張 馳

（華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北 武漢 430030）

現(xiàn)有的五分類血液分析儀大多采用射頻/直流電檢測(cè)方法，配合熒光染色技術(shù)，通過激光照射，在鞘流液的作用下，收集不同角度的吸收光和發(fā)散光，從而對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分類。然而，嗜酸性粒細(xì)胞（eosinophil，EO）顆粒減少會(huì)改變吸收光和發(fā)散光的強(qiáng)度，使細(xì)胞坐標(biāo)落在非預(yù)期區(qū)域內(nèi)，從而導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤。本研究對(duì)1例EO顆粒減少患者2種血液分析儀的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了分析、比較。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

患者，男，49歲，因皮膚瘙癢伴紅疹至華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院門診就診，并診斷為特發(fā)性EO增多癥，該患者EO胞質(zhì)內(nèi)嗜酸性顆粒減少，總免疫球蛋白E（immunoglobulin E，IgE）水平為1 345 IU/mL。

1.2 儀器與試劑

XE-5000全自動(dòng)血液分析儀（簡(jiǎn)稱XE-5000）（日本Sysmex公司）及配套試劑，該儀器通過核酸熒光染色及半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞術(shù)對(duì)白細(xì)胞（white blood cell，WBC）進(jìn)行檢測(cè)和分類[1]；CELL-DYN Sapphire血液分析儀（簡(jiǎn)稱Sapphire）（美國(guó)Abbott公司）及配套試劑，該儀器采用多角度偏振光散射法，通過0°/7°散射光來獲得散點(diǎn)圖，從而對(duì)WBC進(jìn)行檢測(cè)和分類[2]；DM1000顯微鏡（德國(guó)Leica公司）。

1.3 方法

采集研究對(duì)象血液標(biāo)本，并采用乙二胺四乙酸二鉀進(jìn)行抗凝處理，所有檢測(cè)在2 h內(nèi)完成。XE-5000和Sapphire均采用普通閉合模式完成檢測(cè)。按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第3版）[3]要求制作血涂片，并進(jìn)行染色。采用人工鏡檢連續(xù)分類200個(gè)WBC，并計(jì)算中性粒細(xì)胞（neutrophil，NEUT）百分比（NEUT%）、淋巴細(xì)胞（lymphocyte，LYM）百分比（LYM%）、單核細(xì)胞（monocyte，MO）百分比（MO%）、EO百分比（EO%）、嗜堿性粒細(xì)胞（basophil，BA）百分比（BA%）。

2 結(jié)果

2.1 WBC分類結(jié)果

XE-5000和Sapphire均未檢出EO，而人工鏡檢EO%檢測(cè)結(jié)果為47.5%；XE-5000和Sapphire LYM%、MO%檢測(cè)結(jié)果與人工鏡檢結(jié)果基本一致，而NEUT%與人工鏡檢NEUT%+EO%結(jié)果基本吻合。見表1。

2.2 WBC散點(diǎn)圖

XE-5000 WBC散點(diǎn)圖顯示，有1個(gè)細(xì)胞群（天藍(lán)色部分）與NEUT細(xì)胞群部分重合，而預(yù)期EO區(qū)域卻無散點(diǎn)分布，說明儀器將EO顆粒減少的細(xì)胞群錯(cuò)認(rèn)為NEUT細(xì)胞群，見圖1。Sapphire WBC散點(diǎn)圖顯示，有1個(gè)細(xì)胞群（白色部分）與NEUT細(xì)胞群（黃色部分）大部分重合，而預(yù)期EO區(qū)域卻無散點(diǎn)分布，見圖2。人工鏡檢發(fā)現(xiàn)EO的嗜酸性顆粒明顯減少，見圖3。

