摘要：目的 研究在手足口病標(biāo)本檢測中不同分子生物學(xué)方法的應(yīng)用效果。 方法 選取我院在2016年12月-2018年1月收治的120份手足口病標(biāo)本，將其隨機(jī)分為對(duì)照組與觀察組各為 例，全部的實(shí)驗(yàn)對(duì)象都使用常規(guī)治療，對(duì)患兒分別采用巢式PCR、一步法RT-PCR 及實(shí)時(shí)RT-PCR三種檢測方法進(jìn)行檢測，比較患兒的陽性檢測率 。結(jié)果 在巢式PCR、一步法RT-PCR 及實(shí)時(shí)RT-PCR三種患兒中分別得到了不同的陽性診斷結(jié)果，運(yùn)用實(shí)時(shí)RT-PCR 法與巢式PCR 法能夠得出更高的檢測率。 結(jié)論 巢式PCR與RT-PCR的運(yùn)用能夠有效檢測出小兒手足口病的發(fā)生，準(zhǔn)確度比較高，具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

關(guān)鍵詞：不同分子生物學(xué)；手足口病；標(biāo)本檢測；陽性率

手足口病是臨床上一種比較常見的小兒性傳染性疾病，對(duì)患兒的身體健康產(chǎn)生了不同程度的影響[1]，一般主要發(fā)生在5歲以下的兒童之中，患兒發(fā)病的機(jī)理是由于科薩奇病毒A組16型以及腸道病毒71型病原體的發(fā)生[2]。目前在臨床治療中的藥物使用比較有限，因此需要加強(qiáng)對(duì)手足口病的有效診斷，從而能夠進(jìn)行及早治療[3]。采用不同分子生物學(xué)方法能夠有效檢測出患兒手足口病的發(fā)生情況。

1.臨床資料與研究方法

1.1臨床資料概述

本次研究過程中的實(shí)驗(yàn)對(duì)象是我院在2016年12月-2018年1月收治的120份住院患兒。120例患兒均呈現(xiàn)出了臨床上手足口病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，出現(xiàn)了發(fā)熱、口腔潰瘍、皮疹等臨床癥狀表現(xiàn)，患者在中樞神經(jīng)系統(tǒng)上也出現(xiàn)了不同程度的異?，F(xiàn)象。具有66例男性患兒，54例女性患兒，年齡分布在9個(gè)月-5歲之間，患兒的平均年齡是（3.2±1.6）歲。120例患兒分別運(yùn)用了不同的生物分子檢測方法。

1.2研究方法

對(duì)120例標(biāo)本進(jìn)行無菌操作，收集患兒的糞便，將其放置到大便盒中。擦拭患兒的扁桃體與咽后壁位置，進(jìn)行咽后部位樣本的采集。將棉簽放置到3mL Hank 采樣管之中。將其放置在-80度的冰箱中進(jìn)行保存，對(duì)標(biāo)本分別運(yùn)用巢式PCR、一步法RT-PCR 及實(shí)時(shí)RT-PCR檢測方法進(jìn)行檢測，使用Promega 公司生產(chǎn)的PCR 擴(kuò)增儀與試劑盒，在45度的溫度下進(jìn)行45分鐘逆轉(zhuǎn)錄的處理，之后將溫度調(diào)整到94度進(jìn)行預(yù)變性處理，通過20秒的處理之后進(jìn)行退火處理，要求處于45度的環(huán)境之下，維時(shí)30s，一共進(jìn)行36個(gè)循環(huán)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方式

本文研究中運(yùn)用SPSS 18.0軟件搜集統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)并進(jìn)行分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

在巢式PCR、一步法RT-PCR 及實(shí)時(shí)RT-PCR三種患兒中分別得到了不同的陽性診斷結(jié)果。將其在重死患兒、輕癥患兒、住院患兒三種類型患兒中進(jìn)行分別診斷。

在實(shí)時(shí)RT-PCR組患兒中，重死患兒。輕癥患兒、住院患兒三種類型的患兒中得到的陽性檢測結(jié)果分別是80%、22.9%與80%；在一步法RT-PCR組中，重死患兒、輕癥患兒、住院患兒三種類型的患兒中得到的陽性檢測結(jié)果分別是45%、8.6%與16.7%；同時(shí)在巢式PCR組中，重死患兒、輕癥患兒、住院患兒三種類型患兒中得到的陽性檢測結(jié)果分別是85%、25.7%與86.7%。實(shí)時(shí)RT-PCR檢測方法與巢式PCR 取得了比一步法RT-PCR更加精準(zhǔn)的檢測效果，具體的診斷數(shù)據(jù)見下表1。

3.討論

手足口病在低齡段兒童中發(fā)生幾率比較大，屬于出診性疾病的一種，其發(fā)病原因包括人腸道病毒屬、微小核糖核酸病毒等病原體的產(chǎn)生[4]?；純河捎谧陨戆l(fā)育等原因的影響，抵抗力比較低，手足口病的發(fā)生對(duì)患兒的健康成長造成了非常不良的影響作用，因此需要加大對(duì)手足口病的診斷與治療[5]。采用不同分子生物學(xué)方法具有重要的檢測價(jià)值，目前主要包括巢式PCR、一步法RT-PCR 及實(shí)時(shí)RT-PCR等，在運(yùn)用過程中分別具有不同的檢測敏感性與特異性等。

本文的研究過程中，在巢式PCR、一步法RT-PCR 及實(shí)時(shí)RT-PCR三種患兒中分別得到了不同的陽性診斷結(jié)果，運(yùn)用實(shí)時(shí)RT-PCR 法與巢式PCR 法能夠得出更高的檢測率，具有重要的應(yīng)用價(jià)值，可以將其運(yùn)用到小兒手足口病的治療過程中。

參考文獻(xiàn)：

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