崔燕紅，趙一琳，蔣廷旺，宛傳丹

(江蘇省常熟市醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室 215500)

流感病毒可引起急性呼吸道感染，其通過(guò)呼吸道飛沫傳播，擴(kuò)散速度極快，可在人群中呈現(xiàn)出大范圍暴發(fā)流行趨勢(shì)。流感病毒屬正黏病毒科，核酸為單股負(fù)鏈RNA的包膜病毒。根據(jù)病毒顆粒表面核蛋白NP與基質(zhì)蛋白M1，可分為甲、乙、丙型三大類。甲型與乙型流感病毒是引起人類呼吸道疾病的主要病原體[1-2]。鑒于目前流感多發(fā)且某些可引起重癥疾病，臨床需充分重視流感病毒的篩查與診治。本實(shí)驗(yàn)室新開(kāi)展流感病毒核酸分型檢查，針對(duì)常熟地區(qū)近期暴發(fā)流行的流感進(jìn)行監(jiān)測(cè)分析，探討其病原學(xué)特征與流行規(guī)律，為區(qū)域性流感病毒的預(yù)防控制提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年4月至2018年3月本地區(qū)各級(jí)醫(yī)院門診和急診送檢流感病毒檢測(cè)的急性上呼吸道感染患者。收治標(biāo)準(zhǔn)參考國(guó)家流感中心網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)，即指發(fā)熱(體溫≥37.8 ℃)伴咳嗽或咽痛者，發(fā)病3 d以內(nèi)，尚未經(jīng)抗病毒治療的患者。收集并整理患者臨床資料。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集與處理 由經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的門診醫(yī)生采集咽部拭子，立即放置于含細(xì)胞保存液的特制采樣管內(nèi)，4 ℃保存，24 h內(nèi)統(tǒng)一送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)室收到標(biāo)本后，振蕩器充分振蕩采樣管，將咽拭子貼壁反復(fù)擠壓以保證細(xì)胞充分脫落。

1.2.2核酸提取與檢測(cè) 吸取200 μL脫落細(xì)胞液標(biāo)本，采用甲、乙型流感病毒核酸檢測(cè)試劑盒(上海之江生物技術(shù)公司)進(jìn)行核酸提取與熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)。提取方法與擴(kuò)增條件參照說(shuō)明書(shū)執(zhí)行。所檢測(cè)標(biāo)本與提取的RNA保存于-80 ℃低溫冰箱備用。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析。計(jì)量資料以M(Q25～Q75)表示，計(jì)數(shù)資料以百分率表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1病原學(xué)流行情況 2017年4月至2018年3月共收到檢測(cè)咽拭子標(biāo)本654例，其中男363例，女291例，年齡16～90歲，平均(46±14)歲。檢測(cè)到甲型流感陽(yáng)性91例，其中男55例(60.4%)，女36例(39.6%)；乙型流感陽(yáng)性136例，其中男79例(58.1%)，女57例(41.9%)。1年內(nèi)各月的甲、乙型流感流行情況見(jiàn)圖1。甲型流感主要暴發(fā)在2017年8月和2018年1-3月，而乙型流感集中暴發(fā)于2017年12月至2018年3月。流感病毒在冬春交替季節(jié)最活躍。

圖1 2017-2018年度流感病毒陽(yáng)性檢出例數(shù)分布

2.2人群分布與臨床特征 91例甲型流感陽(yáng)性病例中，男55例(60.4%),女36例(39.6%),男性檢出率明顯高于女性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.967，P<0.05)。136乙型流感陽(yáng)性病例中，男79例(58.1%)，女57例(41.9%)，二者檢出率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.559，P>0.05)。流感病毒陰性組男女比例相近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.251，P>0.05)，見(jiàn)表1。甲型流感病毒在<20歲和>60歲組陽(yáng)性率分別為34.0%和44.0%，明顯高于其他年齡組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=30.451，P<0.05)。乙型流感病毒在>60歲組陽(yáng)性率為44.8%，明顯高于其他年齡組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=35.176，P<0.05)。流感病毒陰性患者中各年齡段分布無(wú)差異，見(jiàn)表2。流感病毒感染最常見(jiàn)的臨床癥狀包括發(fā)熱(體溫≥38.0 ℃)、咳嗽/干咳、黃痰、疲勞等，與流感病毒陰性相比，陽(yáng)性患者更容易出現(xiàn)發(fā)熱(χ2=7.024，P<0.05)和疲勞感癥狀(χ2=13.835，P<0.05)；其他癥狀與流感病毒陰性組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表3。甲型流感病毒陽(yáng)性患者癥狀較乙型流感病毒陽(yáng)性患者嚴(yán)重，且住院康復(fù)時(shí)間也較長(zhǎng)。

表1 男、女中甲、乙型流感病毒檢出結(jié)果比較[n(%)]

表2 各年齡段甲、乙型流感病毒檢出結(jié)果比較[n(%)]

表3 各臨床癥狀在甲、乙型流感病毒中檢結(jié)果比較[n(%)]

