錢昌銀，程曉峰，劉 華，何長生，占松鶴

（1. 合肥市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，安徽合肥 230091；2. 安徽省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，安徽合肥 230091）

高致病性禽流感（HPAI）是困擾全球養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的主要禽病之一，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為法定通報(bào)動(dòng)物疫病[1-2]，被我國列為一類動(dòng)物疫病，其中H5亞型HPAI被我國列為強(qiáng)制免疫和監(jiān)測(cè)病種之一[3]。2017年上半年，全國多地發(fā)生由H7亞型流感病毒變異株（高致病性毒株）引發(fā)的疫情，為此農(nóng)業(yè)農(nóng)村部將H7亞型（H7-Re1株）與H5亞型（Re-8株）一并納入強(qiáng)制免疫范圍[4]，使用重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗（H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株）（以下簡稱H5+H7二價(jià)苗）進(jìn)行秋季集中免疫。為評(píng)價(jià)該疫苗的免疫效果，從合肥市所轄11個(gè)縣（市、區(qū)），隨機(jī)選50個(gè)場群，采集家禽血清樣品集中進(jìn)行H5和H7亞型抗體檢測(cè)，以便為決策部門防控措施的制訂提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 抽樣策略

按照安徽省農(nóng)委《關(guān)于印發(fā)2017年全省動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查計(jì)劃的通知》（皖農(nóng)牧〔2017〕56號(hào)），采用估計(jì)免疫抗體陽性率方法，設(shè)預(yù)期免疫抗體合格率85%、可接受誤差10%，在95%置信水平下，計(jì)算出理論上需采集49個(gè)場群。結(jié)合合肥市實(shí)際，在所轄的11個(gè)縣（市、區(qū)）隨機(jī)抽取了50個(gè)場群，包括32個(gè)養(yǎng)殖場、10個(gè)活禽市場和8個(gè)自然村散養(yǎng)禽。對(duì)場群，按照?qǐng)鋈侯愋秃鸵?guī)模大小[5]，采用系統(tǒng)抽樣法，在大型養(yǎng)殖場抽取80份個(gè)體，在中小規(guī)模場抽取30份，在活禽市場抽取15份，在每個(gè)自然村抽取散養(yǎng)禽10份。

1.2 樣品采集

翅靜脈采血，每份約2 mL，自然凝固析出血清，2 500 r/min離心備檢。

1.3 檢測(cè)試劑

H5亞型禽流感病毒（Re-8株）血凝抑制試驗(yàn)抗原（批號(hào)2016007）、H7亞型流感病毒（H7N9株）血凝抑制試驗(yàn)抗原（批號(hào)2017002）：均為哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司產(chǎn)品。

1.4 試驗(yàn)器材

單道、多道移液器，90°96孔V型微量反應(yīng)板，微量振蕩器，低速離心機(jī)，等等。

1.5 檢測(cè)方法與判定標(biāo)準(zhǔn)

按照GB/T 18936—2003，采用血凝（HA）與血凝抑制（HI）試驗(yàn)，檢測(cè)禽流感免疫抗體。個(gè)體HI抗體效價(jià)≥24，判為個(gè)體合格，群體免疫抗體合格率≥70%，判為群體合格[6]。H5和H7群體免疫抗體合格率均≥70%，判為合格場群。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

用Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，用SPSS 20統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)相關(guān)結(jié)果進(jìn)行卡方檢驗(yàn)和Fisher氏確切檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 整體情況

50個(gè)場群中，使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗的場群占64.0%（32/50）；H5亞型群體免疫抗體合格率≥70%的38個(gè)，場群合格率為76.0%（38/50），H7亞型群體免疫抗體合格率≥70%的25個(gè)，場群合格率為50.0%。共采集家禽血清樣品1 670份，檢出H5亞型抗體合格樣品1 442份，個(gè)體合格率為86.3%（1 442/1 670）；檢出H7亞型抗體合格樣品993份，個(gè)體抗體合格率為59.5%（993/1 670）。具體結(jié)果見表1。

表1 2017年秋季合肥市禽流感抗體采樣檢測(cè)情況

由表1可見，養(yǎng)殖場的H5、H7亞型個(gè)體免疫抗體合格率均高于活禽市場和散養(yǎng)戶，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），但三者的場群合格率差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 不同類型疫苗抗體合格率比較

50個(gè)場群中，免疫（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗的32個(gè)，H5/H9亞型疫苗的1個(gè)，H5三價(jià)疫苗的8個(gè)，H7/H9亞型疫苗的3個(gè)，沒有免疫的6個(gè)（表2）。不同類型疫苗的H5和H7個(gè)體抗體合格率差異極顯著（P＜0.01），但場群合格率沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

