王 昕，王 衛(wèi)，唐素芳

(天津市藥品檢驗(yàn)研究院，天津 300070)

氨麻美敏片(原名：酚麻美敏片)為復(fù)方解熱鎮(zhèn)痛藥，主要用于治療和預(yù)防流行性感冒，療效確切，服用安全[1-4]。該制劑處方中分別含對乙酰氨基酚、鹽酸偽麻黃堿、氫溴酸右美沙芬和馬來酸氯苯那敏4種成分。因處方量(氨/麻/美/敏：325/30/15/2、500/30/15/2、325/30/10/2；mg/片)不同，命名為氨麻美敏片、氨麻美敏片(Ⅱ)和氨麻美敏片(Ⅲ)。該品種生產(chǎn)廠家眾多且執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)各異，現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)共有7個。其中，對乙酰氨基酚采用紫外分光光度法測定含量，麻/美/敏三成分采用高效液相色譜法測定含量，色譜系統(tǒng)均各不相同。氨麻美敏片的含量測定國內(nèi)亦有相關(guān)文獻(xiàn)報道[5，6]。《美國藥典》41版(USP41)[7]收載了含氨/麻/美/敏至少三個成分復(fù)方制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。近期，本院承擔(dān)了氨麻美敏片國家藥品標(biāo)準(zhǔn)提高工作，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)提高任務(wù)書的要求，在參考上述國內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，對現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行統(tǒng)一修訂。經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)遴選出最佳色譜系統(tǒng)，采用兩種色譜條件分別測定對乙酰氨基酚和麻/美/敏的含量，將各標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了統(tǒng)一，并完成了相應(yīng)的方法學(xué)研究試驗(yàn)。

1 儀器與試藥

1.1儀器 島津LC-20A型HPLC儀，配有SPD-20A紫外檢測器；XS205電子天平(梅特勒公司)。

1.2試藥 對乙酰氨基酚對照品(批號CN-1408015，純度為100.9%)、鹽酸偽麻黃堿對照品(批號130539，純度為99.6%)、氫溴酸右美沙芬對照品(批號ENS13429，純度為100.3%，水分為5.0%)、馬來酸氯苯那敏對照品(批號CPM1303002，純度為99.7%)均由上海施貴寶有限公司提供；酚麻美敏片(廠家A，批號160507572)、氨麻美敏片(廠家B，批號160304)、氨麻美敏片Ⅱ(廠家C，批號1608561；廠家D，批號16112702)、氨麻美敏片Ⅲ(廠家E，批號28160102；廠家F，批號16141101；廠家G，批號16400696)，簡稱：樣品1#～7#；甲醇為色譜純(德國Merck公司)；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1對乙酰氨基酚

2.1.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Agela Venusil XBP C8柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水-冰醋酸(20∶79∶1)；流速：1.0 ml/min；檢測波長：280 nm；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：10 μl。按上述色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，對乙酰氨基酚峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度>1.5，理論板數(shù)按對乙酰氨基酚峰計算>2 000。

2.1.2溶液的制備

2.1.2.1供試品溶液 取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于對乙酰氨基酚100 mg)，置50 ml量瓶中，加0.1%磷酸溶液適量，超聲使對乙酰氨基酚溶解，放冷至室溫，加0.1%磷酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 ml，置20 ml量瓶中，加0.1%磷酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.2.2對照品溶液 取對乙酰氨基酚對照品約25 mg，精密稱定，置50 ml量瓶中，加0.1%磷酸溶液適量，超聲使對乙酰氨基酚溶解，用0.1%磷酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.2.3陰性對照溶液 按照處方組成比例，制備不含對乙酰氨基酚的陰性樣品。按供試品溶液配制方法制備陰性對照液，并按上述色譜條件進(jìn)行測定。結(jié)果在與對乙酰氨基酚對照品相同保留時間處無色譜峰，說明本品中的其他成分對對乙酰氨基酚的測定無干擾。見圖1。

