濃度約為9.68μg/mL，穩(wěn)態(tài)谷濃度為5.19μg/mL，絕對(duì)生物利用度為（73.5±14.2）%，根據(jù)體表面積換算（正常人∶犬=1∶1.87），則按70kg正常人穩(wěn)態(tài)峰濃度約為7.04μg/mL，穩(wěn)態(tài)谷濃度為3.78μg/mL。這與冷凍保存L-02肝細(xì)胞推薦的苦參堿濃度6μg/mL相類似[16]。鄭瑞雯等[14]報(bào)道給予苦參堿膠丸100、200、400mg后，血藥濃度峰值分別為 （0.60±0.13），（1.21±0.33），（2.38±0.72）g/L，按 73.5%的生物利用度來計(jì)，苦參堿注射劑分別為73.5、147、294mg。故苦參堿注射劑150mg推薦量還是比較安全的，而80mg的推薦量可能更能促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。

苦參堿對(duì)肝臟細(xì)胞產(chǎn)生毒性的主要機(jī)制可能與氧化應(yīng)激和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的主要機(jī)制可能與清除自由基，保護(hù)細(xì)胞膜有一定關(guān)系，但具體機(jī)制仍不明確，需進(jìn)一步研究。

綜上所述，苦參堿在低濃度（0.5g/L以下）時(shí)具有明顯的促進(jìn)肝細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，但隨著濃度的上升，尤其是1.25g/L以上時(shí)可能具有的肝細(xì)胞毒性?；跀?shù)據(jù)，苦參堿在人體和動(dòng)物的肝毒性可能存在差異，并且在不同劑量下，苦參堿對(duì)肝臟表現(xiàn)出保護(hù)和毒性的雙向作用。