將未免疫禽流感疫苗和使用其他亞型疫苗的場群進(jìn)行合并計(jì)算，然后與使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗的場群進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗場群的H5、H7個(gè)體免疫抗體合格率均達(dá)70%以上，分別比未使用的高出20和46個(gè)百分點(diǎn)，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），H5、H7亞型抗體合格率均達(dá)到70%的合格場群占59.4%（19/32），比未使用的高出約32個(gè)百分點(diǎn)，差異顯著（P＜0.05）。不使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗導(dǎo)致禽流感H5和（或）H7群體免疫抗體率低于70%的風(fēng)險(xiǎn)是使用該疫苗的3.8倍（OR=3.8，95%CI：1.1～13.0）。

表2 不同類型禽流感疫苗免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 群間分布

從不同家禽種類看，雞和鴨的H5亞型個(gè)體免疫抗體合格率分別為86.1%、91.4%，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；H7亞型分別為62.1%和0，經(jīng)Fisher氏確切檢驗(yàn)，差異極顯著（P＜0.01）。雞全部合格的場群占50%，鴨的為0，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳細(xì)檢測(cè)結(jié)果見表3。

表3 不同家禽種類禽流感免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.4 空間分布

對(duì)11個(gè)縣（市、區(qū)）的樣品進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)的免疫抗體合格率并不均衡，肥西縣、經(jīng)開區(qū)和長豐縣的H5和H7亞型免疫抗體合格率均達(dá)到了70%以上，而廬陽區(qū)、蜀山區(qū)、新站區(qū)的H5免疫抗體合格率偏低，沒有檢測(cè)到H7亞型抗體（表4）。

3 分析與討論

2017年 秋季開始，全國要求統(tǒng)一用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗，替代重組禽流感病毒H5二價(jià)或三價(jià)滅活疫苗對(duì)家禽實(shí)施免疫[4]。合肥市參考農(nóng)業(yè)部推薦的免疫方案，對(duì)轄區(qū)內(nèi)家禽進(jìn)行了免疫。但從調(diào)查問卷統(tǒng)計(jì)結(jié)果看，場群免疫密度未達(dá)到100%，電話回訪發(fā)現(xiàn)種禽場和蛋禽場遵循本場的免疫程序，未按要求及時(shí)更換（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗。從空間分布看，11個(gè)縣（區(qū)）中，只有3個(gè)縣（區(qū)）的H5和H7個(gè)體免疫抗體水平全部達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求，因此建議未達(dá)標(biāo)的縣（區(qū)）及時(shí)開展免疫情況普查，向有關(guān)養(yǎng)殖企業(yè)宣傳“先打后補(bǔ)”政策，鼓勵(lì)企業(yè)使用政府采購疫苗，并對(duì)散養(yǎng)戶及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)免。

表4 各縣（市、區(qū)）禽流感免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

從個(gè)體免疫抗體合格率看，未使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗或使用其他類型禽流感疫苗的場群，其H5亞型群體免疫合格率雖達(dá)到了70%的標(biāo)準(zhǔn)，但H7亞型未達(dá)標(biāo)；而使用了（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗的場群，其H5和H7亞型個(gè)體免疫抗體合格率均達(dá)到了70%，這與楊澤林等[7]的研究結(jié)果相一致。風(fēng)險(xiǎn)分析也表明，不使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗致使H5和（或）H7個(gè)體抗體合格率達(dá)不到70%的風(fēng)險(xiǎn)較高，說明（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗在臨床使用后產(chǎn)生的免疫保護(hù)效果是可靠的。

從動(dòng)物種類看，雞免疫抗體，特別是H7亞型個(gè)體免疫抗體合格率比鴨的明顯高。這可能是由不同疫苗毒株的免疫原性差異導(dǎo)致的，或者是因?yàn)殡u、鴨個(gè)體對(duì)疫苗免疫應(yīng)答存在差異，具體原因尚需進(jìn)一步探討。

本次檢測(cè)由于抽樣時(shí)選擇的場點(diǎn)較少，而且在進(jìn)行個(gè)體抽樣時(shí)沒有進(jìn)行隨機(jī)抽樣，因此對(duì)不同場群、不同動(dòng)物和不同縣區(qū)間的場群免疫合格率的估計(jì)沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但是，本次檢測(cè)初步了解了合肥市H5和H7亞型免疫抗體的整體水平，對(duì)進(jìn)一步開展禽流感強(qiáng)制免疫工作提供了參考。

4 結(jié)論

本調(diào)查在合肥市隨機(jī)選取50個(gè)場群，采集1 670份血清進(jìn)行H5和H7亞型流感HI抗體檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)使用（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗免疫的場群，其H5、H7亞型個(gè)體免疫抗體合格率均達(dá)到70%以上；而不使用該疫苗的場群，其H7亞型個(gè)體免疫合格率未達(dá)到70%，導(dǎo)致H5和H7亞型免疫抗體不合格的風(fēng)險(xiǎn)是使用此疫苗的3.8倍。檢測(cè)結(jié)果表明，（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗免疫效果較好，可以達(dá)到免疫抗體保護(hù)水平，建議對(duì)群體抗體不合格的養(yǎng)殖場戶進(jìn)行補(bǔ)免。