張帆 趙春輝 陳麗 黃明月

[摘要]目的 探討秋水仙堿長(zhǎng)期干預(yù)高脂飲食大鼠的安全性。方法 將30只SPF級(jí)健康雄性8周齡SD大鼠隨機(jī)分為3組，各10只。對(duì)照組大鼠采用基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)+生理鹽水管飼喂養(yǎng)8周；高脂組大鼠采用按比例配方的高脂喂養(yǎng)+生理鹽水管飼喂養(yǎng)8周，觀察組大鼠采用按比例配方的高脂喂養(yǎng)并給予秋水仙堿[0.02 mg/（kg·d）]管飼喂養(yǎng)8周，比較三組大鼠的骨髓抑制情況和免疫功能。結(jié)果 觀察組的白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白的骨髓抑制發(fā)生率高于對(duì)照組、高脂組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。觀察組的CD3、CD8、CD56、CD4/CD8高于對(duì)照組、高脂組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。觀察組斑塊內(nèi)浸潤(rùn)的巨噬細(xì)胞個(gè)數(shù)為（17.93±3.87）%，低于高脂組的（22.98±2.12）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與對(duì)照組的（16.78±2.98）%比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 長(zhǎng)期應(yīng)用秋水仙堿干預(yù)高脂飲食大鼠會(huì)引起大鼠的骨髓抑制和免疫功能紊亂，該研究結(jié)果也提示臨床治療應(yīng)綜合考慮，進(jìn)行全面評(píng)估，以提高治療效果。

[關(guān)鍵詞]高脂飲食；骨髓抑制；大鼠；免疫功能

[中圖分類號(hào)] R332 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2018）11（c）-0037-03

[Abstract] Objective To explore the safety of Colchicine for long-term intervention in rats fed with high-fat diet. Methods Thirty healthy and male rats （SPF grade） were randomly divided into the 3 groups， and there were 10 rats in each group. Rats in the control group were fed with basal feed and saline for 8 weeks. Rats in the high-fat group were given proportionally formulated high-fat feeding + saline tube feeding for 8 weeks. The rats in the observation group were given proportionally formulated high-fat feeding + Colchicine （0.02 mg/[kg·d]） tube feeding for 8 weeks. Bone marrow suppression and immune function were compared in rats among the three groups. Results The incidence of myelosuppression of leukocytes， erythrocytes， and hemoglobin in the observation group was higher than that of the control group and high-fat group reapectively， and the differences were statistically significant （P<0.05）. The CD3， CD8， CD56， and CD4/CD8 in the observation group was higher than that of the control group and high-fat group reapectively， and the differences were statistically significant （P<0.05）. The number of infiltrating macrophages in plaque of the observation group was （17.93±3.87）%， which was significantly lower than that of the high-fat group （[22.98±2.12] %）， and the difference was statistically significant （P<0.05）， and there was no significant difference between the observation group and control group （[16.78±2.98]%） （P>0.05）. Conclusion Long-term use of Colchicine in rats with high-fat diet can cause myelosuppression and immune dysfunction. The results also suggest that clinical treatment should be considered comprehensively and evaluated comprehensively in order to improve the therapeutic effect.

[Key words] High fat diet； Myelosuppression； Rats； Immune function

動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）是血管內(nèi)皮損傷導(dǎo)致的以脂質(zhì)沉積和慢性炎癥反應(yīng)為特點(diǎn)的血管壁病變[1-2]。動(dòng)脈硬化斑塊的發(fā)生、發(fā)展乃至不穩(wěn)定斑塊的破裂已證實(shí)與炎癥反應(yīng)有關(guān)，其中炎癥因子起重要作用。由于炎癥反應(yīng)是機(jī)體防御功能的一部分，抗AS藥物長(zhǎng)期應(yīng)用產(chǎn)生的抗炎作用可降低機(jī)體的防御功能，因此長(zhǎng)期應(yīng)用秋水仙堿導(dǎo)致的骨髓抑制、糖皮質(zhì)激素以及免疫抑制劑等會(huì)誘發(fā)感染等不良反應(yīng)[3-5]。本研究通過探討秋水仙堿對(duì)高脂飲食大鼠的骨髓功能和免疫功能的影響，明確秋水仙堿長(zhǎng)期干預(yù)高脂飲食大鼠的安全性。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)所用健康雄性SD大鼠為SPF級(jí)的8周齡大鼠由廣東省某實(shí)驗(yàn)提供，共30只，體重（205±20）g。