2.38項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果比較 見(jiàn)表4。常規(guī)感染性檢驗(yàn)指標(biāo)包括白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、C-反應(yīng)蛋白、降鈣素原、乳酸脫氫酶和肌酸激酶等。通過(guò)比較發(fā)現(xiàn),流感病毒陽(yáng)性患者白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、肌酸激酶和乳酸脫氫酶水平與流感病毒陰性患者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在乙型流感感染者中白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)較低，而肌酸激酶與乳酸脫氫酶指標(biāo)較高，血小板計(jì)數(shù)較陰性患者明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。C-反應(yīng)蛋白和降鈣素原之間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表4 8項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果比較[M(Q25～Q75)]

3 討 論

近年來(lái)，流感病毒每年會(huì)相應(yīng)在區(qū)域內(nèi)呈暴發(fā)流行之勢(shì)，特別是甲型流感病毒，已引起多國(guó)廣泛重視[3-4]。我國(guó)成立了國(guó)家流感中心，設(shè)立各級(jí)哨點(diǎn)醫(yī)院進(jìn)行流感病毒監(jiān)測(cè)上報(bào)工作。2017年底至2018年初，本地區(qū)衛(wèi)生部門監(jiān)測(cè)到流感流行暴發(fā)，及時(shí)布置防范措施，加大針對(duì)流感病毒的檢測(cè)工作。本實(shí)驗(yàn)室根據(jù)病原學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果，進(jìn)一步分析流感的初步分型及各臨床癥狀之間的關(guān)系。

甲型流感病毒與乙型流感病毒是引起人類呼吸道感染的重要病原。甲型流感病毒抗原易發(fā)生變異，?？蓪?dǎo)致世界范圍內(nèi)的大流行。乙型流感病毒抗原變異較小，主要引起局部流行。丙型流感病毒雖可感染人類，但癥狀不明顯或僅有輕微上呼吸道感染，很少造成暴發(fā)流行[5]。本研究發(fā)現(xiàn)，2017-2018年在本地區(qū)暴發(fā)流行的流感病毒呈甲、乙型病毒交替流行，且乙型流感病毒檢出數(shù)要高于甲型。流感病毒高發(fā)季節(jié)均在冬春交替季節(jié)，即在2017年12月至2018年3月，這與國(guó)內(nèi)的相關(guān)報(bào)道相一致[6-8]。甲型流感病毒感染男性人數(shù)明顯高于女性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而乙型流感病毒感染無(wú)明顯性別傾向性(P>0.05)。從年齡分布看，甲型流感病毒易于感染少年兒童(<20歲)與老年人(>60歲)；乙型流感病毒易感染>60歲的老年人。這次暴發(fā)流行的流感疫情主要由甲、乙型兩種流感病毒引發(fā)。少年兒童與老年人是冬春季流感感染的高發(fā)人群，與國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果基本一致[9-10]。少年兒童易感染的可能原因是其免疫能力處于發(fā)育中，衛(wèi)生防范意識(shí)薄弱，且多數(shù)集中在學(xué)校等公共場(chǎng)所，所以易感染流感病毒。老年人群易感染可能是由于機(jī)體免疫力差且受各類基礎(chǔ)疾病(如慢性肺部疾病、糖尿病、慢性肝臟疾病、腫瘤等)困擾[11]。因此，在冬春季之前，應(yīng)重點(diǎn)針對(duì)兒童與老年人接種甲型與乙型兩種流感病毒疫苗，進(jìn)一步提高目標(biāo)人群的防范能力。

臨床癥狀分組顯示，呼吸道感染患者的癥狀主要表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽/干咳、黃痰、疲勞、氣促、惡心、嘔吐與影像學(xué)異常等[12]。本研究顯示，流感病毒陽(yáng)性患者較其他病毒陰性患者的上呼吸道感染主要表現(xiàn)在發(fā)熱(體溫≥38.0 ℃)與疲勞感癥狀。而其他癥狀與病毒陰性組表現(xiàn)相近，不易區(qū)分。除病毒學(xué)確診檢驗(yàn)外，還可借助于病毒性感染指標(biāo)的其他實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。本研究顯示，乙型流感病毒陽(yáng)性患者其白細(xì)胞計(jì)數(shù)較甲型陽(yáng)性患者明顯降低；淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)較陰性患者高，但明顯低于甲型陽(yáng)性患者，肌酸激酶與乳酸脫氫酶方面，甲、乙型陽(yáng)性患者均較病毒陰性患者明顯升高。流感病毒陽(yáng)性患者血小板計(jì)數(shù)明顯降低。而C-反應(yīng)蛋白與降鈣素原在流感病毒陰、陽(yáng)性患者間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，其臨床意義更多的適合于細(xì)菌性感染。有研究指出，流感病毒感染會(huì)導(dǎo)致急性橫紋肌溶解癥[13]。因此，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢查有助于流感感染的診斷與后期治療，預(yù)防由流感病毒感染引起的并發(fā)癥。

抗病毒藥物是臨床治療流感患者的有效手段，但目前WHO推薦用藥主要為奧司他韋、扎那米韋、帕拉米韋和拉尼那米韋等[14]。此次流感暴發(fā)曾導(dǎo)致我國(guó)華東地區(qū)抗病毒藥物奧司他韋一度脫銷。接種疫苗才是預(yù)防流感病毒感染的有效途徑。區(qū)域性預(yù)防流感措施應(yīng)加強(qiáng)本地區(qū)目標(biāo)人群(特別是少年兒童)的流感疫苗接種工作，同時(shí)大力推廣衛(wèi)生防范意義的教育與宣傳，可有效降低流感病毒在人群中的傳播流行。