李明

(河北省滄州市食品藥品檢驗所，滄州 061000 )

水辣蓼為蓼科植物水辣蓼(PolygonumhydropiperLinn)的全草，味辛，性溫，有祛風(fēng)散瘀、祛濕止痛、消腫解毒等功效?？捎糜诹〖病⒛c胃炎、腹瀉、腳氣、疥癬、風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、跌打腫痛等； 外用治毒蛇咬傷、皮膚濕疹等[1]。研究發(fā)現(xiàn)，水辣蓼全草主要含黃酮類、揮發(fā)油類、鞣質(zhì)類等[2]，其中黃酮類成分主要為黃酮苷及苷元類，具有抗氧化、抗菌等活性[3-5]。在醫(yī)藥、食品、植物源農(nóng)藥等方面有著良好的開發(fā)前景。蘆丁、槲皮素作為對照品控制水辣蓼的質(zhì)量[6-8]，在《中華本草》中是以槲皮素作為水辣蓼的薄層對照成分。水辣蓼并無特定道地產(chǎn)區(qū)，全國大部分地區(qū)均可種植。筆者以蘆丁和槲皮素的含量為指標(biāo)對16批藥材進(jìn)行質(zhì)量檢測，并進(jìn)行聚類分析，可為水辣蓼的產(chǎn)區(qū)選擇提供參考。

1 儀器與試藥

1.1儀器 日本島津高效液相色譜儀(LC-20AD泵，SIL-20A自動進(jìn)樣器，SPD-M20A檢測器)；KQ5200DA型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；分析天平(賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司，型號：BSZZ4S，感量：0.001 mg)。

1.2試藥 16批不同產(chǎn)地來源的水辣蓼藥材(表1)；蘆丁、槲皮素對照品(中國食品藥品檢定研究院)；乙腈(Sigma公司，色譜純)；純凈水(娃哈哈集團(tuán)有限公司)；甲醇、乙醇、乙酸為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1溶液的配制

2.1.1對照品溶液的配制 精密稱取蘆丁和槲皮素對照品10 mg，用甲醇溶解于10 mL量瓶中，配制成1 mg·mL-1溶液。

2.1.2供試品溶液的制備 取干燥水辣蓼藥材粉碎，粉末過孔徑250 μm(四號)篩，精密稱1.0 g，置具塞錐形瓶中，精密加入60%乙醇50 mL，45 ℃超聲提取30 min，冷卻至室溫后，60%乙醇補(bǔ)足重量。濾過，將續(xù)濾液水浴蒸干，甲醇溶解至5 mL量瓶中，過孔徑0.45 μm微孔濾膜，續(xù)濾液進(jìn)入高效液相色譜中檢測。

表116批水辣蓼產(chǎn)地

Tab.1Originof16batchesofPolygonumhydropiperLinn

編號產(chǎn)地1廣東茂林2廣東廣州3廣西玉林4廣西南寧5貴州湄潭縣6貴州六盤水盤縣7貴州黔東南荔波縣8貴州安順編號產(chǎn)地9吉林白城10吉林通化11遼寧錦州12遼寧大連13河北白洋淀14河北邯鄲15陜西商洛16陜西漢中

2.2色譜條件 Hypersil ODS2 C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流速 1.0 mL·min-1；柱溫：25 ℃； 檢測波長：360 nm ；進(jìn)樣量：10 μL，流動相：乙腈-0.1%乙酸溶液(20：80)等度洗脫。分離色譜見圖1。蘆丁在約8 min出峰，槲皮素在約17 min出峰。

1.蘆?。?.槲皮素

圖1蘆丁、槲皮素對照品(A)和水辣蓼藥材(B)HPLC色譜圖

1.rutin；2.quercitin

Fig.1HPLCchromatogramsofrutinandquercitinreference(A)andPolygonumhydropiperLinn(B)

2.3方法學(xué)考察

2.3.1線性關(guān)系考察 精密稱取適量蘆丁、槲皮素對照品儲備液配制成蘆丁濃度5.213，10.23，20.56，50.12，100.5，200.2 μg·mL-1，槲皮素濃度5.182，10.16，20.33，50.82，101.6，203.2 μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)混合對照液。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程分別為Y=26 802X+20 123，r=0.999 5；Y=30 256X+12 456，r=0.997。結(jié)果表明蘆丁、槲皮素分別在5.213～200.2 μg·mL-1和5.182～203.2 μg·mL-1兩個范圍內(nèi)線性良好。

