摘要：奶牛乳腺炎作為一種比較常見(jiàn)的奶牛疾病，會(huì)影響奶牛產(chǎn)奶量，導(dǎo)致奶牛養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益不斷降低，會(huì)喪失泌乳功能而被迫淘汰奶牛，且會(huì)對(duì)牛奶品質(zhì)造成影響，不利于人們的身體健康。根據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，該病的發(fā)生率大約控制在25-60%之間，每年所造成的經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)20億美元。

關(guān)鍵詞：中草藥;奶牛;臨床型乳腺炎病原菌;體外抑菌試驗(yàn)

臨床上關(guān)于奶牛乳腺炎的治療，主要是藥物療法，即采用抗生素、激素與化學(xué)合成藥，其中抗生素發(fā)揮了主要作用，但是也帶來(lái)各種問(wèn)題，如造成內(nèi)分泌紊亂、增加耐藥菌株、殘留過(guò)多的抗生素與獸藥等，進(jìn)而會(huì)對(duì)人類身體健康造成嚴(yán)重威脅。按照國(guó)家相關(guān)衛(wèi)生指標(biāo)，要求牛奶中不殘留任何抗生素，因此這對(duì)于治療奶牛乳腺炎提供了一定挑戰(zhàn)。當(dāng)下，關(guān)于該病的治療，中藥治療已經(jīng)引起國(guó)內(nèi)外專家的高度重視，其除了具有一系列特點(diǎn)之外還具有藥物、營(yíng)養(yǎng)的雙重功能，如消炎、抗菌、無(wú)毒或低毒、低殘留或無(wú)殘留等。我國(guó)積極的研究了中藥治療效果，認(rèn)為該病的產(chǎn)生與濕、痰、氣、血郁結(jié)不散，化而為炎造成的，因此本文在分析中草藥的體外抗菌活性時(shí)本著清熱解毒、消腫止痛、通經(jīng)活絡(luò)等原則，為疾病的治療提供科學(xué)的理論依據(jù)。

一、材料與方法

（一）菌種來(lái)源與中藥

本次研究選取2個(gè)牛場(chǎng)中的6個(gè)供試奶牛場(chǎng)臨床型乳腺炎奶羊，在此基礎(chǔ)上積極的開(kāi)展乳腺病原學(xué)鑒定，將7種致病菌保存下來(lái)。

麻黃、桔梗、大貝、蒲公英、白花蛇草、甘草、板藍(lán)根、半枝蓮等。

（二）方法

（1）中藥制備

水提法：取一定量的單味中草藥，用去離子水進(jìn)行半個(gè)小時(shí)的浸泡，然后加熱到沸騰狀態(tài)后用文火進(jìn)行半個(gè)小時(shí)的煎煮，過(guò)濾時(shí)使用8層紗布，反復(fù)進(jìn)行2次煎煮，合并濾液，濃度控制為1g/ml，放在100℃的流通蒸汽上進(jìn)行15分鐘滅菌，然后保存在4℃的冰箱中備用。

（2）培養(yǎng)基制備

①關(guān)于固體、液體培養(yǎng)基的配制需要采用常規(guī)方法。鋪板時(shí)，采用高壓滅菌的方式處理培養(yǎng)基，降低溫度到50-60℃之間，將板趁熱鋪到無(wú)菌超凈工作臺(tái)內(nèi)，導(dǎo)入12cm直徑的滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)（21個(gè)），將蓋子蓋上并保存在無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)備用。

②鏈球菌的培養(yǎng)，即需要將2%小牛血清加入到部分固體、液體培養(yǎng)基中，普通瓊脂基經(jīng)過(guò)高壓滅菌后進(jìn)行冷卻，溫度維持在50℃左右，然后將2%的新鮮小牛血清加入后均勻的混合，同樣需要趁熱完成鋪板工作，倒入9cm直徑的滅菌培養(yǎng)平皿（7個(gè)），保存在無(wú)菌超凈工作臺(tái)內(nèi)待用。

③關(guān)于酵母菌的培養(yǎng)，需要通過(guò)制作馬鈴薯培養(yǎng)基的方式。即鋪板時(shí)，高壓滅菌培養(yǎng)基，降低溫度在50-60攝氏度，趁熱做好鋪板工作，倒入7個(gè)直徑12cm的滅菌培養(yǎng)平皿中，蓋蓋保存在無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)。

（3）1.2.3接種物制備

在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上取正在生長(zhǎng)的試驗(yàn)菌，使用接種環(huán)挑取3-5個(gè)形態(tài)具有相似性的待檢菌落，在水溶酪蛋白肉湯4-5ml中接種，在35℃的條件下進(jìn)行2-6小時(shí)的孵化，涂菌時(shí)使用生理鹽水或MH肉湯校正菌液濃度。

（4）涂菌

取滅菌平皿培養(yǎng)基20個(gè)，直徑為12cm，編號(hào)分為5組，分別接種0.15ml的金色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、大腸桿菌、沙門氏菌以及綠膿桿菌，領(lǐng)取一個(gè)AE平皿不進(jìn)行涂菌處理，僅作為空白對(duì)照。

