鮑家卉，王雪慧，逄淑偉,王 瑩，劉馨宇，張雪梅

(延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)系，吉林延吉 133002)

中醫(yī)藥在防治肝臟疾病方面有悠久的歷史。肝損傷是指一系列理化因素所引起的肝細(xì)胞變性、壞死和凋亡，是各種肝臟疾病的病變結(jié)果。急性肝損傷是指各種原因引起的肝臟功能的異常，肝損傷是急性肝功能衰竭的基礎(chǔ)，嚴(yán)重或持續(xù)的肝損傷最終導(dǎo)致肝功能衰竭[1]。引起肝急性損傷的原因很多，四氯化碳(CCl4)引起的肝損傷是化學(xué)性肝損傷的一類典型代表，化學(xué)性肝損傷可上調(diào)肝損傷指數(shù)，導(dǎo)致肝細(xì)胞破裂，影響機(jī)體內(nèi)某些酶的含量，進(jìn)而影響肝臟的解毒功能，引起肝功能障礙，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致肝衰竭，甚至威脅生命。化學(xué)性肝損傷至今尚無有效的治療手段。因此，尋找新型保肝、護(hù)肝藥物十分重要。

黃芪(Astragalusmembranaceus)味甘，微溫，歸肺，脾經(jīng)，咀嚼有微豆腥味[2]，具有補(bǔ)氣固表、利尿托毒、排膿、斂瘡生肌功效[3]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，黃芪有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗應(yīng)激、降壓和較廣泛的抗菌作用[4]。黃芪不僅能擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，改善心肌供血，提高免疫功能，而且能夠延緩細(xì)胞衰老的進(jìn)程[5]。邱季等[6]研究表明，黃芪提取物在一定程度上改善肝細(xì)胞變性、壞死病變，對小鼠急性化學(xué)性肝損傷具有保護(hù)作用。本試驗(yàn)通過腹腔注射CCl4建立急性肝損傷模型，研究黃芪粗提物對肝損傷的保護(hù)作用，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 ICR小鼠，雌雄各半，體重18 g±2 g，購自長春億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.1.2 藥品與試劑 黃芪，購自吉林省延吉市延西大藥房；聯(lián)苯雙酯滴丸，購自吉林省延吉市延西大藥房(批號A02141208)；谷草轉(zhuǎn)氨酶AST(批號20161120)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT(批號20161120)、丙二醛MDA(批號20161120)、甘油三酯TG(批號20161120)試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所。

1.1.3 黃芪粗提物的制備 黃芪飲片100 g，浸泡過夜，加熱回流，過濾，重復(fù)3次，濃縮,使其按生藥量計(jì)算為0.6 g/mL，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)分組、造模與給藥 將36只小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、陽性組和黃芪粗提物高、中、低劑量組，每組6只。藥物組分別灌胃8、4、2 g/kg黃芪粗提物，陽性組以0.1 mL/10 g灌胃15 mg/kg聯(lián)苯雙酯，空白組和模型組灌胃等體積生理鹽水(0.1 mL/10 g)，1次/d，連續(xù)15 d。末次給藥后24 h給小鼠腹腔注射100 mL/L CCl4溶液10 mL/kg。

1.2.2 各項(xiàng)指標(biāo)的檢測 末次給藥24 h后稱重，采血，分離血清；剝離肝臟，稱肝臟濕重，部分肝臟制備100 mg/mL肝組織勻漿。分別對肝臟指數(shù)，血清中ALT、AST、MDA及肝臟中TG的含量進(jìn)行測定，部分肝臟100 mL/L中性甲醛溶液固定，HE染色，觀察病理組織學(xué)變化。

2 結(jié)果

2.1 黃芪粗提物對小鼠肝臟指數(shù)的影響

由表1可知，與空白組比較，模型組極顯著增加小鼠肝臟指數(shù)(P<0.01)。與模型組比較，黃芪粗提物高劑量組極顯著降低肝臟指數(shù)(P<0.01)，黃芪粗提物中劑量組顯著降低肝臟指數(shù)(P<0.05)。結(jié)果表明，黃芪粗提物高、中劑量組能顯著降低肝臟指數(shù)，且呈一定的量效關(guān)系。

2.2 黃芪粗提物對小鼠血清中ALT、AST、MDA及肝臟中TG的影響

由表2可知，與空白組比較，模型組極顯著增加小鼠血清中ALT、AST、MDA及肝臟中TG的含量(P<0.01)。與模型組比較，黃芪粗提物高劑量組極顯著降低小鼠血清中ALT、AST、MDA及肝臟中TG的含量(P<0.01)，黃芪粗提物中劑量組極顯著降低小鼠血清中ALT、AST、MDA的含量(P<0.01)，黃芪粗提物中劑量組顯著降低小鼠肝臟中TG的含量(P<0.05)，黃芪粗提物低劑量組顯著降低小鼠肝臟中ALT和AST及肝臟中TG的含量(P<0.05)。結(jié)果表明，黃芪粗提物高、中、低劑量組能顯著降低小鼠血清中ALT、AST、MDA及肝臟中TG的含量，且呈一定的量效關(guān)系。

表1 黃芪粗提物對小鼠肝臟指數(shù)的影響

注：與空白組比較，##P<0.01；與模型組比較，**P<0.01，*P<0.05。

Note:Compared with control group,##P<0.01;Compared with model group,**P<0.01,*P<0.05.