1.2分組與喂養(yǎng)

30只大鼠用隨機(jī)分為三組，每組10只。對(duì)照組采用基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)+生理鹽水管飼喂養(yǎng)8周；高脂組采用按比例配方的高脂喂養(yǎng)+生理鹽水管飼喂養(yǎng)8周，觀察組采用按比例配方的高脂喂養(yǎng)并給予秋水仙堿（云南植物藥業(yè)有限公司，0.02 mg/（kg·d）喂養(yǎng)8周，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后收集大鼠血液，待測(cè)。

1.3血清指標(biāo)的檢測(cè)

在治療前及治療完成后采集外周血2 ml，F(xiàn)icoll 密度梯度離心法分離淋巴細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè) CD3、CD4、CD8、CD56 T細(xì)胞水平變化，評(píng)價(jià)機(jī)體的免疫功能。

主動(dòng)脈HE染色，測(cè)定斑塊的面積，脂質(zhì)核心面積、纖維帽的厚度，斑塊內(nèi)浸潤(rùn)的巨噬細(xì)胞個(gè)數(shù)。大鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型成功的判斷標(biāo)準(zhǔn)為：主動(dòng)脈管腔變小，內(nèi)膜明顯增厚，內(nèi)膜下大量平滑肌細(xì)胞（SMC）增生，脂質(zhì)斑塊彌漫，可見泡沫細(xì)胞積聚，斑塊底部泡沫細(xì)胞發(fā)生變性壞死，內(nèi)彈力層和中彈力板發(fā)生變性、斷裂和崩解，在內(nèi)膜和中膜均出現(xiàn)了大量的斑快和炎細(xì)胞浸潤(rùn)，其中易損斑塊的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：纖維帽（<65 μm），大面積壞死的脂質(zhì)核心占斑塊面積30%以上，其中還含有大量巨噬細(xì)胞等炎癥細(xì)胞（>25個(gè)/高倍鏡下）及少量的平滑肌細(xì)胞。

治療后進(jìn)行大鼠的血常規(guī)檢查，骨髓的抑制程度根據(jù)WHO分為0～Ⅳ級(jí)：0級(jí)：白細(xì)胞≥4.0×109/L，血紅蛋白≥110 g/L，血小板≥100×109/L；Ⅰ級(jí)：白細(xì)胞（3.0～3.9）×109/L，血紅蛋白95～100 g/L，血小板（75～99）×109/L；Ⅱ級(jí)：白細(xì)胞（2.0～2.9）×109/L，血紅蛋白80～94 g/L，血小板（50～74）×109/L；Ⅲ級(jí)：白細(xì)胞（1.0～1.9）×109/L ，血紅蛋白65～79 g/L，血小板（25～49）×109/L；Ⅳ級(jí)：白細(xì)胞（0～1.0）×109/L ，血紅蛋白<65g/L，血小板<25×109/L。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用x±s表示，組間比較采用兩樣本獨(dú)立t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 三組大鼠骨髓抑制發(fā)生率的比較

觀察組的白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白的骨髓抑制發(fā)生率高于對(duì)照組、高脂組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；觀察組和高脂組的白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白的骨髓抑制發(fā)生率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

2.2三組大鼠免疫功能相關(guān)指標(biāo)的比較

高脂組與對(duì)照組大鼠的CD3、CD4、CD8、CD56、CD4/CD8比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），高脂組與觀察組的CD3、CD8、CD56、CD4/CD8比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但高脂組與觀察組的CD4比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表2）。

