■尹東鵬 陳秀梅 劉丹妮 牛小天 梁雨懷 靳曉東 陳玉珂 王桂芹

（吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，吉林長春130118）

烏鱧（Channa argus）屬鱸形目、攀鱸亞目、鱧科、鱧屬，俗稱烏魚、黑魚和蛇頭等，屬肉食性魚類，其環(huán)境適應(yīng)性強、生長速度快、單產(chǎn)高，適溫和適鹽范圍廣，抗逆性強、易耐低氧可長途運輸，從南到北廣泛分布。烏鱧肉質(zhì)細嫩、味道鮮美，可食率高達70%，蛋白質(zhì)含量高，脂肪含量低，無肌間刺，具有去瘀生新、生肌補血及促進傷口愈合等功效（聶國興等，2002）。在常用的魚類飼料原料中，除大豆及其餅粕外，賴氨酸是最容易缺乏的第一限制性氨基酸，其和蛋氨酸作為肉毒堿的前體參與運送長鏈脂肪酸進入線粒體內(nèi)進行β氧化。其缺乏導(dǎo)致配合飼料中氨基酸的不平衡，以致飼料利用效率下降，甚至影響水產(chǎn)動物的健康。關(guān)于魚類飼料賴氨酸適宜需求量的研究有一些報道。草魚(Ctenopharynodon idellus)（4.39 g）賴氨酸需要量為1.61%（相當(dāng)于飼料蛋白質(zhì)6.44%）（黃更生等，2003）。尼羅羅非魚(Oreochromis niloticus)（20 g）賴氨酸需要量為1.59%（相當(dāng)于飼料蛋白質(zhì)的4.18%）（楊青松等，1992）。異育銀鯽（Carassius auratus gibelio）（12.3 g）賴氨酸需要量為3.32%（相當(dāng)于飼料蛋白質(zhì)的8.63%)（周賢君等，2006）?？梢?，魚類飼料賴氨酸的需求量和占其蛋白質(zhì)的含量差異很大。關(guān)于烏鱧飼料賴氨酸等必需氨基酸的需求量的報道很少。本試驗旨在通過研究烏鱧飼料賴氨酸的適宜需要量，結(jié)合其肌肉的必需氨基酸模式來推算其它必需氨基酸的需要量，并據(jù)此配制飼料滿足烏鱧的蛋白質(zhì)和氨基酸的營養(yǎng)需求，具有防止浪費、降低飼料成本，為烏鱧配合飼料的廉價、高效和低污染的精準研制、氨基酸平衡和生產(chǎn)潛力的最大發(fā)揮提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料及制作

以魚粉和發(fā)酵豆粕為蛋白源，魚油和玉米油為脂肪源，通過添加羧甲基纖維素包埋晶體賴氨酸（0.0%、0.4%、0.8%、1.2%、1.6%和2.0%）使飼料中賴氨酸實測含量分別為1.94%、2.34%、2.74%、3.14%、3.54% 和3.94%（對照組、1組、2組、3組、4組、5組），用氨基酸混合物調(diào)節(jié)飼料至等氮、等能（蛋白質(zhì)43.0%、能量18.5 MJ/kg）6組飼料。飼料原料全部過60目篩，擠壓成直徑4.0 mm的顆粒，65℃烘干，-4℃冰箱保存待用。原料組成和營養(yǎng)水平見表1。

表1 原料組成和營養(yǎng)水平

1.2 飼養(yǎng)管理

試驗前烏鱧暫養(yǎng)于室內(nèi)水族箱中馴化15 d。暫養(yǎng)期間投喂基礎(chǔ)日糧作為馴化飼料，飽食投喂，試驗開始之前，停止投喂1 d。

挑選健康活潑、規(guī)格一致的試驗烏鱧540尾，體質(zhì)量為（5.96±0.36）g，隨機分配到18個水族箱中，隨機分成6組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)30尾。每天飽食投喂兩次（09：00、16：00），每次投料前觀察魚的活動，投喂1 h后觀察殘餌情況，用虹吸法吸出殘餌并及時調(diào)整投喂量，每天記錄水溫和投喂量。試驗期間水溫為23～30 ℃，pH值為（7.1±0.1），溶解氧大于5.0 mg/l，氨氮小于0.5 mg/l。試驗時間為10周。

