陶瑛妮 羅云云 杜偉鋒 葛衛(wèi)紅?

片姜黃為姜黃植物溫郁金的干燥根莖。溫郁金的不同部位采用不同加工方法可制成的三種不同的中藥，原植物溫郁金的干燥塊根蒸或煮至透心后作溫郁金入藥，其根莖鮮品蒸或煮至透心后作溫莪術(shù)入藥，其根莖鮮品直接切片則作片姜黃入藥［1］，三種不同的中藥雖均有活血化瘀的作用，但在臨床使用中仍有一定的差異?，F(xiàn)代藥理認(rèn)為痛經(jīng)是前列腺素等相關(guān)激素的改變導(dǎo)致子宮強(qiáng)烈痙攣，以前列腺素E2（PGE2）、前列腺素F2α（PGF2α），血管加壓素（AVP），β-內(nèi)啡肽（β-EP）為主，活血化瘀中藥能夠通過調(diào)節(jié)諸多激素水平的變化達(dá)到改善微循環(huán)、擴(kuò)張血管或加快血流的作用，對于緩解疼痛具有重要意義［2-3］。2017年9月至2018年3月作者通過實(shí)驗(yàn)研究，探討片姜黃產(chǎn)地加工與傳統(tǒng)加工在痛經(jīng)模型中的等效性。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)藥物 片姜黃原藥材采自浙江溫州瑞安市陶山鎮(zhèn)，經(jīng)浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥飲片有限公司質(zhì)檢科鑒定為姜科植物溫郁金的干燥根莖，為傳統(tǒng)趁鮮切制的飲片之一。傳統(tǒng)加工方法為植物溫郁金冬季莖葉枯萎后采挖，取其主根和側(cè)根，洗凈，除去須根，趁鮮切縱厚片，曬干或陰干至恒重，即得；產(chǎn)地鮮切加工方法為植物溫郁金冬季莖葉枯萎后采挖，取其主根和側(cè)根，洗凈，除去須根，趁鮮切縱厚片，55℃恒溫鼓風(fēng)干燥，即得。

1.2 動物 清潔級雌性ICR小鼠108只，6～8周齡，體重（28±2）g，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，動物許可證號SCXK（滬）2013-0016。飼養(yǎng)環(huán)境溫度20～25℃，濕度40%～60%，12h/12h光亮/黑暗條件。

1.3 試劑 苯甲酸雌二醇（上海創(chuàng)賽科技有限公司），注射用大豆油（上海創(chuàng)賽科技有限公司），縮宮素注射液（上海禾豐制藥有限公司），痛經(jīng)寶顆粒（河南宛西制藥股份有限公司），前列腺素E2（PGE2）ELISA檢測試劑盒、前列腺素F2α（PGF2α）ELISA檢測試劑盒（均購自美國Cayman化學(xué)試劑有限公司，血管加壓素（AVP）ELISA檢測試劑盒，β-內(nèi)啡肽（β-EP）ELISA檢測試劑盒（均購自上海酶聯(lián)試劑有限公司）。

1.4 儀器 數(shù)顯電子恒溫水浴鍋（天津泰斯特儀器有限公司），Al-204型電子分析天平（瑞士梅特勒托利多儀器有限公司），BP210S型1/10萬電子天平（瑞士Sartorius公司），KQ-500DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司），Powerwave340酶標(biāo)儀（美國 BIO-TEK公司）；MICROCL17微量離心機(jī)（美國Thermo公司）。