2.3.2重復(fù)性實驗 精密稱取同一批藥材粉末6份(編號1)，按照供試品溶液制備方法制備，HPLC測定得到6份蘆丁、槲皮素的含量，RSD分別為0.213%和0.356%，均小于3%，符合要求。

2.3.3精密度實驗 取同一對照品溶液(蘆丁50.12 μg·mL-1，槲皮素50.82 μg·mL-1)按照上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，蘆丁和槲皮素日間精密分別為1.211%和1.233%，日內(nèi)精密度分別為0.155%和0.215%。

2.3.4穩(wěn)定性實驗 取同一份對照品溶液(蘆丁50.12 μg·mL-1，槲皮素50.82 μg·mL-1)，按照上述色譜條件分別于0，4，8，12，24，48 h進(jìn)樣，RSD分別為0.233%和0.456%，表明樣品在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5回收率實驗 精取同一已知含量的水辣蓼分別置9個三角瓶中，每3份一組，按樣品中蘆丁和槲皮素含量的 120%，100%，80% 分別加入適量蘆丁和槲皮素對照品溶液，然后按“2.1.2”項方法制備，測定，蘆丁和槲皮素對照品平均加樣回收率分別為99.78%和97.281%，RSD分別為0.123%1.451%，加樣回收率合格。

2.4聚類分析 本實驗采用離差平方和方法對數(shù)據(jù)進(jìn)行聚類分析。此法效仿方差分析的基本思想，即合理的分類使得類內(nèi)離差平方和較小，而類間離差平方和較大[9]。數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析軟件為SAS 9.0版。

按照“2.2”項方法對16批藥材中蘆丁、槲皮素含量進(jìn)行測定，對比見表2。16個產(chǎn)地來源藥材蘆丁含量為0.6578～0.9975 mg·g-1，槲皮素含量為0.4987～0.686 mg·g-1。蘆丁含量最高的藥材來自1號(廣東茂林)，為(0.9975±0.0280) mg·g-1；槲皮素含量最高的藥材來自3號(廣西玉林)，為(0.7816±0.0112) mg·g-1。

將上述結(jié)果經(jīng)過聚類分析可分為兩類：1～9號一類，10～16號為一類，基本可以分為南水辣蓼(蘆丁平均含量為0.818 7 mg·g-1，槲皮素平均含量為0.585 7 mg·g-1)和北水辣蓼(蘆丁平均含量0.715 4 mg·g-1，槲皮素平均含量為0.554 9 mg·g-1)，兩類對比，南水辣蓼兩種成分含量均比北水辣蓼高。見圖2。

表216批藥材來源及成分含量

Tab.2Originandcomponentcontentof16batchesofPolygonumhydropiperLinn

產(chǎn)地編號蘆丁槲皮素10.997 5±0.028 00.678 5±0.013 120.876 4±0.020 00.597 4±0.000 930.954 2±0.045 00.781 6±0.011 240.876 3±0.059 00.527 8±0.006 150.762 4±0.032 00.521 3±0.009 960.685 3±0.032 00.498 7±0.008 770.876 2±0.040 00.612 3±0.012 080.657 8±0.037 00.541 2±0.004 090.682 3±0.051 00.512 3±0.026 0100.647 2±0.004 00.459 1±0.031 0110.715 6±0.016 00.612 3±0.015 0120.714 3±0.004 00.458 9±0.013 0130.756 8±0.049 00.513 8±0.003 0140.749 5±0.040 00.612 3±0.014 0150.697 8±0.037 00.542 1±0.006 0160.726 8±0.017 00.685 6±0.009 0

圖2 16批水辣蓼聚類分析

Fig.2Clusteringanalysison16batchesofPolygonumhydropiperLinn

3 討論

中藥材辣蓼通常指蓼科植物水辣蓼或旱辣蓼的干燥全草，產(chǎn)于我國南北各地，多生于溪邊、山坡、濕地[10]。本實驗研究了解不同產(chǎn)地水辣蓼中兩種黃酮成分含量差異，當(dāng)聚類分析分成兩類時，按地區(qū)分為南北兩大類，南水辣蓼含量更高。其中9號產(chǎn)地為吉林白城濕地附近，含量較北水辣蓼高，可被分到第一類中。當(dāng)聚類分析分為四類時，即1～4號產(chǎn)地、5～9號產(chǎn)地、10～12號產(chǎn)地、13～16號產(chǎn)地，產(chǎn)地明確被分為我國東南、西南、東北、中部地區(qū)，其中西南貴州地區(qū)水辣蓼蘆丁、槲皮素含量最高。提示濕度高的地區(qū)水辣蓼質(zhì)量更高，為水辣蓼的種植和質(zhì)量提升提供理論依據(jù)。