1.對乙酰氨基酚

2.1.3線性關(guān)系考查 取對乙酰氨基酚對照品約1.0 g，精密稱定，置200 ml量瓶中，加0.1%磷酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為溶液(1)。精密量取2.5、4、5、6、7.5和10 ml，分別置50 ml量瓶中，加0.1%磷酸溶液稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液各10 μl，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以質(zhì)量濃度(X, mg/ml)為橫坐標(biāo)、峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為Y=8.0×106X+48 640，線性范圍為0.25～1.00 mg/ml(r=0.999 9，n=6)。

2.1.4精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.1.2.2”項(xiàng)下對照品溶液10 μl，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6次，記錄峰面積。對乙酰氨基酚峰面積的RSD為0.1%，表明儀器精密度良好。

2.1.5穩(wěn)定性試驗(yàn) 取氨麻美敏片(Ⅱ)(廠家C，批號1608561)內(nèi)容物適量，按“2.1.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于放置0、2、4、8、12和24 h時按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。對乙酰氨基酚峰面積的RSD為0.1%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.6重復(fù)性試驗(yàn) 取氨麻美敏片(Ⅱ)(廠家C，批號1608561)內(nèi)容物適量，按“2.1.2.1”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液6份，再按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計算含量。結(jié)果，對乙酰氨基酚含量的RSD為0.5%(n=6)，表明本方法重復(fù)性良好。

2.1.7回收率試驗(yàn) 按七個廠家的處方配制空白全輔料，稱取適量(約相當(dāng)于1片輔料量)，置100 ml量瓶中，加0.1%磷酸溶液稀釋至刻度，搖勻，做為輔料貯備液；另精密量取“2.1.3”項(xiàng)下溶液(1)4、5和6 ml各3份置50 ml量瓶中，分別加入輔料貯備液5 ml，用0.1%磷酸溶液稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液10 μl按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，計算樣品含量并計算回收率，結(jié)果對乙酰氨基酚平均回收率為100.2%，RSD為0.4%。見表1。

2.1.8樣品含量測定 取7批樣品，按“2.1.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，計算樣品含量，結(jié)果見表2。

2.2鹽酸偽麻黃堿、氫溴酸右美沙芬和馬來酸氯苯那敏(麻/美/敏)

2.2.1色譜條件 色譜柱：phenomenex Luna Phenyl柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水(60∶40)(每100 ml混合液中含磷酸二氫鉀0.34 g、三乙基氯化銨0.3 g、十二烷基硫酸鈉0.15 g和磷酸0.1 ml)；流速：1.0 ml/min；檢測波長：214 nm；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：10 μl。

表2 樣品氨/麻/美/敏含量測定結(jié)果(n=2)

2.2.2溶液的制備

2.2.2.1供試品溶液 取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于鹽酸偽麻黃堿12 mg)，精密稱定，置100 ml量瓶中，加0.1%磷酸溶液適量，超聲使主成分溶解，放冷至室溫，加0.1%磷酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.2.2對照品溶液 取馬來酸氯苯那敏對照品約16 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為馬來酸氯苯那敏對照品溶液；分別取鹽酸偽麻黃堿對照品約24 mg、氫溴酸右美沙芬對照品約12 mg，精密稱定，置200 ml量瓶中，加水適量使溶解，精密加馬來酸氯苯那敏對照品溶液10 ml，加0.1%磷酸溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液(1)(氨麻美敏片和氨麻美敏片Ⅱ?qū)φ掌啡芤?。取馬來酸氯苯那敏對照品約20 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為馬來酸氯苯那敏對照品溶液；分別取鹽酸偽麻黃堿對照品約30 mg、氫溴酸右美沙芬對照品約10 mg，精密稱定，置250 ml量瓶中，加水適量使溶解，精密加馬來酸氯苯那敏對照品溶液10 ml，加0.1%磷酸溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液(2)(氨麻美敏片Ⅲ對照品溶液)。