表2 黃芪粗提物對小鼠血清中MDA、AST、ALT及肝臟中的TG的影響

注：與空白組比較，##P<0.01；與模型組比較，**P<0.01，*P<0.05。

Note:Compared with control group,##P<0.01;Compared with model group,**P<0.01,*P<0.05.

2.3 病理組織學(xué)觀察

如圖1所示，小鼠肝組織HE染色可見，空白組小鼠肝小葉形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，肝索結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞排列整齊(圖1A)。模型組小鼠肝索紊亂，肝小葉失去正常結(jié)構(gòu)，肝竇變窄，肝竇周圍出現(xiàn)大面積肝纖維化病變，肝細(xì)胞明顯變性、壞死，細(xì)胞破裂，間質(zhì)充血，細(xì)胞核固縮、溶解，部分可見炎性細(xì)胞浸潤(圖1B)。陽性組小鼠肝細(xì)胞及肝小葉結(jié)構(gòu)較正常，部分肝細(xì)胞破裂，核溶解消失(圖1C)。黃芪粗提物高、中、低各組均能不同程度改善小鼠肝纖維化程度。黃芪粗提物高劑量組肝竇變窄，有輕微充血，少量肝細(xì)胞破裂(圖1D)；黃芪粗提物中劑量組肝竇變窄，有輕微炎性細(xì)胞浸潤，有大量細(xì)胞失去細(xì)胞基本結(jié)構(gòu)，細(xì)胞核溶解消失(圖1E)；黃芪粗提物低劑量組肝竇周圍仍有肝纖維化病變，間質(zhì)充血，大量肝細(xì)胞破裂，細(xì)胞核溶解(圖1F)。由此可見，黃芪粗提物高、中、低劑量組均可不同程度減輕CCl4誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷。

A.空白組；B.模型組；C.聯(lián)苯雙酯組；D.黃芪粗提物高劑量組；E.黃芪粗提物中劑量組；F.黃芪粗提物低劑量組

A.Control group；B.Model group；C.Bifendate group；D.Astragaluscrude extract high dose group；E.Astragaluscrude extract mid dose group；F.Astragaluscrude extract low dose group

圖1各組小鼠肝組織病變(HE,100×)

Fig.1 Hepatic histopathological lesions of mice in different groups(HE,100×)

3 討論

肝損傷是一個(gè)復(fù)雜病理過程，主要包括酒精性肝損傷、藥物性肝損傷、化學(xué)性肝損傷和病毒性肝炎等[7]。CCl4是一種趨肝毒物，能夠強(qiáng)烈引起肝細(xì)胞壞死、肝臟損傷、肝臟纖維化和肝臟腫瘤[8]。黃芪為臨床常用中藥，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗應(yīng)激、降壓等作用[9]。王忠利等[10]研究表明，黃芪多糖可能通過降低炎癥因子對免疫性肝損傷具有保護(hù)作用，本實(shí)驗(yàn)室也已證明黃芪粗提物對酒精造成的小鼠急性肝損傷有一定的治療作用[11]，但對CCl4誘導(dǎo)的急性肝損傷研究較少。本試驗(yàn)以CCl4急性肝損傷為模型，研究黃芪粗提物對CCl4誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。

臟器重量及臟器系數(shù)可作為大體確定對應(yīng)器官病變程度的參考[12]。本試驗(yàn)通過稱量肝臟重量及計(jì)算肝臟系數(shù)作為重要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。ALT和AST是由肝臟合成的，能夠直接反映肝功能變化的兩種主要酶。當(dāng)肝臟受到致病因素侵害時(shí)，肝臟結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，導(dǎo)致血清中ALT和AST活性增加[13]。ALT主要分布于細(xì)胞漿中，對肝細(xì)胞的損傷較為敏感，當(dāng)肝臟受到損傷，導(dǎo)致細(xì)胞通透性增高及線粒體損傷時(shí)，ALT可依據(jù)肝臟受損程度發(fā)生不同程度的活性變化[14]。AST主要存在細(xì)胞核和線粒體中，當(dāng)肝臟損傷時(shí)其被釋放進(jìn)入血液，同樣可以作為判斷肝臟受損程度的指標(biāo)[15]。MDA是脂質(zhì)過氧化作用的主要產(chǎn)物，能夠嚴(yán)重?fù)p傷生物膜結(jié)構(gòu)[16]，而脂質(zhì)過氧化物的分解產(chǎn)物可引起細(xì)胞損傷，測定MDA的量常?？梢苑从硻C(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接地反映出細(xì)胞損傷的程度。TG對維持正常細(xì)胞結(jié)構(gòu)、細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)以及能量代謝等都起到非常重要的作用[17]。在本試驗(yàn)中，黃芪粗提物高、中、低劑量組均能降低脾臟指數(shù)，降低血清中ALT、AST和MDA及肝臟中TG的含量，說明黃芪粗提物對小鼠CCl4誘導(dǎo)的急性肝損傷可以起到保護(hù)作用。

總之，黃芪粗提物通過降低肝臟指數(shù)，降低血清中ALT、AST和MDA及肝臟中TG的含量，減輕肝纖維化的程度，進(jìn)而對CCl4誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷起到保護(hù)作用。