摘要：目的：驗證中國中藥協(xié)會團體標準 《T/CATCM 003-2017無公害三七藥材及飲片 農藥與重金屬及有害元素的最大殘留限量》用氣質聯(lián)用法測定三七中多農殘的方法適合于本實驗室檢測要求。結果：該方法中多農殘的定量限為0.005mg/kg，線性范圍為1～10ng/mL和10～100ng/mL。結論：該方法可以用于本實驗室檢測，且線性良好。

關鍵詞：三七 農殘 氣質聯(lián)用 方法驗證

1 樣品：生三七粉1批

2 方法選擇：按照對中國中藥協(xié)會團體標準 《T/CATCM 003-2017無公害三七藥材及飲片 農藥與重金屬及有害元素的最大殘留限量》用氣質聯(lián)用法測定三七中多農殘方法。

3 儀器及試藥：

3.1氣相色譜-質譜聯(lián)用儀：美國安捷倫三重四極桿氣相色譜-質譜聯(lián)用儀（配有氣相色譜儀、三重四極桿質譜儀、氣相150位自動進樣器、機械真空泵）。

3.2色譜柱：安捷倫HP-5MS氣相色譜柱

3.3試劑：乙腈（色譜級），無水硫酸鎂（分析純），無水乙酸鈉（分析純），冰醋酸（分析純），分散固相萃取進化管，15mL離心管中內含無水硫酸鎂900mg、N-丙基乙二胺（PSA）300mg、十八烷基硅烷鍵合硅膠300mg、硅膠300mg、石墨化碳黑90mg，Welch，超純水（自制）

3.4 農殘對照品具體信息見下表。后面未作說明的序號，以該表為準。

3.5天平：電子天平（0.1mg /0.01mg）

3.6其他耗材：部件號為PN.5982-9313的安捷倫陶瓷均質子

4 試驗方法

依據(jù)中國中藥協(xié)會團體標準 《T/CATCM 003-2017無公害三七藥材及飲片 農藥與重金屬及有害元素的最大殘留限量》用氣質聯(lián)用法測定三七中多農殘方法

4.1 系統(tǒng)適用性試驗：照 《T/CATCM 003-2017無公害三七藥材及飲片 農藥與重金屬及有害元素的最大殘留限量》引用的《中國藥典》2015年版 四部 2351 農藥殘留測定法中【附注】4

色譜與質譜條件 以5%苯基甲基聚硅氧烷為固定液的彈性石英毛細管柱。

對照品溶液的制備 取九種對照品適量，配制成適量的對照品溶液，具體配制方法在驗證過程中已摸索完成。具體濃度如下：01--Tecnazene（TCNB）的基質加標對照品濃度為0～106.1280ng/mL，02—Quintozene的濃度為0.0655～100.0919ng/mL，03—Pyrimethani的濃度為7.1065～107.1361ng/mL，04—Pentachloroaniline的濃度為0.1742～101.0542ng/mL，05—Diethofencarb的濃度為0～99.9984 ng/mL，06—Chlorpyrifos的濃度為0.5377～103.6337 ng/mL，07—Triadimenol異構體1的濃度為1.1112～81.1090ng/mL，07—Triadimenol異構體2的濃度為1.4328～21.4165ng/mL，08—Procymidone的濃度為13.489～113.5274 ng/mL，09--Cyhalothrin（lambda）的濃度為0.1218～103.2178ng/mL

供試品溶液的制備

標準中規(guī)定：取過3號篩的粉末，取約3g（取樣量和移液體積及各項細節(jié)在驗證過程中調整），精密稱定，置50mL聚苯乙烯具塞離心管中，加入1%冰醋酸溶液15mL，渦旋使藥粉充分浸潤，放置30分鐘，精密加入乙腈15mL，渦旋使混勻，置振蕩器上劇烈振蕩（500次/min）5分鐘，加入無水硫酸鈉與無水乙酸鈉的混合粉末（4：1）7.5g，立即搖散，再置振蕩器上劇烈振蕩（500次/min）3分鐘，于冰浴中冷卻10分鐘，離心（4000轉/min）5分鐘，取上清液9mL，置已預先裝有凈化材料的分散固相萃取凈化管（無水硫酸鎂900mg、N-丙基乙二胺（PSA）300mg、十八烷基硅烷鍵合硅膠300mg、硅膠300mg、石墨化碳黑90mg）中，渦旋使充分混勻，再置振蕩器上劇烈振蕩（500次/min）5分鐘使凈化完全，離心（4000轉/min）5分鐘，精密吸取上清液5mL，置氮吹儀上于40℃水浴濃縮至約0.4mL，加乙腈定容至1mL，渦旋混勻，用微孔濾膜（0.22μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1μL，注入色譜儀，測定，即得。