表1 XE-5000和Sapphire檢測(cè)結(jié)果與人工鏡檢結(jié)果的比較 （%）

圖1 XE-5000研究對(duì)象與正常人群WBC散點(diǎn)圖

圖2 Sapphire研究對(duì)象與正常人群WBC散點(diǎn)圖

圖3 人工鏡檢研究對(duì)象與正常人群EO形態(tài)比較

3 討論

EO增多常見于寄生蟲病、過敏性疾?。ㄖ夤芟?、壞死性血管炎及藥物過敏反應(yīng)）及某些血液病[4]。該患者人工鏡檢結(jié)果提示EO%明顯增高（47.5%），總IgE水平也高達(dá)1 345 IU/mL，皮膚出現(xiàn)瘙癢伴紅疹情況，提示機(jī)體可能出現(xiàn)嚴(yán)重過敏反應(yīng)。雖然該患者EO胞質(zhì)內(nèi)嗜酸性顆粒減少明顯（圖1），看似NEUT顆粒相對(duì)增多，但是仍可通過人工鏡檢根據(jù)顆粒形態(tài)對(duì)二者進(jìn)行仔細(xì)辨別（NEUT顆粒細(xì)小、均勻，EO顆粒粗大、折光性強(qiáng)）。這雖不影響人工辨識(shí)，但對(duì)儀器檢測(cè)卻有致命的干擾。程翔等[5]的研究結(jié)果表明，亞硝酸鹽中毒可使檢測(cè)對(duì)象NEUT呈弱堿性，NEUT顆粒呈嗜酸性，導(dǎo)致XN-3000全自動(dòng)血液分析儀（日本Sysmex公司）將其誤認(rèn)為EO。當(dāng)NEUT和EO胞質(zhì)內(nèi)顆粒發(fā)生改變時(shí)，儀器無法對(duì)二者進(jìn)行辨別，須從檢測(cè)原理上進(jìn)行分析。

前向散射光可用來反映WBC體積大?。粋?cè)向散射光可反映胞質(zhì)內(nèi)顆粒數(shù)量；側(cè)向熒光可反映DNA和RNA的含量。嗜酸性顆粒因其大而圓，比其他細(xì)胞內(nèi)顆粒更有折光性，故在5類WBC中側(cè)向散射光最大，而核酸物質(zhì)卻與NEUT相當(dāng)，所以有著類似的側(cè)向熒光。嗜酸性顆粒減少EO的側(cè)向散射光小于正常EO，卻與NEUT的側(cè)向散射光較為接近，使得該類細(xì)胞散點(diǎn)坐標(biāo)與NEUT散點(diǎn)坐標(biāo)重合，故儀器無法清楚地區(qū)分這2群細(xì)胞（圖1）。Sapphire通過多角度偏振光散射法對(duì)WBC進(jìn)行分類，在鞘流液作用下單個(gè)血細(xì)胞通過激光束照射，在各個(gè)方向產(chǎn)生散射光，儀器對(duì)多個(gè)角度散射光信號(hào)進(jìn)行收集，其中0度為前向散射光，可反映細(xì)胞大小，7度為狹角散射光，可反映細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)和復(fù)雜性。EO因體積略小于NEUT，細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)較LYM稍復(fù)雜，而位于LYM群與NEUT群中間。該患者EO胞質(zhì)內(nèi)嗜酸性顆粒減少，同時(shí)中性顆粒相對(duì)增多，細(xì)胞內(nèi)復(fù)雜性增強(qiáng)（7度狹角散射光更強(qiáng)），且細(xì)胞體積比正常EO更大（0度前向散射光更強(qiáng)），故該細(xì)胞群在WBC散點(diǎn)圖中的所在區(qū)域與NEUT細(xì)胞群區(qū)域基本重合，導(dǎo)致儀器無法對(duì)二者進(jìn)行區(qū)分（圖2）。

綜上所述，為了避免EO顆粒減少或缺失而產(chǎn)生的血液分析儀EO假性減少的情況，需對(duì)NEUT%異常增高的標(biāo)本結(jié)合WBC散點(diǎn)圖進(jìn)行分析。當(dāng)NEUT散點(diǎn)群疑似與另一細(xì)胞群部分重疊而導(dǎo)致散點(diǎn)群形態(tài)不規(guī)則（非橢圓形）時(shí)，須手工推片復(fù)檢，以得到準(zhǔn)確、可靠的檢測(cè)結(jié)果。