2.3 主動(dòng)脈HE染色結(jié)果

對(duì)照組大鼠血管壁內(nèi)膜、中膜、外膜及平滑肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰、細(xì)胞排列整齊，高脂組和觀察組大鼠的主動(dòng)脈官腔可見典型的纖維斑塊及粥樣斑塊，內(nèi)膜明顯增厚，但是高脂組大鼠的斑塊體積較大，融合成片，官腔較狹窄，形成的斑塊多為纖維帽薄，脂質(zhì)核心大的斑塊，符合易損斑塊的特點(diǎn)，但是經(jīng)過秋水仙堿干預(yù)的大鼠的動(dòng)脈斑塊病變程度淺，斑塊的病變較為局限，官腔的狹窄程度較輕，形成的粥樣斑塊多為纖維帽厚，脂質(zhì)核心小的穩(wěn)定性的斑塊（圖1）。

高脂組斑塊內(nèi)浸潤(rùn)的巨噬細(xì)胞個(gè)數(shù)為（22.98±2.12）%，顯著高于對(duì)照組的（16.78±2.98）%，觀察組為（17.93±3.87）%，顯著低于高脂組（P<0.05），觀察組斑塊內(nèi)浸潤(rùn)的巨噬細(xì)胞個(gè)數(shù)與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

3討論

秋水仙堿雖然能降低穩(wěn)定性冠心病患者的血漿hs-CRP濃度，縮短患者的住院時(shí)間等，但是長(zhǎng)期使用秋水仙堿則會(huì)發(fā)生骨髓抑制等不良反應(yīng)[6-8]。本研究結(jié)果顯示，高脂飲食并不能引起大鼠的骨髓抑制，但是長(zhǎng)期使用秋水仙堿干預(yù)高脂飲食大鼠后，大鼠的白細(xì)胞、血紅細(xì)胞和血小板的毒性程度發(fā)生了改變，因此，在秋水仙堿用藥中，要密切關(guān)注骨髓抑制的癥狀[9]。

長(zhǎng)期的秋水仙堿藥物使用對(duì)大鼠的免疫功能也造成了很大的影響[10-12]，本研究結(jié)果顯示，觀察組大鼠外周血中的CD8、CD56、CD4/CD8在秋水仙堿藥物干預(yù)后呈顯著上升趨勢(shì)，CD4細(xì)胞的含量雖然無明顯變化，但是CD4/CD8顯著降低，提示大鼠的免疫功能已經(jīng)紊亂[13-15]，但是其對(duì)免疫功能的影響機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

斑塊內(nèi)的巨噬細(xì)胞對(duì)粥樣斑塊的穩(wěn)定性起很重要的作用。巨噬細(xì)胞能損傷內(nèi)皮細(xì)胞[16-18]，分泌的活性金屬蛋白酶會(huì)降解斑塊中的膠原和細(xì)胞外物質(zhì)，引起纖維帽變薄，血管的易損性增加。本研究結(jié)果顯示，秋水仙堿可以顯著降低巨噬細(xì)胞的數(shù)量，起穩(wěn)定斑塊的作用[19-20]，這與主動(dòng)脈的HE染色結(jié)果是一致的。

綜上所述，長(zhǎng)期應(yīng)用秋水仙堿干預(yù)高脂飲食大鼠會(huì)引起大鼠骨髓抑制，導(dǎo)致大鼠的免疫功能紊亂，該研究結(jié)果也提示臨床治療中應(yīng)綜合考慮，對(duì)患者進(jìn)行全面評(píng)估，提高其治療效果。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Wang JP，Cui RY，Zhang KY，et al.High-fat diet increased renal and hepatic oxidative stress induced by vanadium of Wistar rat[J].Biol Trace Elem Res，2016，170（2）：415-423.

[2]Aydi R，Gara AB，Chaaben R，et al.Hypolipidemic effect of dihydroisoquinoline oxaziridine in high-fat diet-fed rats[J].Biomed Pharmacother，2016，82：660-668.