1.3 樣品收集及指標(biāo)計算

飼養(yǎng)10周后取樣，分別稱體重，測體長，計算平均增重率、特定生長率、蛋白質(zhì)效率、飼料效率、蛋白沉積率、肥滿度；取側(cè)線以上、背鰭以下的白肌，測定其營養(yǎng)成分，采用GB/T 6435—-2006、GB/T 6432—1994、GB/T 6438—2007、GB/T 6433—2006 和 GB/T 5009.124—2003法分別測定飼料中的水分、粗蛋白質(zhì)、粗灰分、粗脂肪和氨基酸。

式中：I——攝入飼料的重量（g）；

t——試驗時間（d）；

W0、Wt——試驗初始和結(jié)束時烏鱧的總重量(g)；

C——飼料蛋白質(zhì)的含量（%）；

W、L——平均每尾魚的體重（g）和體長（cm）。

1.4 其它必需氨基酸需要量的計算

根據(jù)烏鱧對飼料中賴氨酸的需要量及魚體肌肉的必需氨基酸組成可計算出其它必需氨基酸的需要量（Ian等，1998）。

A/E值=[某種EAA含量/總EAA含量（包括酪氨酸和半胱氨酸）]×100

某種氨基酸需要量=(賴氨酸需要量×某氨基酸A/E值)/賴氨酸的A/E值

1.5 統(tǒng)計分析

采用SPSS18.0對所得數(shù)據(jù)（平均值±標(biāo)準差）進行單因素方差分析（One-way ANOVA），差異顯著時使用Duncan's法多重比較分析數(shù)據(jù)之間的差異顯著性，顯著水平為P＜0.05。

2 結(jié)果

2.1 不同飼料賴氨酸水平對烏鱧生長和飼料利用的影響（見表2、圖1）

表2 飼料賴氨酸水平對烏鱧生長和飼料利用的影響

圖1 特定生長率為指標(biāo)的折線模型

由表2可知，飼料賴氨酸水平對烏鱧的平均增重率、特定生長率具有顯著的影響（P＜0.05），平均增重率和特定生長率均隨著飼料賴氨酸水平的提高呈先升高后下降的趨勢，在飼料賴氨酸為水平1.94%～3.14%范圍時，烏鱧平均增重率和特定生長率均隨著賴氨酸添加量的增加而提高，2.74%、3.14%組顯著高于對照組和其他各組（P＜0.05），但是賴氨酸水平在3.14%～3.94%范圍時，平均增重率和特定生長率不再提高且隨賴氨添加量的增加有下降趨勢，3.14%組顯著高于3.94%組（P＜0.05）。烏鱧肥滿度各組之間差異不顯著（P＞0.05）。

以特定生長率為判別指標(biāo)，折線模型為y=1.062 5x+0.326，R2=0.941 6和y=-0.729 2x+5.463 5，R2=0.955 9，x表示飼料中的賴氨酸水平，y表示特定生長率，拐點x最適=2.87%，當(dāng)飼料中賴氨酸水平為6.65%CP時，特定生長率達到最高值（見圖1）。

2.2 烏鱧肌肉的營養(yǎng)組成及使用A/E評價烏鱧的必需氨基酸需求（見表3）

由表3可知，根據(jù)烏鱧肌肉必需氨基酸的模式，使用A/E法推算出烏鱧對飼料其它必需氨基酸的需要量，即精氨酸4.39%CP、亮氨酸3.10%CP、異亮氨酸3.21%CP、蛋氨酸+胱氨酸2.77%CP、苯丙氨酸+酪氨酸6.29%CP、蘇氨酸3.46%CP、纈氨酸3.34%CP、組氨酸1.76%CP。

