劉冬嫻，陳志偉，賀江南

（湖南警察學(xué)院刑事科學(xué)技術(shù)系，長(zhǎng)沙 410138）

醉酒駕駛?cè)胄绦路ㄒ?guī)實(shí)施后，駕駛員血液樣品中乙醇含量（blood alcohol concentration，BAC）的檢測(cè)結(jié)果被用作酒后駕駛認(rèn)定的重要訴訟證據(jù)。在司法實(shí)踐中，駕駛員一旦涉嫌飲酒后駕駛，便會(huì)被強(qiáng)制抽血，血液樣品將由司法鑒定機(jī)構(gòu)進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果直接決定是否“酒駕”“醉駕”。然而，駕駛員血液樣品中乙醇含量的檢測(cè)結(jié)果是受到諸多因素影響的，目前國(guó)內(nèi)外就血液樣品中乙醇含量影響因素進(jìn)行了大量研究，其研究?jī)?nèi)容主要涉及血液樣品儲(chǔ)存容器[1]、存儲(chǔ)方法[2-6]、檢測(cè)方法[7-11]等對(duì)血液樣品中乙醇含量的影響。在司法實(shí)踐中，經(jīng)常會(huì)遇到當(dāng)事人或委托方對(duì)血液樣品檢測(cè)時(shí)間提出異議，本實(shí)驗(yàn)擬就檢測(cè)時(shí)間對(duì)血液樣品中乙醇含量檢測(cè)結(jié)果的影響進(jìn)行研究，以期對(duì)司法實(shí)踐中酒后駕駛認(rèn)定起到積極的作用。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

無(wú)水乙醇，叔丁醇，均為色譜純，購(gòu)自長(zhǎng)沙市化玻公司。

乙醇對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液：乙醇質(zhì)量濃度分別為0.10、0.20、0.50、0.80、1.00、2.00、3.00 mg/mL 的對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)品溶液，購(gòu)自司法部司法鑒定科學(xué)技術(shù)研究所，置4 ℃冰箱冷藏保存。

叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備：精密稱取502.5 mg叔丁醇（含量99.5%，色譜純）于100 mL容量瓶中，加重蒸餾水至刻度，混勻，得5.0 mg/mL叔丁醇對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。將此儲(chǔ)備液用重蒸餾水稀釋125倍，得40.0 μg/mL叔丁醇內(nèi)標(biāo)工作液。

實(shí)驗(yàn)用白酒：酒中酒霸（濃香型，酒精度45%），購(gòu)自超市。

一次性使用真空采血管：枸緣酸鈉（1∶4）管、枸緣酸鈉（1∶9）管、EDTA-K2管均為2 mL規(guī)格（此三種采血管均為抗凝管），無(wú)抗凝劑管、促凝劑管、分離膠-促凝劑管均為5 mL規(guī)格，山東省成武縣醫(yī)用制品廠生產(chǎn)。

空白血液為近期未服用藥物的正常人血液；實(shí)驗(yàn)用水為重蒸餾水。

1.2 儀器與設(shè)備

頂空氣相色譜儀7890A/G1888，配有氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）和Agilent氣相色譜工作站，美國(guó)安捷侖（Agilent）公司。

1.3 方法

1.3.1 志愿者實(shí)驗(yàn)

7名男性志愿者，分成3組。第1組3名，平均年齡20.3歲，平均體重61.1 kg，分別編號(hào)為ZYZ101、ZYZ102、ZYZ103；第2組3名，平均年齡22歲，平均體重64.3 kg，分別編號(hào)為ZYZ201、ZYZ202、ZYZ203；第3組1名（空白對(duì)照組），年齡21歲，體重62.0 kg，編號(hào)為ZYZ300。按中國(guó)人飲酒習(xí)慣，第1組志愿者按2.0 g/kg體重飲用白酒（折合乙醇質(zhì)量為0.71 g/kg），ZYZ101、ZYZ102、ZYZ103飲酒量分別為130.0 g、118.6 g、118.0 g；第2組志愿者按4.0 g/kg體重飲用白酒（折合乙醇質(zhì)量為 1.42 g/kg），ZYZ201、ZYZ202、ZYZ203飲 酒 量分別為246.0 g、269.2 g、256.0 g；第3組志愿者飲酒量為0。