2.2.2.3陰性對照溶液 按照處方組成比例，制備不含麻/美/敏的陰性樣品。按供試品溶液配制方法制備陰性對照液，并按上述色譜條件進(jìn)行測定。結(jié)果在與麻/美/敏對照品相同保留時間處無色譜峰，說明本品中的其他成分對麻/美/敏的測定無干擾。

2.2.2.4系統(tǒng)適用性溶液 取馬來酸氯苯那敏對照品約16 mg，置100 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為溶液(1)；取羥苯甲酯約20 mg、羥苯丙酯約6 mg，置100 ml量瓶中，加乙醇2 ml使溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，作為溶液(2)；分別取鹽酸偽麻黃堿對照品約24 mg、氫溴酸右美沙芬對照品約12 mg，置200 ml量瓶中，加水適量使溶解，加溶液(1)10 ml，加溶液(2)2 ml，加0.1%磷酸溶液稀釋至刻度，搖勻，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液。按上述色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，見圖2。羥苯甲酯、鹽酸偽麻黃堿、羥苯丙酯、氯苯那敏和氫溴酸右美沙芬的分離度均>1.5，理論板數(shù)按鹽酸偽麻黃堿峰計算>2 000。

1.鹽酸偽麻黃堿 2.氯苯那敏

2.2.3線性關(guān)系考查 麻/美/敏按照處方有兩個規(guī)格：30/15/2和30/10/2規(guī)格。精密稱取鹽酸偽麻黃堿對照品約120 mg、氫溴酸右美沙芬對照品約60 mg、馬來酸氯苯那敏對照品約8 mg，置100 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為溶液(1)，精密量取溶液(1)3、5、8、10、12和15 ml置100 ml量瓶中，加0.1%磷酸溶液稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液10 μl，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。以質(zhì)量濃度(X,μg/ml)為橫坐標(biāo)、峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程與線性范圍，見表3。

表3 麻/美/敏回歸方程與線性范圍

2.2.4精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.2.2.2”項(xiàng)下對照品溶液(1)10 μl，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6次，記錄峰面積。對照品溶液麻/美/敏三種成分峰面積RSD分別為0.2%、0.2%和0.5%，表明儀器精密度良好。

2.2.5穩(wěn)定性試驗(yàn) 取氨麻美敏片(Ⅱ)(廠家C，批號1608561)內(nèi)容物適量，按“2.2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于放置0、2、4、8、12和24 h時按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。麻/美/敏三種成分峰面積RSD分別為0.2%、0.3%和0.5%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.6重復(fù)性試驗(yàn) 取氨麻美敏片(Ⅱ)(廠家C，批號1608561)內(nèi)容物適量，按“2.2.2.1”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液6份，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計算含量。結(jié)果，麻/美/敏三種成分6份樣品含量的RSD分別為0.4%、0.4%和1.1%(n=6)，表明本方法重復(fù)性良好。

2.2.7回收率試驗(yàn) 按七個廠家的處方配制空白全輔料，稱取適量(約相當(dāng)于4片輔料量)，置100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，做為輔料貯備液。①30/15/2規(guī)格：精密量取“2.2.3”項(xiàng)下溶液(1)4、5和6 ml各3份置50 ml量瓶中，分別加入輔料貯備液5 ml，用0.1%磷酸溶液稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液10 μl按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，計算樣品含量并計算回收率，結(jié)果鹽酸偽麻黃堿、氫溴酸右美沙芬和馬來酸氯苯那敏平均回收率為99.7%、99.2%和99.5%，RSD分別為1.0%、0.8%和0.5%。見表4-表6。②30/10/2規(guī)格：精密稱取鹽酸偽麻黃堿對照品約120 mg、氫溴酸右美沙芬對照品約40 mg、馬來酸氯苯那敏對照品約8 mg，置100 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取4、5和6 ml各3份置50 ml量瓶中，分別加入輔料貯備液5 ml，用0.1%磷酸溶液稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液10 μl按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，計算樣品含量并計算回收率，結(jié)果鹽酸偽麻黃堿、氫溴酸右美沙芬和馬來酸氯苯那敏平均回收率分別為99.4%、99.5%和100.0%，RSD分別為0.9%、0.6%和0.6%。見表7-表9。