表3 使用A/E評價烏鱧的必需氨基酸需求

3 討論

3.1 烏鱧飼料賴氨酸的適宜需要量

蛋白質(zhì)是飼料營養(yǎng)和飼料成本最重要的組分，蛋白質(zhì)的營養(yǎng)實際是氨基酸的營養(yǎng)。魚類的10種必需氨基酸和2種半必需氨基酸有精氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸+胱氨酸、苯丙氨酸+酪氨酸、蘇氨酸、纈氨酸和色氨酸。水產(chǎn)動物飼料中缺乏某種必需氨基酸時，往往都會導(dǎo)致其生長減緩，在水產(chǎn)動物蛋白質(zhì)的合成和生長上，其中賴氨酸是以谷實類及其加工副產(chǎn)品為基礎(chǔ)日糧時的第一限制性堿性必需氨基酸，其含量不足或者含量過高都會引起氨基酸的不平衡，在魚飼料中添加賴氨酸是通過滿足營養(yǎng)需求、提高消化能力、蛋白質(zhì)的代謝和疾病抵抗等來改善其生產(chǎn)性能（尹海富等，2002）。過量的賴氨酸也會抑制魚類的生長。說明在飼料中加入過量或者不足的賴氨酸都會使魚類生長受到抑制，可能由于氨基酸不平衡，加重了多余的氨基酸的脫氮作用，影響了飼料利用，亦可能由于過量的賴氨酸可能產(chǎn)生毒性作用，或可能由于對精氨酸有拮抗作用等造成的（Berge等，1998）。

多數(shù)采用劑量-生長反應(yīng)曲線來確定需要量。但使用的模型和評定指標(biāo)的不同導(dǎo)致結(jié)果的差異很大。一種是拋物線（二次曲線）模型，最適水平出現(xiàn)在折點之后仍會繼續(xù)上升，直到到達頂點后開始下降，并將最高點確定為最適水平。一種是折線模型，在出現(xiàn)折點的地方就判定為最適水平，亦是最低水平。二者的范圍對于飼料研發(fā)有重要的意義。評價通常使用生長和飼料利用指標(biāo)。使用飼料利用指標(biāo)得出的結(jié)果要相對小于生長指標(biāo)，因魚體重的增長包括蛋白質(zhì)和脂肪的增加，在飼料賴氨酸水平升高的最適水平之上時，氨基酸的利用效率可能已經(jīng)開始出現(xiàn)下降，然而不能被利用的氨基酸可能通過脂肪積累的形式增加到體重上面，使得模型中確定的氨基酸需求量偏高。使用蛋白質(zhì)利用率表示的飼料賴氨酸需求量比較直接的顯示了魚類對飼料氨基酸利用的最適水平，但往往試驗中飼料的準確用量因沒有回算到未攝食飼料中，導(dǎo)致結(jié)果偏大。所以兩種指標(biāo)中選擇較小的為最適亦最經(jīng)濟水平。本試驗以特定生長率為評價指標(biāo)時，烏鱧飼料賴氨酸的最適需求量為2.87%，占飼料蛋白質(zhì)的6.65%。

Wilson等（2002）研究認為，各種養(yǎng)殖魚類的賴氨酸需求量通常占飼料蛋白質(zhì)的3.2%～6.2%。以特定生長率為評價指標(biāo)，通過一元二次模型得出養(yǎng)成前期異育銀鯽（7.85 g）對飼料賴氨酸的需求量為1.78%，占飼料蛋白質(zhì)的5.14%。養(yǎng)成中期異育銀鯽（73.6 g）飼料中最適宜的賴氨酸水平為2.12%～2.19%，占飼料蛋白6.06%～6.8%（周賢君等，2006）。以增重率為評價指標(biāo)，通過線性模型得出黃顙魚（2.00 g）賴氨酸的適宜水平為2.61%，占飼料蛋白質(zhì)含量的5.8%（邱紅等，2015）。以特定生長率為評價指標(biāo)，通過拋物線模型得出鳡幼魚（2.36 g）賴氨酸的適宜水平為1.96%～2.95%（楊威等，2012）。以增重率為評價指標(biāo)，通過折線模型分析得出卵形鯧鲹幼魚（14.78 g）賴氨酸的適宜水平為2.94%，占飼料蛋白質(zhì)含量的6.70%（杜強等，2011）。以增重率為評價指標(biāo)，通過折線模型得出真鯛幼魚（8.69 g）賴氨酸的適宜水平為3.28%，占飼料蛋白質(zhì)含量的8.63%（Brown等，1988）。以增重率為指標(biāo)，通過二次曲線模型得出黑鯛幼魚（9.13 g）賴氨酸的適宜水平為3.28%，占飼料蛋白質(zhì)含量的8.63%（張永正等，2009）。以增重率為指標(biāo)，通過二次曲線模型得出許氏平鲉幼魚（28.42 g）賴氨酸的適宜水平為2.99%，占飼料蛋白質(zhì)含量的6.16%（嚴全根等，2006）?？梢姡鞣N魚對飼料賴氨酸的需求沒有明顯的規(guī)律，但和魚粉相比，高于或接近于魚粉賴氨酸占其蛋白5.0%～7.5%。由此可以看出，不同魚類對其飼料賴氨酸的需求量存在著種間和種內(nèi)差異，不同的基礎(chǔ)飼料組成、添加賴氨酸的劑型、投喂水平、養(yǎng)殖條件、試驗魚的初始規(guī)格和健康狀況以及評價指標(biāo)和評價模型等均會造成結(jié)果的差異等（Kim等，1992a）。