1.5 方法 （1）實(shí)驗(yàn)樣品制備：取不同加工片姜黃飲片各105.3g，加10倍量水，水浴加熱回流1h，取濾液，再加10倍量水，水浴加熱回流1h，合并濾液，濃縮至300ml，得片姜黃水提液0.39g/ml（高劑量），再加水稀釋至0.26g/ml（中劑量）、0.13g/ml（低劑量）；取痛經(jīng)寶顆粒20g加水51ml，得0.39g/ml陽性藥，灌胃量均為0.1ml/15g。（2）痛經(jīng)模型構(gòu)建與給藥：①分組：108只ICR小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，小鼠編號，然后按照隨機(jī)數(shù)字法則分為9組，分別為正常組、模型組、陽性藥組［痛經(jīng)寶顆粒2.6g/（kg·d）］，鮮切片姜黃高劑量組［3.51g/（kg·d）］、鮮切片姜黃中劑量組［2.34g/（kg·d）］，鮮切片姜黃低劑量組［1.17g/（kg·d）］，傳統(tǒng)片姜黃高劑量組［3.51g/（kg·d）］，傳統(tǒng)片姜黃中劑量組［2.34g/（kg·d）］，傳統(tǒng)片姜黃低劑量組［1.17g/（kg·d）］。每組各12只。②造模：除正常組外，其余各組連續(xù)15d于上午9時(shí)皮下注射苯甲酸雌二醇溶液［第1天和第15天給予2.5mg/（kg·d），第2～14天給予1mg/kg·d］，正常組注射相應(yīng)劑量大豆油；在第4天給予苯甲酸雌二醇1h后開始給藥，各組均灌胃給予受試藥，1次/d，連續(xù)12d，模型組和正常組給予等體積生理鹽水；最后1次灌胃40min后，腹腔注射縮宮素20U/kg，記錄30min內(nèi)扭體次數(shù)。（3）子宮勻漿中PGE2、PGF2α和血清中AVP、β-EP活性檢測：扭體計(jì)數(shù)后，小鼠眼眶取血1.5ml，離心取血清，眼眶取血后小鼠脫頸處死，再取0.1g于900μl生理鹽水中，勻漿取上清液；按照試劑盒說明書要求分別測定PGE2、PGF2α、AVP、β-EP活性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，多組間比較用單因素方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 外觀區(qū)別 傳統(tǒng)片姜黃飲片外皮呈灰黃色，粗糙皺縮，有可見的環(huán)節(jié)及須根痕。切面呈棕灰色，有一圈環(huán)紋及多數(shù)筋脈小點(diǎn)，質(zhì)脆而堅(jiān)實(shí)。斷面灰白色至棕黃色，略粉質(zhì)，氣香清新特異。鮮切片姜黃飲片外皮呈灰黃色至棕黃色，粗糙皺縮，有可見的環(huán)節(jié)，須根痕對比傳統(tǒng)片姜黃飲片較不明顯，切面呈棕黃色，顏色較傳統(tǒng)片姜黃飲片更加鮮艷，有一圈環(huán)紋及多數(shù)靜脈小點(diǎn)。斷面呈棕黃色，略粉質(zhì)，氣香濃厚［4］。

2.2 姜黃對痛經(jīng)模型小鼠的鎮(zhèn)痛作用 見表1。

表1 各劑量組片姜黃對痛經(jīng)模型小鼠的鎮(zhèn)痛作用（±s）

表1 各劑量組片姜黃對痛經(jīng)模型小鼠的鎮(zhèn)痛作用（±s）

注：與模型組比較，*P＜0.01；與正常組比較，#P＜0.01

組別 劑量（g/kg） 痛經(jīng)扭體次數(shù)模型組 - 40.125±5.939#陽性藥組 2.6 9.250±3.955*#傳統(tǒng)片姜黃低劑量 1.3 13.250±5.751*#傳統(tǒng)片姜黃中劑量 2.6 10.000±6.590*#傳統(tǒng)片姜黃高劑量 3.9 8.375±4.689*#鮮切片姜黃低劑量 1.3 14.125±6.490*#鮮切片姜黃中劑量 2.6 10.375±7.249*#鮮切片姜黃高劑量 3.9 8.875±5.330*#正常組 - 0*

2.3 各組PGE2、PGF2α、AVP、β-EP測定結(jié)果比較 見表2、圖1、2。

表2 各組PGE2、PGF2α、AVP、β-EP測定結(jié)果比較（±s）

表2 各組PGE2、PGF2α、AVP、β-EP測定結(jié)果比較（±s）

注：與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與正常組比較#P＜0.05，##P＜0.01

組別 PGE2（pg/ml） PGF2α（pg/ml） PGF2α/PGE2 β-EP（pg/ml） AVP（pg/ml）模型組 22.28±3.10## 85.52±19.11## 4.23±1.08## 5.86±0.70## 17.41±1.77##痛經(jīng)寶顆粒組 13.78±4.18** 47.08±6.67**## 2.82±0.34**## 9.32±1.27** 10.99±1.14**傳統(tǒng)片姜黃低劑量 17.61±1.78**## 59.08±8.41**## 3.19±0.15**## 7.21±0.97*## 14.03±1.32**##傳統(tǒng)片姜黃中劑量 17.40±2.42**## 54.99±8.84**## 2.77±0.34**## 7.83±1.18**## 12.95±1.48**##傳統(tǒng)片姜黃高劑量 17.11±0.81**## 52.50±7.16**## 3.12±0.23**## 8.84±1.12**# 12.29±0.91**##鮮切片姜黃低劑量 18.84±4.14*## 54.08±13.36**## 3.08±0.55**## 7.81±1.10**## 14.14±1.13**##鮮切片姜黃中劑量 17.21±2.81**## 52.30±6.28**## 3.07±0.32**## 7.72±1.15**## 13.55±1.37**##鮮切片姜黃高劑量 16.35±2.28**## 54.35±12.44**## 3.60±0.36**## 8.21±0.91**## 12.92±1.02**##正常組 11.28±3.89** 28.80±8.47** 2.00±0.15** 9.99±0.93** 7.87±0.95**