[3]王天祺，楊穎達(dá).他克莫司與來氟米特治療特發(fā)性膜性腎病的效果及安全性對(duì)比[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2018，25（2）：138-140.

[4]Kolsi RBA，Jardak N，Hajkacem F，et al.Anti-obesity effect and protection of liver-kidney functions by Codium fragile，sulphated polysaccharide on high fat diet induced obese rats[J].Int J Biol Macromol，2017，102：119-129.

[5]李紅山，應(yīng)豪，胡愛榮，等.中藥組分HJJB方對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪性肝炎大鼠的防治作用[J].中華中醫(yī)藥雜志，2017，32（7）：3166-3169.

[6]Annamalai S，Mohanam L，Alwin D，et al.Effect of combination therapy of melatonin and orlistat on high fat diet induced changes in lipid profiles and liver function parameters in serum of rats[J].Obes Med，2016，2：41-45.

[7]郭紅英，康曉冬.白血病患兒化療后骨髓抑制期預(yù)防感染的護(hù)理[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2014，21（36）：132-134.

[8]Jackson CM，Alexander BT，Roach L，et al. Exposure to maternal overnutrition and a high-fat diet during early postnatal development increases susceptibility to renal and metabolic injury later in life[J].Am J Physiol Renal Physiol，2012，302（6）：F774-F783.

[9]Kohsaka A，Laposky A D，Ramsey KM，et al.High-fat diet disrupts behavioral and molecular circadian rhythms in mice[J].Cell Metab，2007，6（5）：414-421.

[10]Yamada-Obara N，Yamagishi SI，Taguchi K，et al.Maternal exposure to high-fat and high-fructose diet evokes hypoadiponectinemia and kidney injury in rat offspring[J].Clin Exp Nephrol，2016，20（6）：853-861.

[11]楊佩磊，蔣劍平，李全清，等.胡柚皮黃酮對(duì)高脂血癥大鼠的降血脂作用研究[J].中國(guó)中藥雜志，2017，42（5）：936-943.

[12]Kolsi RBA，Jardak N，Hajkacem F，et al.Anti-obesity effect and protection of liver-kidney functions by Codium fragile，sulphated polysaccharide on high fat diet induced obese rats[J].Int J Biol Macromol，2017，102：119-129.

[13]譚小云，張靖，周少毅，等.經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈硬化栓塞術(shù)聯(lián)合長(zhǎng)春新堿治療激素抵抗型嬰幼兒Kasabach-Merritt綜合征[J].中華放射學(xué)雜志，2014，48（11）：934-937.

[14]李國(guó)偉，張貴鋒.高脂誘導(dǎo)的非酒精性脂肪性肝病伴胰島素抵抗大鼠模型建立方法[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2013，20（29）：6-8.

[15]劉俊峰.藥物對(duì)常用臨床生化檢驗(yàn)指標(biāo)的影響及對(duì)策分析[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2016，14（8）：47-48.

[16]范奎，代良敏，伍振峰，等.放化療所致骨髓抑制的研究進(jìn)展[J].中華中醫(yī)藥雜志，2017，32（1）：210-214.

[17]管斯琪，陳培豐，祝雨田，等.熟地黃多糖對(duì)阿霉素致小鼠骨髓抑制及免疫功能損傷的影響[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，38（3）：312-315.

[18]王靜靜.新型微管靶向抑制劑LL-01和LL-02抗腫瘤活性與機(jī)制研究[D].濟(jì)南：山東大學(xué)，2016.

[19]劉玲，韓江全，劉潤(rùn)妮.他汀類藥物對(duì)細(xì)胞因子及頸內(nèi)動(dòng)脈內(nèi)膜的影響研究進(jìn)展[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2015，22（7）：15-19.

[20]金玲，楊欽河，張玉佩，等.參苓白術(shù)散對(duì)NAFLD大鼠肝組織Nrf2/ARE信號(hào)通路的影響[J].中藥新藥與臨床藥理，2016，27（3）：327-332.