3.2 烏鱧飼料必需氨基酸的適宜需要量

魚類要獲得最大生長需要氨基酸平衡飼料，即必需氨基酸含量和比例與魚體的必需氨基酸含量和比例契合的越好，促生長效果越明顯。Arai等（1972）在配制日本鰻鱺飼料中引入A/E（A——某種必需氨基酸量，E——必需氨基酸總量）概念作為氨基酸平衡的標(biāo)準，把酪蛋白添加氨基酸的飼料的A/E比值調(diào)至與全魚蛋白質(zhì)A/E比值相近水平，計算烏鱧肌肉的必需氨基酸的含量和比例與飼料賴氨酸的需求量進行擬合。應(yīng)用此方法研究某養(yǎng)殖新品種的必需氨基酸需要量較傳統(tǒng)方法往往更加簡便、快速。

烏鱧肌肉氨基酸有不同的測定結(jié)果，魚類對必需氨基酸需要量因種而異，主要和魚體必需氨基酸組成有密切關(guān)系。本試驗采用對魚類生長影響最大的賴氨酸為依據(jù)，因本試驗用的是最好的蛋白源，生產(chǎn)上使用的蛋白源消化率要低于試驗飼料，可增大用量，補充理論和實踐的差距。飼料中適宜的賴氨酸水平能夠改善烏鱧幼魚的生長性能，基于特定生長率的模型分析得出，烏鱧幼魚對飼料中賴氨酸的需要量為2.87%(相當(dāng)于飼料蛋白質(zhì)的6.65%)。通過魚體的必需氨基酸模式推算出其它必需氨基酸需要量，分別是即精氨酸4.39%CP、亮氨酸3.10%CP、異亮氨酸3.21%CP、蛋氨酸+胱氨酸2.77%CP、苯丙氨酸+酪氨酸6.29%CP、蘇氨酸3.46%CP、纈氨酸3.34%CP、組氨酸1.76%CP。趙紅霞等（2006）研究軍曹魚幼魚（14.7 g）對蛋氨酸的需要量。以增重率為指標(biāo)，一元二次回歸分析表明，軍曹魚對飼料中蛋氨酸的適宜需要量為2.67%CP。并通過魚體的必需氨基酸模式推算出其它必需氨基酸需要量分別是：賴氨酸7.58%CP、精氨酸7.22%CP、亮氨酸6.37%CP、異亮氨酸2.71%CP、苯丙氨酸4.09%CP、組氨酸2.00%CP、蘇氨酸4.66%CP、纈氨酸3.83%CP。周萌等（2005）研究軍曹魚幼魚（14.7 g）對賴氨酸的需要量。以平均增重率為指標(biāo)，一元二次回歸分析表明，軍曹魚對飼料中賴氨酸的適宜需要量為6.06%CP。通過魚體的必需氨基酸模式推算出其它必需氨基酸需要量分別是：精氨酸4.39%CP、亮氨酸3.10%CP、異亮氨酸3.21%CP、蛋氨酸+半胱氨酸2.77%CP、苯丙氨酸+酪氨酸6.29%CP、蘇氨酸3.46%CP、纈氨酸3.34%CP、組氨酸1.76%CP?？梢姡煌~類的賴氨酸需求量差異大，肌肉必需氨基酸的含量和比例亦有較大差異，有必要按此方法準確規(guī)范必需氨基酸的含量和比例，為配制平衡的氨基酸飼料提供理論依據(jù)。

4 結(jié)論

以特定生長率為指標(biāo)，通過折線模型得出烏鱧幼魚（5.96 g）賴氨酸的適宜水平為2.87%，占飼料蛋白質(zhì)含量的6.56%。通過魚體的必需氨基酸模式推算出其它必需氨基酸需要量，分別是精氨酸4.39%CP、亮氨酸3.10%CP、異亮氨酸3.21%CP、蛋氨酸+胱氨酸2.77%CP、苯丙氨酸+酪氨酸6.29%CP、蘇氨酸3.46%CP、纈氨酸3.34%CP、組氨酸1.76%CP。