劉文術，王 賀，牛佳義，林 楊，江 威

（1．黑龍江省齊齊哈爾市第一醫(yī)院急診內科，黑龍江 齊齊哈爾 161000；2．黑龍江省齊齊哈爾市第一醫(yī)院腦外科，黑龍江 齊齊哈爾 161000；3．黑龍江省齊齊哈爾市第一醫(yī)院內分泌科，黑龍江 齊齊哈爾 161000）

神經膠質瘤（簡稱為膠質瘤）是一種發(fā)生在神經外胚層的惡性腫瘤，是神經系統腫瘤中發(fā)病率較高的惡性腫瘤之一（30%）。膠質瘤具有生長速度較快、治愈率低、術后復發(fā)率較高、存活率低、預后較差等特點，患者通常出現顱內壓增高、癲癇、嘔吐等臨床癥狀，嚴重影響患者的生活質量和生命安全[1]。因此，膠質瘤已成為臨床和基礎研究的重點問題。

本研究主要探究miR-432在神經膠質瘤患者中的表達及其臨床意義，為今后神經膠質瘤的治療提供實驗基礎和理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月～2018年1月我院收治的膠質瘤患者的腦組織15例，并收集同期在我院接受治療的創(chuàng)傷性腦損傷患者腦組織15例作為正常對照組。膠質瘤患者年齡10～75歲，平均（42.5±26.75）歲，其中男8例，女7例，根據《WHO中樞神經系統腫瘤分類》分期標準：Ⅰ期1例，Ⅱ期3例，Ⅲ期3例，Ⅳ期8例。膠質瘤患者年齡10～75歲，平均（41.75±27.05）歲，其中男8例，女7例。兩組患者在年齡、性別比較無統計學意義。

1.2 細胞培養(yǎng)和轉染

膠質瘤細胞系U87細胞購于南京科佰生物科技有限公司（中國）。U87細胞采用含有10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素混合物的DMEM培養(yǎng)液（Hyclone公司，美國），并置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱（Thermo公司，美國）中培養(yǎng)。

1.3 RNA提取和實時定量聚合酶鏈式反應（qRT-PCR）

根據Trizol Reagent試劑（Invitrogen，美國）說明書提取組織、血清和細胞中總RNA，并使用NanoDrop2000檢測RNA濃度和純度。按照逆轉錄試劑盒（ABI，美國）說明書進行逆轉錄反應，將RNA逆轉錄為cDNA。

1.4 CCK-8實驗

采用CCK-8實驗檢測細胞活力。首先，將細胞以1×104個細胞/孔密度接種于96孔板中，細胞轉染24小時后，在每孔中加入10 μL CCK-8溶液（北京百奧萊博，中國），孵育4小時。采用酶標儀檢測450 nm處的吸光度。每組設置6個復孔取平均值，另設單孔只加入培養(yǎng)基作為空白對照。

1.5 細胞劃痕實驗

采用細胞劃痕實驗檢測細胞遷移能力。首先，將細胞接種于六孔板中，細胞轉染24小時后，利用一次性進口吸頭在每孔中豎直劃一條直線，用PBS（索萊寶，中國）清洗細胞，以去掉漂浮的細胞，然后更換新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。分別于0小時、24小時后觀鏡下觀察并拍照，對比不同時間細胞劃痕寬度。

1.6 統計學方法

所有數據均表示為均數±標準差，用graphpad軟件對所有數據進行統計學處理。t值用以檢驗計量資料，x2用以檢驗計數資料，組間差異經P值進行判定，當*P＜0.05，**P＜0.0和***P＜0.001時，差異具有統計學意義。

2 結 果

質瘤患者和非膠質瘤患者血清中miR-432的表達，結果顯示，與非膠質瘤患者相比，膠質瘤患者血清中miR-432的表達顯著降低，差異有統計學意義（P=0.0228＜0.05）。

2.2 細胞轉染后miR-432的表達量變化

CCK-8實驗結果顯示，與mimic-NC組相比，miR-432 mimic顯著降低膠質瘤細胞系U87細胞的活力，而與inhibitor-NC組相比，miR-432 inhibitor顯著升高U87細胞活力。

3 討 論

本研究應用qRT-PCR技術檢測miR-432在15例膠質瘤患者的癌癥組織和15例非膠質瘤患者的腦組織中的表達情況。結果顯示，miR-432在膠質瘤組織中的表達顯著降低。qRT-PCR實驗結果提示，miR-432在膠質瘤患者血清中miR-432的表達水平顯著低于非膠質瘤患者。