1.3.2 樣品采集

志愿者飲酒后2 h，分別用一次性使用真空采血管枸緣酸鈉（1:4）管、枸緣酸鈉（1:9）管、EDTAK2管及無(wú)抗凝劑管、促凝劑管、分離膠-促凝劑管等6種不同的采血管采集志愿者血液樣品各7份，置4 ℃冰箱中冷藏保存。

1.3.3 樣品處理

取20 mL頂空樣品瓶?jī)蓚€(gè)，分別加入40.0 μg/mL的叔丁醇內(nèi)標(biāo)溶液1.000 mL，再各加入待測(cè)血液樣品0.200 mL，用橡膠墊鋁帽密封，混勻，65 ℃加熱5 min，取1.00 mL液上氣體進(jìn)行頂空氣相色譜分析。內(nèi)標(biāo)法-校準(zhǔn)曲線法定量。

1.3.4 色譜條件

色譜柱DB-ALC1 （30 m×0.32 mm，1.8 μm）石英毛細(xì)管柱，柱溫40 ℃；進(jìn)樣口溫度150 ℃，分流進(jìn)樣（分流比2:1）；檢測(cè)器：FID，溫度250 ℃；載氣為高純氮，流量5 mL/min，氫氣流量30 mL/min，空氣流量400 mL/min，尾吹氣流量25 mL/min；加熱箱溫度65 ℃，定量環(huán)溫度105 ℃，樣品瓶加熱平衡時(shí)間10 min，樣品瓶加壓時(shí)間0.1 min，定量環(huán)充滿時(shí)間0.1 min，定量環(huán)平衡時(shí)間0.05 min，傳輸線溫度110℃，進(jìn)樣時(shí)間1 min，氣相循環(huán)時(shí)間8 min。

2 結(jié)果

2.1 校準(zhǔn)曲線

用精密移液器分別準(zhǔn)確吸取乙醇質(zhì)量濃度為0.10、0.20、0.50、0.80、1.00、2.00、3.00 mg/mL 對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液0.200 mL加入頂空樣品瓶?jī)?nèi)，各加1.000 mL 40.0 μg/mL叔丁醇內(nèi)標(biāo)工作液，蓋上硅橡膠墊、鋁帽，用密封鉗加封鋁帽，混勻。按“1.3.4”方法進(jìn)樣檢測(cè)，每個(gè)濃度樣品平行測(cè)定2份，取平均值。以乙醇/叔丁醇色譜峰面積比（Y）對(duì)乙醇濃度（X）（mg/mL）進(jìn)行線性回歸，線性回歸方程式為Y=0.9109X－ 0.0272（r=0.9999）。

2.2 志愿者血液樣品中乙醇含量檢測(cè)結(jié)果

志愿者飲酒后2 h使用不同的采血管采集的血液樣品，分別在第1天（d1）、第3天（d3）、第5天（d5）、第7天（d7）、第9天（d9）、第12天（d12）、第15天（d15），按“1.3.3”方法進(jìn)行樣品處理，按“1.3.4”方法進(jìn)樣檢測(cè)，依據(jù)線性回歸方程計(jì)算血液樣品中乙醇含量，每個(gè)樣品平行測(cè)定2份，取平均值。志愿者血液樣品中乙醇含量檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3 日內(nèi)精密度

取不同采血管包裝的志愿者血液樣品，在第1天（d1）按“1.3.3”方法進(jìn)行樣品處理，按“1.3.4”方法檢測(cè)，每個(gè)樣品平行測(cè)定3份，依據(jù)線性回歸方程計(jì)算血液樣品中乙醇含量，考查其精密度，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.4 案例檢驗(yàn)