4.2精密度試驗：

精密吸取準確度試驗溶液1μL，按測定方法重復進樣6次，測定響應值。對各次測得的響應值求相對標準偏差，相對標準偏差原則不得過 《中國藥典》 2015年版四部 9101藥品質量標準分析方法驗證指導原則所規(guī)定的重復性RSD范圍（因多農殘樣品基質復雜，精密度接受范圍可適當放寬），1ppb濃度對照品精密度試驗結果9.67%以內、5ppb濃度對照品精密度試驗結果6.26%以內、10ppb濃度對照品精密度試驗結果在2.40%以內、50ppb濃度對照品精密度試驗結果7.09%以內

4.3 準確度試驗

采取全程加標法。取已知含量的三七，精密稱定，按照測定高低限及中點精密添加多農殘對照品適量，同時取多農殘對照品溶液，依法測定，并計算出農殘的含量。

1～10ppb所測得01--Tecnazene（TCNB）的回收率85.80%-103.20%，5～100ppb的回收率73.04%-86.98%；1～10ppb所測得02--Quintozene的回收率74.12%-79.36%，5～100ppb的回收率63.62%-69.23%；1～10ppb所測得03--Pyrimethanil的回收率5.54%-64.13%，5～100ppb的回收率26.34%-57.52%；1～10ppb所測得04--Pentachloroaniline的回收率59.67%-64.79%，5～100ppb的回收率53.54%-71.07%；1～10ppb所測得05--Diethofencarb的回收率84.16%-99.72%，5～100ppb的回收率83.52%-104.98%；1～10ppb所測得06--Chlorpyrifos的回收率88.48%-111.16%，5～100ppb所測得06--Chlorpyrifos的回收率82.62%-93.11%；1～10ppb所測得07--Triadimenol的回收率80.35%-99.60%，5～100ppb的回收率90.02%-95.64%；1～10ppb所測得08--Procymidone的回收率46.59%-104.29%，5～100ppb的回收率83.21%-100.29%；1～10ppb所測得09--Cyhalothrin（lambda）的回收率84.18%–101.29%，5～100ppb的回收率91.40%-105.29%；

4.4 檢測限與定量限的確定

按照《中國藥典》2015年版 四部 9101藥品質量標準分析方法驗證指導原則，檢測限、定量限的確認可以用線性零點三七基質的標準偏差進行測定。另由《中國藥典》2015年版 四部 2351 農藥殘留測定法可知，已有較多種農殘的儀器檢出限由《中國藥典》規(guī)定，而方法定量限應當大于或等于儀器檢出限，這里暫時將方法定量限定為儀器檢出限0.005mg/kg，根據(jù)藥典要求進行檢測限與定量限的驗證，通過實驗數(shù)據(jù)分析，除了03--Pyrimethanil以外，其他的10SD均能夠滿足1ppb的定量限，使用此基質，不能夠測定03--Pyrimethanil的1ppb級別的濃度樣品。

4.5 范圍

范圍系指分析方法能達到一定精密度、準確度和線性要求時的高低限濃度或量的區(qū)間。對于三七中多成分農殘的氣質聯(lián)用測定來說，測定低限為定量限，已由4.4基本確定，測定高限為樣品的限值，依據(jù) 《T/CATCM 003-2017無公害三七藥材及飲片 農藥與重金屬及有害元素的最大殘留限量》中，29種必檢農藥殘留限量（限氣質質方法16種）及三種常用農藥的推檢殘留限量指標，藥典檢出限與應有的范圍列表如下：

4.6 線性關系

相關系數(shù)不低于0.99。

三、結論

通過對中國中藥協(xié)會團體標準 《T/CATCM 003-2017無公害三七藥材及飲片 農藥與重金屬及有害元素的最大殘留限量》進行系統(tǒng)適用性試驗、精密度試驗、檢測限、定量限、線性關系與線性范圍考察、重復性試驗、準確度試驗（加樣回收試驗），各項試驗測試結果均能滿足要求，儀器性能穩(wěn)定，質控結果滿意。

該方法中多農殘的定量限為0.005mg/kg，線性范圍為1～10ng/mL和10～100ng/mL。