圖1 PGE2、PGF2α比較

圖2 扭體次數(shù)與AVP比較

3 討論

張曉東認(rèn)為“痛經(jīng)”有虛實(shí)寒熱，核心為瘀，因體內(nèi)氣血陰陽的平衡被打破，致氣滯、寒凝、熱結(jié)、濕積、氣血陰陽虧虛等證，同致為瘀；瘀阻致陽氣運(yùn)行受阻，胞宮失于陽氣的溫煦，胞宮陽氣不足，內(nèi)寒自生；瘀則不通，不通則痛［5］。而片姜黃作為常用的活血化瘀藥，具有破血行氣，通經(jīng)止痛功效。對于血瘀氣滯具有較好的治療作用。

本資料顯示，模型組的扭體次數(shù)和PGE2、PGF2α及AVP含量高于正常組和治療組，而β-EP含量低于治療組和正常組。文獻(xiàn)研究指出前列腺素（PG）合成和分泌過多，一直被醫(yī)學(xué)界認(rèn)為是原發(fā)性痛經(jīng)的重要機(jī)制，子宮內(nèi)膜上的螺旋動脈壁中含有PGF2α的作用受體，當(dāng)其與這些受體作用時(shí)，可引起子宮血管收縮，子宮體的供血也會受到影響，導(dǎo)致子宮血供減少，也會發(fā)生不可避免的疼痛。而PGE2則是讓子宮停止收縮和促進(jìn)子宮舒張，這兩者一張一弛，共同調(diào)控子宮活動［6-7］。且在經(jīng)行期間PGF2α/PGE2比值也相對高，使子宮肌層活動加強(qiáng)，但PGF2α增加程度高于PGE2，比值的升高促使子宮平滑肌收縮，子宮血流量降低，繼而發(fā)生強(qiáng)烈的痙攣性收縮效應(yīng)，造成疼痛。血管加壓素AVP作為子宮肌收縮的必需因子，可作用于子宮 V1 加壓素受體，引起子宮肌層活動增強(qiáng)和子宮收縮，尤其可引起子宮肌層小血管收縮，引起缺血和疼痛［9］。刺激原發(fā)性痛經(jīng)患者加壓素分泌可導(dǎo)致子宮收縮活性增加，加重痛經(jīng)癥狀。另一方面加壓素可直接促進(jìn) PGs 的生成，增強(qiáng)子宮平滑肌對宮縮藥物的敏感性，使子宮血運(yùn)減少從而引發(fā)原發(fā)性痛經(jīng)［8］。β-內(nèi)啡肽（β-EP）是一類具有嗎啡樣活性的神經(jīng)多肽，具有內(nèi)源性鎮(zhèn)痛作用，子宮是其作用的靶器官之一。β-EP濃度的上升可緩解子宮肌痙攣，舒張子宮血管，改善子宮血流變，達(dá)到解除或緩解疼痛的目的［9］。

片姜黃作為莪術(shù)類藥材，莪術(shù)油及其莪術(shù)醇、莪術(shù)二酮、吉馬酮、欖香烯及姜黃素等組分是藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。使其具有較好的抗腫瘤、抗炎鎮(zhèn)痛、抗血栓凝血、增強(qiáng)機(jī)體免疫等作用［10］。其中莪術(shù)二酮能夠抑制體內(nèi)血栓的形成，具有抗凝血的作用，姜黃素具有較好的活血祛瘀的作用。本資料結(jié)果表明兩種加工方法對片姜黃在通經(jīng)止痛等效，且產(chǎn)地鮮切加工采用烘干法，節(jié)省干燥時(shí)間，提高加工效率，降低生產(chǎn)成本，能夠減少其長時(shí)間暴露在空氣中的二次污染，更具安全性。