2.2.8樣品含量測定 取7批樣品，按“2.2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，計算樣品含量，結(jié)果見表2。

表4 30/15/2規(guī)格鹽酸偽麻黃堿回收率測定結(jié)果

表5 30/15/2規(guī)格氫溴酸右美沙芬回收率測定結(jié)果

表6 30/15/2規(guī)格馬來酸氯苯那敏回收率測定結(jié)果

表7 30/10/2規(guī)格鹽酸偽麻黃堿回收率測定結(jié)果

表8 30/10/2規(guī)格氫溴酸右美沙芬回收率測定結(jié)果

表9 30/10/2規(guī)格馬來酸氯苯那敏回收率測定結(jié)果

3 討論

3.1流動相色譜系統(tǒng)的選擇 在現(xiàn)行的7個國家標(biāo)準(zhǔn)中，麻/美/敏的含量均采用HPLC法測定，各標(biāo)準(zhǔn)的液相色譜系統(tǒng)各不相同，主要有①陽離子交換柱，以0.018 mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈(45∶55)為流動相，測定波長263 nm；②C18柱，以甲醇-乙腈-1%十二烷基硫酸鈉溶液-冰醋酸(30∶35∶30∶0.3)為流動相，測定波長265 nm；③強(qiáng)酸型陽離子交換柱，以硫酸銨溶液-甲醇(24∶76)為流動相，測定波長216 nm；④C18柱，以十二烷基硫酸鈉1.4 g，加乙腈300 ml、甲醇300 ml、四氫呋喃1.5 ml、水400 ml、二乙胺1.5 ml，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.8為流動相，測定波長215 nm。筆者將現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)與USP41方法的色譜條件進(jìn)行比較，遴選出最佳的色譜條件，該條件與USP41基本一致，供試品及對照品溶液的配制較USP41方法更為簡便。對乙酰氨基酚在國家標(biāo)準(zhǔn)中含量測定方法均為紫外分光光度法，筆者建立專屬性更強(qiáng)的HPLC法測定。由于對乙酰氨基酚的化學(xué)結(jié)構(gòu)及處方量與麻/美/敏三成分相差較多，難以在一個液相色譜系統(tǒng)中同時測定，故建立另一套HPLC系統(tǒng)測定對乙酰氨基酚的含量，兩套方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果均滿意。

3.2麻/美/敏含量測定中系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的選擇 氨麻美敏片(Ⅱ)中的廠家C處方中含有防腐劑：羥苯甲酯和羥苯丙酯，該兩輔料峰在選定的色譜條件下均出峰且緊鄰在鹽酸偽麻黃堿色譜峰的前后，故氨麻美敏片(Ⅱ)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，按處方量配制含麻/美/敏及羥苯甲酯、羥苯丙酯的混合溶液作為系統(tǒng)適用性溶液，各色譜峰均應(yīng)有效分離，以保證主成分測定的專屬性和準(zhǔn)確性。氨麻美敏片和氨麻美敏片(Ⅲ)處方中不含有影響麻/美/敏測定的輔料，故采用對照品溶液即可作為系統(tǒng)適用性溶液，三個被測成分峰與相鄰雜質(zhì)峰可達(dá)到基線分離即可。

本方法將現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行統(tǒng)一，建立了專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確性好的HPLC法，可以控制氨麻美敏片、氨麻美敏片(Ⅱ)和氨麻美敏片(Ⅲ)的質(zhì)量。