李昕竺 曾先富 熊維全

（成都市農(nóng)林科學(xué)院園藝研究所，四川成都611130）

金針菇（Flammulina velutipes），又稱冬菇、樸菇、毛柄金錢菌等，其菌蓋滑潤、菌柄細(xì)長脆嫩，形美味鮮，營養(yǎng)價值和保健功效顯著，且具益智作用和觀賞價值，開發(fā)利用前景廣闊[1]。我國已開發(fā)出很多金針菇的休閑即食食品及飲料，如罐頭、火腿腸、醬制品、果脯、果凍、酸奶、乳飲料、發(fā)酵酒、保健飲料等[2-4]。

當(dāng)前金針菇加工企業(yè)所用加工原料主要為工廠化生產(chǎn)及常規(guī)袋料栽培，并以菇體顏色為重要商品性狀。以外觀和商品性狀作為篩選原料的重要指標(biāo)，忽視了原料口感，出現(xiàn)加工原料與加工要求脫節(jié)、產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定、產(chǎn)品口感不足等一系列問題，這些已成為制約我國金針菇加工產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸。

筆者在前期篩選出口感脆嫩、產(chǎn)量較高的F3-1和色澤鮮亮的川金7號的基礎(chǔ)上[5]，進(jìn)行兩個菌株單孢雜交，以咀嚼口感為主要指標(biāo)，兼顧營養(yǎng)和產(chǎn)量指標(biāo)，初步獲得品質(zhì)優(yōu)良的新加工專用金針菇菌株。

1 材料與方法

1.1 供試材料

①金針菇菌株：黃色金針菇F3-1（成都市農(nóng)林科學(xué)院保藏，試驗(yàn)編號c表示），白色金針菇川金7號（四川省農(nóng)科院品種，試驗(yàn)編號d表示）。②培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基（去皮馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂粉20 g，蒸餾水1000 mL，pH 7）。栽培培養(yǎng)料為玉米芯42%，麩皮20%，玉米粉5%，細(xì)木屑30%，白糖1%，石膏1%，石灰1%。料含水量60%，初始pH6.5。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 孢子的分離和單核菌絲的鑒定

將生長成熟的金針菇鮮子實(shí)體于無菌環(huán)境下剪去菌柄，有菌褶的一面平貼于滅菌的培養(yǎng)皿上，放置于18～20℃的無菌室，保持環(huán)境濕度，過夜收集孢子印[6]。以梯度稀釋法將孢子液濃度稀釋至約103個∕mL，兩個親本各取100 μL孢子液均勻涂布于PDA平板培養(yǎng)皿中，倒置放于24℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～5 d。觀察孢子萌發(fā)情況，待培養(yǎng)基上出現(xiàn)肉眼可見微小菌落時，用接種針挑取單個菌落轉(zhuǎn)接于PDA平板上，將滅菌的蓋玻片斜插入菌落邊緣培養(yǎng)基中，在24℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～3 d，待菌絲爬上蓋玻片后取出蓋玻片，用乳酸酚棉藍(lán)試劑染色，在普通光學(xué)顯微鏡下觀察有無鎖狀聯(lián)合，菌絲無鎖狀聯(lián)合的為所需單核體。

1.2.2 單核菌絲配對雜交

將經(jīng)過顯微鏡檢查的金針菇c和d的單核體兩兩配對，在無菌條件下用滅菌的吸管吸取直徑約0.8 cm的菌塊于PDA平板上培養(yǎng)，兩個菌塊間距1 cm，24℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)3～5 d。當(dāng)兩個融合的單菌落中間形成突起的融合線時，在無菌環(huán)境下挑取融合處菌絲到另一PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，亦將滅菌的蓋玻片斜插入菌落邊緣培養(yǎng)基中，在24℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～3 d，待菌絲爬上蓋玻片后取出蓋玻片，用單核菌絲檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)融合是否成功，將有鎖狀聯(lián)合或雙核的菌絲轉(zhuǎn)接到PDA斜面培養(yǎng)基中。

1.2.3 袋栽試驗(yàn)初篩

圖1 雜交菌株鎖狀聯(lián)合

表1 19個雜交菌株與親本菌絲生長速度比較

采用14 cm×33 cm的栽培袋，每袋裝折干料250 g，121℃滅菌2 h。每個雜交種直接用母種接種5袋，25℃培養(yǎng)室恒溫黑暗培養(yǎng)。待菌絲長滿菌袋后，移入菇房按照金針菇子實(shí)體生長要求進(jìn)行出菇管理。測定記錄各菌株子實(shí)體成熟時間、產(chǎn)量、菌蓋直徑、菌柄直徑和長度、基部褐變等數(shù)據(jù)，綜合比較初步篩選出商品外觀較優(yōu)良的雜交菌株。