取平皿培養(yǎng)基5個(gè)，直徑9cm，接種0.25ml稀釋的鏈球菌，編寫F1-F5，其中空白對(duì)照的為F5、不涂菌;在培養(yǎng)基表面使用涂菌棒均勻的涂抹菌液。

取平皿培養(yǎng)基5個(gè)，直徑12cm，接種0.25ml稀釋的酵母菌，編號(hào)G1-G5，其中G5不涂菌、為空白對(duì)照。

（5）打孔

在涂菌瓊脂培養(yǎng)基上使用3cm打孔器均勻打孔，編號(hào)，其中空白對(duì)照為AE、F5和G5，保證孔徑大小與深度一致，在酒精燈上略微的加熱打好的孔，熔化局部培養(yǎng)基使其重新凝固并緊密結(jié)合平皿底壁，避免底部縫隙中流出加入的藥液而影響試驗(yàn)結(jié)果[3]。

（6）加藥

將3種藥加入到平皿中，每種藥液加入兩孔為平行樣，每孔加入藥液20ul，為保證結(jié)果的準(zhǔn)確性需要平放平皿避免溢出藥液，在37℃恒溫箱中放置進(jìn)行24小時(shí)的培養(yǎng)。

（7）觀察與記錄

對(duì)抑菌圈直徑大小進(jìn)行觀察、測(cè)量，每孔不同方向進(jìn)行2次測(cè)量，最終取4次結(jié)果的平均值。

（8）判定標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)《中藥制備經(jīng)驗(yàn)錄》中關(guān)于“中草藥抑菌作用實(shí)驗(yàn)”中提出的方法。

二、結(jié)果

對(duì)于不同菌株抑制效果而言，盡管采用同樣的中草藥但是會(huì)取得不同效果，詳情如下表1：

三、討論

當(dāng)下，臨床上關(guān)于中草藥對(duì)病原菌的體外抑菌試驗(yàn)研究報(bào)道較多，采用多種研究方法，如紙片抑菌法、管碟法、平皿稀釋法等，對(duì)于中草藥抑菌活性主要定性分析居多。本次研究在定量分析中草藥體外抗菌活性時(shí)采用試管2倍稀釋法，能夠提供一定理論依據(jù)來(lái)制定科學(xué)的中草藥制劑組方。同時(shí)，抗生素是治療、預(yù)防各種感染性疾病的主要藥物，能夠?qū)Σ≡⑸锂a(chǎn)生強(qiáng)烈的殺傷作用，且對(duì)人體產(chǎn)生的毒副作用較大，甚至?xí){到生命安全?；诖?，需要在掌握適應(yīng)癥的基礎(chǔ)上，對(duì)抗生素進(jìn)行正確、合理的使用呢，在天然藥物中尋找理想的抗菌藥物，即極具抗菌作用和毒副作用小的，在傳統(tǒng)中醫(yī)藥藥物中對(duì)于新型抗菌藥物的尋找是一種良好的途徑。

縱觀流行病學(xué)的調(diào)查結(jié)果可知，臨床型乳腺炎奶牛的表現(xiàn)以乳房炎癥反應(yīng)為主，如發(fā)病、疼痛、腫脹、觸診腫塊等，嚴(yán)重者會(huì)出現(xiàn)全身癥狀、乳汁不正常，存在不同程度的凝塊、絮片，重者會(huì)出現(xiàn)黃色漿液性物質(zhì)。同時(shí)，疾病的產(chǎn)生受各種因素的影響，如環(huán)境衛(wèi)生、飼養(yǎng)管理、季節(jié)、胎數(shù)、泌乳月等，其中發(fā)生率最高的當(dāng)屬第三季度、三胎，頭胎發(fā)生率低;牛易感性最強(qiáng)的泌乳月當(dāng)屬3-4月、第9月。根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)于臨床經(jīng)常使用的抗菌藥物所分離菌株所產(chǎn)生的耐藥性較強(qiáng)，且抗生素殘留會(huì)造成較大的食品安全隱患，為此人們需高度重視抗生素濫用，在免疫預(yù)防時(shí)積極的接種疫苗。但是，基于乳腺病原比較復(fù)雜，不利于有效的研制與選擇疫苗，為此在今后的工作中應(yīng)該重視消毒、飼養(yǎng)管理共組，對(duì)疫苗、抗生素進(jìn)行正確合理的選擇，制定綜合防治措施積極有效的預(yù)防奶牛乳腺炎。

結(jié)語(yǔ)：

在奶牛場(chǎng)中作為常見(jiàn)、危害最大的一種疾病為奶牛乳腺炎，由此會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)乳量不斷降低，還會(huì)對(duì)乳品質(zhì)造成嚴(yán)重影響，尤其是隱性乳腺炎，因在臨床上變化不明顯而很難被發(fā)現(xiàn)。由于長(zhǎng)期使用藥物治療，促使致病菌產(chǎn)生的耐藥性很強(qiáng)，如大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖苷類、青霉素類、頭孢類、喹諾酮類藥物，為此本文專門探究了中草藥對(duì)奶牛臨床型乳腺炎病原菌的體外抑菌試驗(yàn)。

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作者簡(jiǎn)介：

吳姣，女，漢族，陜西渭南人，碩士，助教。