選取某司法鑒定機(jī)構(gòu)15例酒后駕駛認(rèn)定血液樣品中乙醇含量檢測(cè)案例，駕駛員血液樣品采用一次性使用真空采血管EDTA-K2管包裝，初次檢測(cè)按“1.3.3”方法進(jìn)行樣品處理，按“1.3.4”方法進(jìn)樣檢測(cè)，依據(jù)線性回歸方程計(jì)算血液樣品中乙醇含量，每個(gè)樣品平行測(cè)定2份，取平均值。初次檢測(cè)后的血液樣品在-18 ℃冷凍條件下保存60～120 d后仍按初次檢測(cè)方法進(jìn)行復(fù)核檢測(cè)。駕駛員血液樣品中乙醇含量檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。

表1 志愿者血液樣品中乙醇含量（mg/mL）（n=7, X±SD）Table 1 The alcohol concentrations in volunteers' blood samples (mg/mL) (n=7, X±SD)

表2 日內(nèi)精密度（n=3, X±SD）Table 2 Intra-day precision (n=3, X±SD)

表3 駕駛員血液樣品中乙醇含量Table 3 The alcohol concentrations in drivers' blood samples

3 討論

3.1 儲(chǔ)存容器對(duì)血液樣品中乙醇含量的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，相同的血液樣品采用不同的采血管包裝，血液樣品中乙醇含量檢測(cè)結(jié)果不同，依次為分離膠-促凝劑管＞促凝劑管＞無(wú)抗凝劑管＞EDTA-K2管＞枸緣酸鈉（1:9）管＞枸緣酸鈉（1:4）管，與以往研究結(jié)果相同[1]。

3.2 檢測(cè)時(shí)間對(duì)血液樣品中乙醇含量的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，用同種類采血管采集的相同血液樣品，分別在第1天（d1）、第3天（d3）、第5天（d5）、第7天（d7）、第9天（d9）、第12天（d12）、第15天（d15）進(jìn)行檢測(cè)，分離膠-促凝劑管、無(wú)抗凝劑管、促凝劑管、EDTA-K2管、枸緣酸鈉（1∶9）管、枸緣酸鈉（1∶4）管血液樣品中乙醇含量d1～d15天RSD分別為3.07%、2.76%、 2.56%、2.47%、2.45%、2.24%。表明血液樣品在冷藏條件下，檢測(cè)時(shí)間對(duì)乙醇含量無(wú)明顯影響。但實(shí)驗(yàn)過(guò)程中有3支分離膠-促凝劑管分別在第5天（d5）、第7天（d7）、第9天（d9）出現(xiàn)含量過(guò)高（偏離正常值50%以上）的情況，其原因有待進(jìn)一步研究。

本實(shí)驗(yàn)對(duì)司法實(shí)踐酒后駕駛認(rèn)定中駕駛員血液樣品中乙醇含量進(jìn)行了復(fù)核檢測(cè)，分別對(duì)15例用一次性使用真空采血管EDTA-K2管采集、且在-18℃冷凍條件下保存了60～120天的血液樣品進(jìn)行了檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果表明：血液樣品中乙醇含量均有不同程度的下降，血液樣品中乙醇含量下降比例在3.42%～59.4%，平均下降20.77%。血液樣品中乙醇含量下降比例與血液樣品中乙醇含量高低等因素有關(guān)，血液樣品中乙醇含量越低，下降比例越大。且隨著血液樣品中乙醇含量的降低，血液樣品中乙醛含量明顯增高，或許是由于保存中乙醇氧化為乙醛所致，其原因有待進(jìn)一步研究。此外，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中有1支用檸檬酸鈉（9:1）管采集、首次檢測(cè)后在-18 ℃冷凍條件下保存了90 d的血液樣品中，復(fù)核檢測(cè)含量比首次檢測(cè)含量上升了3.51%，其原因有待進(jìn)一步研究。