1.2.4 優(yōu)良雜交菌株復(fù)篩

采用1100 mL塑料栽培瓶，每瓶裝料折干約350 g，121℃滅菌2 h，待瓶體冷卻后接種。兩個親本及優(yōu)良雜交種各接種10瓶，25℃培養(yǎng)室恒溫黑暗培養(yǎng)45 d，移至出菇房搔菌出菇。采用中央控制系統(tǒng)自動控制出菇溫度8～12℃、相對濕度80%～85%、CO2濃度為0.15%～0.25%。測定記錄金針菇子實(shí)體單瓶產(chǎn)量、菌蓋直徑、菌柄直徑和長度、基部褐變等數(shù)據(jù)，同時送樣檢測脆度值和營養(yǎng)成分。

2 結(jié)果與分析

2.1 金針菇單核菌絲雜交及雜交菌絲的鑒定

通過孢子稀釋培養(yǎng)、單菌落挑取、鏡檢，獲得36個c菌株的單核體和24個d菌株的單核體。

將獲得的c和d的單核體進(jìn)行輪交，挑取融合部位菌絲在顯微鏡下檢測鎖狀聯(lián)合，觀察到的鎖狀聯(lián)合如圖1。

由圖1可見，雜交后形成的雙核菌絲鎖狀聯(lián)合明顯。在864對雜交組合中觀察到鎖狀聯(lián)合的有452對，配對成功率52.31%。

2.2 袋栽試驗(yàn)初篩結(jié)果

袋栽試驗(yàn)中452株雜交子代正常出菇的有440株，綜合子實(shí)體成熟時間、產(chǎn)量、菌蓋直徑、菌柄直徑和長度、基部褐變等數(shù)據(jù)，篩選出黃色、菌柄較細(xì)且白、菌蓋包裹緊實(shí)、基部褐變少的雜交菌株19個，其子實(shí)體形態(tài)如圖2所示。

2.3 優(yōu)良雜交后代的評價與篩選

2.3.1 親本及優(yōu)良雜交子代菌絲生長速度

優(yōu)良雜交菌株用塑料瓶栽培復(fù)篩，測定其菌絲生長速度，與親本菌株菌絲生長速度比較結(jié)果如表1。

由表1可以看出，雜交親本c和d在出菇培養(yǎng)基上的菌絲生長速度分別為2.28 mm∕d和2.16 mm∕d，菌絲長勢較好。雜交子代菌絲生長速度較兩個親本快的菌株有 325、371、389、503、567、607，其中371、503、567的菌絲生長極為旺盛。

2.3.2 親本及優(yōu)良雜交菌株的農(nóng)藝性狀

復(fù)篩中親本及優(yōu)良雜交菌株的農(nóng)藝性狀測定結(jié)果見表2。

圖2 初篩優(yōu)良雜交菌株子實(shí)體

表2 19個雜交菌株與親本的農(nóng)藝性狀比較

由表2可見，與親本菌株相比，雜交子代基部褐變程度降低，只有編號375和743菌株基部褐變相對較多。19個雜交子代第一潮菇產(chǎn)量變幅較大，介于60～140 g∕瓶，其中產(chǎn)量介于兩個親本菌株之間的雜交菌株有19、241、371、375、450、503、567。綜合子實(shí)體形態(tài)等因素，得出雜交子代中性狀較優(yōu)良的菌株有19、241、371、503、567號。

表3 19個雜交菌株及親本子實(shí)體主要營養(yǎng)成分及脆度值

2.3.3 親本及優(yōu)良雜交菌株的營養(yǎng)成分及脆度

采集親本及優(yōu)良雜交子代菌株的子實(shí)體送到專業(yè)質(zhì)量檢測機(jī)構(gòu)進(jìn)行營養(yǎng)成分和脆度值的檢測。

從表3可見，雜交子代菌株子實(shí)體脆度值高于兩個親本子實(shí)體脆度值的有54、300、336、371、389、504、567，其中編號371的菌株子實(shí)體脆度值高出親本2倍多。子實(shí)體蛋白質(zhì)含量介于親本c和d菌株含量值之間的有 19、325、336、371、389、429、450、567。子實(shí)體氨基酸總量介于親本c和d菌株含量值之間，或者是高于兩個親本子實(shí)體含量值的有19、54、299、300、325、371、429、503、567、607、714、743。由此可見，既提升了子實(shí)體脆度又基本保持了子實(shí)體營養(yǎng)價值的雜交子代菌株為371和567。

3 小結(jié)與討論

綜合菌絲生長速度、子實(shí)體形態(tài)、產(chǎn)量、脆度值和營養(yǎng)成分等指標(biāo)，初步篩選出雜交子代菌株371和567，下一步還將開展分子實(shí)驗(yàn)獲得其與親本菌株之間的差異性，通過反復(fù)栽培確定其穩(wěn)定性，最終實(shí)現(xiàn)在生產(chǎn)上推廣應(yīng)用。